Productivity of secreted recombinant protein depends largely on its stability in the extracellular environment with protease. Most hGM-CSF produced by transgenic tobacco cell cultures and secreted to the medium was confirmed to be rapidly degraded by protease in medium. To increase the productivity, therefore, various protein stabilizers such as gelling agents such as carrageenan and alginate, polymers, polyols, and amino acids have been tested. The stability of hGM-CSF in spent medium without cells was improved by the presence of gelling agents. However, the reason for the enhanced production by the addition of gelling agents may be due to the increased expression level and permeability rather than stability. The addition of DMSO inhibited the cell growth, but improved specific yield. The others were not effective for stability as well as hGM-CSF production.
The growth of Lactobacillus casei in milk was enhanced by adding yams. Addition of 1% yam(raw or dry) promoted the cell growth and acid production in fermented milk. The milk containing 1% yams formed the complete curd by lactic acid fermentation at 37oC for 19hr while the milk without yams showed the incomplete curd formation. The crude mucilage extracted from a raw yam also enhanced the cell growth as well as the acid production. Addition of mucilage(0.08%) showed the similar effects with adding heat treated yam(1%). The milk fermented by adding various yams showed the high scores for sensory evaluation comparing with the milk fermented without yams. The fermenting ability of Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus kefir and Leuconostoc mesenteroides was evaluated by adding 1% of a dry yam in milk. A dry yam also enhanced the cell growth of L. acidophilus resulting in the high acid production. The viable cell counts of L. casei, L. acidophilus and Leuc. mesenteroides except L. kefir were increased by adding 1% of a dry yam.
Ethylene을 생성하는 호알칼리성 Bacillus sp. AIk-7를 분리 동정하였고, Bacillus sp. AIk-7의 ethylene 생성 경로와 전구 물질을 규명하기 위한 일환으로 이 균주의 intact cell과 cell-free system에서의 다양한 기질의 전환효과를 검토하였다. Intact cell과 cell-free system 모두에서 ethylene 생성을 극대화하기 위한 전환 조건은 3$0^{\circ}C$, pH 10.3으로 조사되었고, 기질 전환 효과를 검토한 결과 methionine(Met)과 1-amlnocyclopropane-1-carboxylic acid(ACC)가 압도적으로 많은 ethylene을 생성하였다. Cell-free system에서 저해제의 영향을 살펴본 결과 EDTA억제 효과로 2가 양이온이 필요함을, AOA 억제효과로 transaminase가 필요함을 알 수 있었다. Azide는 Met에서 ACC로의 단계에선 억제효과가 있었으나, ACC ethylene 전환 단계에선 오히려 활성효과를 보여주었다. 식물에서는 ACC에서 ethylene 과정은 Co$^{2+}$에 의해 저해받는데 반해 Bacillus sp. AIk-7은 Co$^{2+}$에 의해 ACC에서 ethylene과정이 10-70배 활성을 보였다. 이상의 결과를 통해 Bacillus sp. AIk-7에 의한 ethylene 생성 전구체는 Met과 ACC일 가능성이 있다.
Production of ribosomally synthesized antimicrobial peptides usually referred to as bacteriocins is an inducible trait in several gram positive bacteria, particularly in those belonging to the group of lactic acid bacteria. In many of these organisms, production of bacteriocins is inducible and induction requires secretion and extracellular accumulation of peptides that act as chemical messengers and trigger bacteriocin production. These inducer peptides are often referred to as autoinducers and are believed to permit a quorum sensing-based regulation of bacteriocin production. Notably, the peptides acting as autoinducers are dedicated peptides with or without antimicrobial activity or the bacteriocins themselves. The autoinducer-dependent induction of bacteriocin production requires histidine protein kinases and response regulator proteins of two-component signal transduction systems. The current working model for the regulation of class II bacteriocin production in lactic acid bacteria and the most relevant direct and indirect pieces of evidence supporting the model are discussed in this minireview.
본 연구는 환경호르몬(endocrine disruptors)으로 분류되었으며, 제초제로 널리 사용되었던 Dichlorodiphenyltrichloroethane(DDT)가 설치류의 생식세포 중 Leydig 세포의 testosterone(T)생성억제 및 그 관련 작용메카니즘을 규명코자 수행되었다. 먼저 흰쥐의 웅성 생식세포주인 R2C세포에 T의 양 및 aromatase 활성도를 radio immunoassay (RIA)방법을 이용하여 측정하였다. 그 결과 R2C 세포에 황체형성호르몬(LH)를 처리하여 testosterone생성을 증가시킨 후, DDT를 처리한 군들은 대조군에 비하여 농도 의존적으로 T의 양은 감소하였으며, aromatase 활성도는 증가하였다. 또한 DDT자체만 처리한 군에서도 대조군에 비하여 testosterone의 생성이 감소하였다. 이러한 aromatase활성 증가가 estradiol receptor(ER)와의 상호 관련성을 확인하기 위해 ER antagonist인 ICI 182.780를 처리한 후 T의 양 및 aromatase 활성도를 측정한 결과 DDT에 의해 증가된 aromatase활성도가 ICI 182.780에 의해 다시 감소됨을 확인하였다. 또한 DDT에 의해 감소된 T의 양도 ICI 182.780에 의해 다시 회복되었다. In vivo실험으로 흰쥐에 DDT를 직접 투여한 후 정소 내 성 호르몬들을 측정해 본 결과 T의 양은 유의성 있게 감소하였으며, estradiol(E$_2$)의 양은 증가하였으며, aromatase 활성도도 감소하였다. 이러한 결과를 종합해 볼 때 DDT는 aromatase를 감소시키고, 이렇게 감소된 aromatase에 의해 testosterone 생성량을 억제하고, 이러한 DDT의 aromatase의 감소는 ER을 경유하는 것으로 추정할 수 있다.
Diterpenoid 생합성의 중요한 전구체인 geranylg geranyl pyrophosphate의 공급을 위해 외부에서 geraniol을 넣어 주었을 때 taxol을 포함한 일부 taxane의 생산이 증대 됨을 알 수 있었다. 또한 투여 시기와 투여량에 따라 결과가 크게 변화하였다. Camphor와 menthol은 taxol과 같은 terpenoid 계열의 물질이지만 외부에서 공급하였을 때에는 taxol 생산을 증대시키는 효과는 없었다. 외부에서 인위적으로 taxol과 cephalomannine, baccatin ill 를 공급했을 때 모든 경우에서 taxal 생산은 자극받지 않았으며 taxal을 공급했을 경우에는 bacca tin ill 의 생산이, cephalamannine을 공급했을 경우에는 7 -epl- 1 Q-deacetyltaxol의 생산이, 그리고 baccatin ill을 공급했을 경우에는 10-deacetyltaxol의 생산이 각각 가장 많이 중대하였다.
Methanol is a versatile compound that can be biologically synthesized from methane (CH4) by methanotrophs using a low energy-consuming and environment-friendly process. Methylocella tundrae is a type II methanotroph that can utilize CH4 as a carbon and energy source. Methanol is produced in the first step of the metabolic pathway of methanotrophs and is further oxidized into formaldehyde. Several parameters must be optimized to achieve high methanol production. In this study, we optimized the production conditions and process parameters for methanol production. The optimum incubation time, substrate, pH, agitation rate, temperature, phosphate buffer and sodium formate concentration, and cell concentration were determined to be 24 h, 50% CH4, pH 7, 150 rpm, 30℃, 100 mM and 50 mM, and 18 mg/ml, respectively. The optimization of these parameters significantly improved methanol production from 0.66 to 5.18 mM. The use of alginate-encapsulated cells resulted in enhanced methanol production stability and reusability of cells after five cycles of reuse under batch culture conditions.
This study was performed to develop mutant strain using a combination of UV irradiation procedures with protoplast mutagenesis in order to achieve an effective kasugamycin production from Streptomyceskasugaensis. Whenlessthan 1.0g/lof Linoleic acid was used, the cell growth was not inhibited. On the other hand, the cell growth was greatly inhibited when more than 1.6 g/l of linoleic acid was used. Among the various mutant strains, SK-12 was obtained in medium containing 1.6g/l of linoleic acid, showing the highest rate of both cell growth and kasugamycin production. In order to compare kasugamycin production with the SK-12 and the parent strain using soybean oil, cultures were performed in a flask. The production of kasugamycin was increased with the increase time. The maximum kasugamycin concentration was 1.2g/l after 6 days of culture. The product yield from soybean oil was 0.05g/l/g consumed carbon source, which was roughly 5.0 fold higher than the parent strain. These results show that it was effective method for obtaining a mutant resistant to linoleic acid for the effective production of kasugamycin from soybean oil.
The essential operating parameters in virus vaccine production are multiplicity of infection (MOI), harvest time, and infection time. Stimulating agents also can be applied in order to improve vaccine productivity further. We investigated the optimum operating conditions in porcine transmissible gastroenteritis virus (TGEV) vaccine production and the applicability of sodium butyrate (NaBu) as a stimulating agents for the improvement of vaccine productivity. The optimum MOI, infection time, and harvest time for high production of TGEV by swine testicle (ST) cells were found to be 0.0001 pfu/cell, 3 day after cell inoculation, and 24 hpi, respectively. NaBu is known as a histone deacetylase inhibitor that has been widely used for the high expression of recombinant protein using mammalian cells and for the enhancement of virus propagation. So we tried to examine the potential of NaBu as a stimulating agent and to determine the optimum concentration by comparing TGEV titers with different range of NaBu concentration. TGEV titer with 5 mM NaBu was 1.5 times higher than control. Therefore, we concluded that NaBu can be a promising agent for stimulating various vaccine production including TGEV and the optimum NaBu concentration for TGEV production was determined to be 5 mM.
Energy is vital to global prosperity, yet dependence on fossil fuels as our primary energy source contributes to global climate change environmental degradation, and health problems. Hydrogen $(H_2)$ offers tremendous potential as a clean renewable energy currency. Hydrogen has the highest gravimetric energy density of any known fuel and is compatible with electrochemical and combustion processes for energy conversion without producing carbon-based emission that contribute to environmental pollution and climate change. Numerous methodologies have been developed for effective hydrogen production. Among them, the biological hydrogen production has gained attention, because hydrogen can be produced by cellular metabolismunder the presence of water and sunlight. The green alga Chlamydomonas reinhardtii is capable of sustained $H_2$ photoproduction when grown under sulfur deprived condition. Under sulfur deprived conditions, PSII and photosynthetic $O_2$ evolution are inactivated, resulting in shift from aerobic to anaerobic condition in the culture. After anaerobiosis, sulfur deprived algal cells induce a reversible hydrogenase and start to evolve $H_2$ gas in the light. According to above principle, we investigated the effect of induction parameters such as cell age, cell density. light intensity, and sulfate concentration under sulfur deprived condition We also developed continuous hydrogen production system by sulfate re-addition under sulfur deprived condition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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