The aim of this work was to establish the optimal conditions for production of carboxymethylcellulase (CMCase) by a newly isolated marine bacterium using response surface methodology (RSM). A microorganism producing CMCase, isolated from seawater, was identified as Cellulophaga lytica based 16S rDNA sequencing and the neighborjoining method. The optimal conditions of rice bran, ammonium chloride, and initial pH of the medium for cell growth were 100.0 g/l, 5.00 g/l, and 7.0, respectively, whereas those for production of CMCase were 79.9 g/l, 8.52 g/l, and 6.1. The optimal concentrations of $K_2HPO_4$, NaCl, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, and $(NH_4)_2SO_4$ for cell growth were 6.25, 0.62, 0.28, and 0.42 g/l, respectively, whereas those for production of CMCase were 3.72, 0.54, 0.70, and 0.34 g/l. The optimal temperature for cell growth and the CMCase production by C. lytica LBH-14 were $35^{\circ}C$ and $25^{\circ}C$, respectively. The maximal production of CMCase under optimized condition for 3 days was 110.8 U/ml, which was 5.3 times higher than that before optimization. In this study, rice bran and ammonium chloride were developed as carbon and nitrogen sources for the production of CMCase by C. lytica LBH-14. The time for production of CMCase by a newly isolated marine bacterium with submerged fermentations reduced to 3 days, which resulted in enhanced productivity of CMCase and a decrease in its production cost.
Transgenesis is a very powerful tool not only to help understanding the basics of life science but also to improve the efficiency of animal production. Since the first transgenic mouse was born in 1980, rapid development and wide application of this technique have been made in laboratory animals as well as in domestic animals. Although pronuclear injection is the most widely used method and nuclear transfer using somatic cells broadens the choice of making transgenic domestic animals, the demand for precise manipulation of the genome leads to the utilization of gene targeting. To make this technique possible, a pluripotent embryonic cell line such as embryonic stem (ES) cell is required to carry genetic mutation to further generations. However, ES cell, well established in mice, is not available in domestic animals even though many attempt to establish the cell line. An alternate source of pluripotent cells is embryonic germ (EG) cells derived from primordial germ cells (PGCs). To make gene targeting feasible in this cell line, a better culture system would help to minimize the unnecessary loss of cells in vitro. In this review, general methods to produce transgenic domestic animals will be mentioned. Also, it will focus on germ cell engineering and methods to improve the establishment of pluripotent embryonic cell lines in domestic animals.
Journal of the Korean Society of Marine Environment & Safety
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v.17
no.4
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pp.419-427
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2011
The characteristics for hydrogen production and the thermochemical properties of high temperature steam electrolysis(HTSE) device have been numerically analyzed in a two-dimension, steady-state with using the COMSOL $Multiphysics^{(R)}$. The main parameters for the calculation are applied voltage, ASR(Area-specific Resistance), temperature and pressure of the inlet gas flow. The results showed that thermal-neutral voltage was 1.2454 V and rather than the cell temperature increases or decreases with increasing applied voltage by thermal-neutral voltage starting this voltage the temperature in high voltage tended to rise and temperature in the low voltage tended to fall. And with, increasing the values of ASR, temperature inside the cell and the hydrogen production rate were decreased.
The possibility of using Chinese cabbage juice as a substrate for the production of Candida utilis cell mass was explored. Dry cell weight production and cell yield coefficient were 1.35-1.45 g/100 ml undiluted juice and 47-50%, respectively, when C. utilis was grown by shake flask culture at $30^{\circ}C$ for 24 hr on more than three-fold diluted Chinese cabbage juice to make the final sugar content be equal to or less than 1.0%. Supplementation of glucose(2%), $KH_2PO_4(0.2%)$ and $(NH_4)_2SO_4(0.2%)$ to three-fold diluted Chinese cabbage juice did not enhance the dry cell weight yield or the protein content of the yeast cell, while supplementation of yeast extract(0.2%) and peptone(0.2%) increased dry cell weight production and protein content but not as much as the amount of each nutrient added. It was found that Chinese cabbage juice was an excellent substrate for the cultivation of C. utilis.
Using Pseudomonas sp. CH-414, the optimum culture conditions were investigated for the cell growth and the phospholipid production in batch culture by varying pH and aeration rate. With starting the cultivation under the conditions of pH 7.0 and 1vvm, pH was controlled to 6 or 8 at 30 hours of culture time. In the case of changing into pH 6.0, the phospholipid production was increased by ca. 20% with comparison to the case of pH 7.0. However, the biomass and the phospholipld concentration were rapidly decreased after 30 hours of culture time when pH was controlled to 8.0. As the aeration rate was increased, the biomass was increased while the phospholipid concentration was considerably varied and unstable. Especially, the concentration of phospholipid was rapidly decreased with 3vvm of aeration rate. Finally, under the culture conditions of pH 7.0 and 3vvm until 30 hours for the cell growth, which were controlled to pH 6.0 and 1vvm for the stable production of phospholipid beyond that time, the dry cell weight was $18.5g/\ell$ and the phospholipid concentration was $\0.83g/ell$ (45mg/g cell).
The effects of sucrose on cell growth and anticancer drug taxol production were investigated in cell suspension cultures of Taxus cuspidata. The cells were cultured at various concentrations of sucrose (20 to $100g/\ell$). The highest specific growth rata was achieved at $40g/\ell$ of sucrose as 0.076 day-1 and the highest final cell density, 34 g DCW/$\ell$ after 25 days of culture, was obtained at $60g/\ell$ of sucrose. The cell yield(Yx/s) was found to be 0.55g cell/g sucrose and doubling time (Td) was 9.12 day. High concentration of sucrose (80, $100g/\ell$) and the addition of osmoticum enhanced the production of taxol significantly. The maximum taxol production was $1.36mg/\ell$ at $80g/\ell$ of sucrose, which was 0.01% as a specific content.
These experiments were conducted to investigate the effects of Glycyrrhizae Radix extract(GR) on histamine synthesis, lymphocyte blastogenesis in C57BL/6J mice splenocytes, IL-1 production, $Ca^{2+}$ uptake by macrophage-like P388D$_{1}$ cells and plaque forming cell assay against SRBC. Histamine contents, lymphocyte blastogenesis, IL-1 activity, $Ca^{2+}$ uptake and plaque forming cell were determined by enzyme isotope method, [$^{3}$H]-thymidine incorporation, C3H/HeJ mouse thymocytes proliferation, the addition of 5 $\mu$Ci/ml $^{45}Ca^{2+}$ to P388D$_{1}$ cell suspension and assay to sheep red blood cell, respectively. Cytotoxicity, which was expressed as 50% mortality, was occurred by the addition of GR(10$^{-3}$g/ml). Histamine production in mouse spleen cell culture was significantly increased by 48 hour incubation added 0.25$\mu\textrm{g}$/ml of Con A. Con A-dependent T-lymphocyte proliferation was also enhanced by the addition of 0.25 $\mu\textrm{g}$/ml of Con A. GR depressed histamine contents at 10$^{-9}$~10$^{-4}$g/ml. and Con A (0.25 $\mu\textrm{g}$/ml) dependent T-lymphocyte proliferation at 10$^{-5}$~10$^{-4}$g/ml. IL-1 activity was significantly decreased by 10$^{-8}$~10$^{-4}$g/ml of GR. $Ca^{2+}$ uptake was not changed by GR, but antibody production markedly increased at 10.0~50.0 mg/kg of GR. From the above results, it is suggested that GR have immuno-regulatory action; GR decreased cell-mediated immune response and increased antibody production by B lymphocyte at high doses.
Lee, Sang-Eun;Lee, Choon Geun;Kang, Do Hyung;Lee, Hyeon-Yong;Jung, Kyung-Hwan
Journal of Microbiology and Biotechnology
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v.22
no.12
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pp.1673-1680
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2012
In this study, DEAE-corncobs [delignified corncob grits derivatized with 2-(diethylamino)ethyl chloride hydrochloride ($DEAE{\cdot}HCl$)] were prepared as a carrier to immobilize yeast (Saccharomyces cerevisiae) for ethanol production. The immobilized yeast cell reactor produced ethanol under optimized $DEAE{\cdot}HCl$ derivatization and adsorption conditions between yeast cells and the DEAE-corncobs. When delignified corncob grit (3.0 g) was derivatized with 0.5M $DEAE{\cdot}HCl$, the yeast cell suspension ($OD_{600}$ = 3.0) was adsorbed at >90% of the initial cell $OD_{600}$. This amount of adsorbed yeast cells was estimated to be 5.36 mg-dry cells/g-DEAE corncobs. The $Q_{max}$ (the maximum cell adsorption by the carrier) of the DEAE-corncobs was estimated to be 25.1 (mg/g), based on a Languir model biosorption isotherm experiment. When we conducted a batch culture with medium recycling using the immobilized yeast cells, the yeast cells on DEAE-corncobs produced ethanol gradually, according to glucose consumption, without cells detaching from the DEAE-corncobs. We observed under electron microscopy that the yeast cells grew on the surface and in the holes of the DEAE-corncobs. In a future study, DEAE-corncobs and the immobilized yeast cell reactor system will contribute to bioethanol production from biomass hydrolysates.
Gene targeting are very useful tools for the research on the gene function in vivo, mass production of foreign materials and biomedical approach of therapeutic process. But this process is very complicated and necessary highly skilled technique, because it is very different from ES cell origin, genetic background of embryo, and experimental conditions. We investigated the productivity ability of chimeric mouse after aggregation with TT2 ES cells. Increse of ES cell density caused gradual decrease in embryo development in vitro and in th $\varepsilon$ production of chimeric mice in vivo. One million ES cell density for the aggregation was very efficient to produce high percentage chimeric mice in their coat color. These results suggested that appropriate cell density plays a key role in the development and production of chimeric mice by a 8-cell aggregation method.
Lactobacillus brevis BK11 obtained from Baikkimchi was selected to study the effects of culture medium, initial pH, atmosphere composition, incubation temperature and time, and prebiotics on growth and production of antimicrobial substances. Growth and antimicrobial substances production of L. brevis BK11 were significantly higher in MRS broth than in BHI or M17 broth. The production of cell mass, lactic acid, and bacteriocin by BK11 strain was at maximum in MRS broth adjusted to pH 6.0. Aerobic and microaerobic conditions were favored cell growth and antimicrobial substances production than anaerobic condition. Biomass and lactic acid production and antimicrobial substances activity of BK 11 were significantly better at 30 and $37^{\circ}C$ than at $25^{\circ}C$. Growth of the strain BK11 entered the stationary growth stage at 24 h after inoculation, and decreased after 36 h. Antimicrobial activities of cell-free culture supernatant and bacteriocin solution were highest when cultured in MRS broth with an initial pH 6.0 for 24-30 h at $37^{\circ}C$. In addition, the highest cell number and lactic acid and bacteriocin production were recorded in the presence of 1 and 2% (w/v) fructooligosaccharide (FOS), however, inulin and raffinose did not affect biological and physicochemical characteristics and antimicrobial activities of L. brevis BK11 cultures. According to these results, production of antimicrobial substances by L. brevis KB11 was closely associated with cell density. Under optimal conditions for antimicrobial substances production, L. brevis BK11 effectively inhibited the growth of Helicobacter pylori ATCC 43504.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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