• 생명과학회지
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• 제6권4호
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• pp.250-263
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• 1996

In this study Carotenoprotein from Styela clava were extracted, and purified by ammonium sulfate fraction, Sephadex G- 200 gel chromatography and DEAE-cellulose ion exchange chromarography. The purified carotenoprotein from styela clava had absorption maxima of 487nm, 463nm and 280nm, and the carotenoid liberated from carotenoprotein had 478nm and 452nm with inflexion. One miligram of caroteno-protein contained 0.35 $\mu$g of carotenoid. The carotenoprotein had an approximate molecular weight of 398 kDa (gel filtration). SDS-PAGE showed only a single polypeptide chain with a molecular weight of 62.4 kDa. The amino acid composition of the carotenoprotein were mainly glutamic acid(11.48%), valine(10.75%), leucine (10.45%), aspartic acid(9.94%), while cysteine and tryptophan were not found. The carotenoprotein contained lipid as structure units. In the carotenoprotein, the major fatty acids were oleic acid, plamitoleic acid and palmiunsaturated fatty acids 33.6%, saturated fatty acids 18.6%. In addition, the levels of higher unsaturated fatty acids were high as much as 30.8% of the total fatty acids. Carotenoid was extracted from the carotenoprotein by acetone. Thin layer chromatography showed only carotenoid to be present. Its chemical reactivities and spectroscopic properties were studied and elucidated as astaxanthin.

• 생명과학회지
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• 제5권4호
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• pp.170-180
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• 1995

A carotennnoprotein from the skin of Ascidian(Halocynthia roretzi) was extracted by Triton X-100 and purified by ammonium sulfate fraction, SephadexG-200 charomatography and DEAE-cellulose ion exchange chromatography. The carotenoprotein was redwith broad $\lambda$$_{max}$ between 495, 467 and 318nm. The red carotenoprotein had an approximate molecular weight of 326KDa(gel filtration). SDS-PAGE indicated the presence of two polypeptodes of 84.1KDa and 74.4KDa, with different mobility in polyacrylamide gel electrophoresis. In the presence of denaturing agents such as organic solvent aand extreme pH, the red complex readily disociates to liberate the yellow carotenoid($\lambda$$_{max}$ 452nm) and a colourless apoprotein. The amino acid composition of carotenoprotein were mainly threonine(15.2%), aspartic acid(12.2%), glutamic acid(11.9%) and serine(9.6%), while proline was not found. The carotenoprotein consisted of lipids as structure units. Its major fatty acids composion were C$_{18:1}$, C$_{16:1}$, and C$_{16:0}$. The monounsaturated fatty acids(41.5%) contained abundant content compared to other fatty aacids(polyunsaturated fatty acids 37.4%, saturated fatty acids 20.6%).

• 대한화학회지
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• 제38권8호
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• pp.608-615
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• 1994

양식산 새우(P.orientalis)로부터 0.05M 인산염 완충용액(pH 7.0)으로 carotenoprotein을 추출하고 DEAE-셀룰로오스, 반포화 황산암모늄 친전 및 GPC로 $\alpha$-form과 ${\beta}$-form 두 종류의 carotenoprotein을 분리 정제하였다. 최대 흡수파장은 ${\lambda}_{max}$= 480, 409, 318 및 280 nm였다. SEM과 XRD로 분자구조를 관찰하였으며, GPC와 PAGE로 측정한 분자량은 $\alpha$-form이 170KDa으로 분리되는 불균일한 이합체 구조였다. carotenoprotein 복합체의 아미노산, 중성지질, 인지질 및 유리지방산 조성을 분석하였고, 여러 가지 유기화학 반응과 UV/Vis,IR, $^1H$-NMR, MS 등으로 carotenoids분자구조를 측정한 결과 lipid-protein의 보호그룹으로서는 astaxanthin과 그 ester임이 확인되었다.

• 생명과학회지
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• 제5권4호
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• pp.181-189
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• 1995

Carotenoids liberated from the red carotenoprotein from the skin of ascidian(Halocynthia roretzi)were developed on TLC, and two bands were obtained with different Rfvalues. Their chemical reactivities and spectroscopic properties were studied and elucidated as astaxanthin diester and astaxanthin monoester. After saponification of carotenoid ester, GC analysis was performed. The carotenoid ester contained oleic acid, palmitic acid and palmitoleic acids as 50% of total amount, and had higher content unsaturated fatty acid including eicosapentanoic acid than saturated fatty acid.

• Applied Biological Chemistry
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• 제41권1호
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• pp.31-41
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• 1998

우렁쉥이의 육에 존재하는 carotenoprotein을 추출하여 이온교환수지 및 겔크로마토그래피를 이용하여 정제하였으며, 정제된 carotenoprotein의 분자량, pH 안정성, 열안정성, 변성제의 영향, 아미노산 조성 및 지방산 조성을 분석하였다. Carotenoprotein의 정제도는 5배, 수율은 2.9%였으며, 1 mg당 $0.15\;{\mu}g$ carotenoid가 함유되어 있었다. Carotenoprotein의 최대 흡수파장은 UV/Vis 스펙트럼에서 463 nm 및 439 nm였으며, 분자량은 64.4 kDa으로 단일 polypeptide로 이루어져 있었다. Carotenoprotein은 pH 7.0부근의 중성영역에서 안정하였고, 열안정성은$65^{\circ}C$에서 2시간 이내에 90%이상 유지하였으며, SDS 변성제에 의해 5 nm 단파장 영역으로 이동하였다. Carotenoprotein의 아미노산 조성은 Gly, hsn, Gln 및 Ser의 함량이 전체 아미노산의 35.3%로 전체적으로 산성의 성질을 보였으며, 구성지방산 조성의 함량은 monoene산이 45.2%로 가장 많았고, 다음으로 포화지방산 및 polyene산이 각각 38.1% 및 11.7%였다.

• 한국수산과학회지
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• 제27권5호
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• pp.482-494
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• 1994

우리나라에서 대량 생산되고 있는 진주담치 근육에서 Triton X-100를 사용하여 carotenoprotein을 추출, 정제하여 그 특성을 실험한 결과를 요약하면 다음과 같다. Carotenoprotein(${\lambda}_{max}=462nm$)를 $20\%$(w/v) $(NH_4)_2SO_4$, DEAE-cellulose 이온교환수지 그리고 Sephacryl S-300 겔 크로마토그래피를 통해 정제한 결과, 정제도는 5배 증가하였고 수율은 $1.85\%$였으며, carotenoprotein의 분자량은 약 372KDa(gel filtration)이었고, SDS-PAG 전기영동으로 단백질의 subunit를 확인한 결과, 60KDa($23.70\%$), 46.9KDa($9.14\%$), 26KDa($49.14\%$) 및 13KDa($18.02\%$)로 이루어져 있었다. Carotenoprotein의 안정성은 pH 4.0 이하의 강산 및 pH 10.0 이상의 강알칼리에서는 단백질이 불안정하였고, SDS 변성제를 $0.2\%$(w/v)되게 첨가하여 녹인 후 가시부 영역($400{\sim}600nm$)에서 최대파장 변화를 보면 462nm에서 456nm로 약 6nm 단파장 영역으로 이동한 것을 알 수 있었다. Carotenoprotein의 구성아미노산 조성은 threonine이 $35.90\%$로 다른 아미노산에 비해 함량이 높았으며, 필수아미노산과 소수성 아미노산의 함량은 전체아미노산 함량의 각각 $62.76\%$와 $25.02\%$를 차지하였고, methionine, histidine 및 proline은 존재하지 않았다. Carotenoprotein 1g당 총지질의 함량은 256mg였고, 그 구성지방산의 조성은 polyene산이 $62.4\%$로 가장 많았고 다음으로 포화산($19.58\%$)및 monoene산($18\%$) 순이었다. 특히, 16:4n-3의 조성비가 $33.90\%$로 상당히 높게 나타났고, EPA, DHA 등 w3 계의 장쇄(長鎖)고도불포화지방산의 조성비가 $22.13\%$로 높게 나타났으며, 양적으로 많은 지방산은 포화산 중에는 palmitic acid($C_{16:0}$), monoene산 중에서는 palmitoleic acid($C_{16:1}$), polyene산 중에서는 hexadecatetraenoic acid($C_{16:4}$), eicosapentaenoic acid ($C_{20:5}$), docosahexaenoic acid($C_{22:6}$) 등이 함량이 많았다. Carotenoprotein으로부터 분리한 총 caroteoid 함량은 $8.80mg\%$였고, 주 carotenoid는 mytiloxanthin($74.79\%$), 3,4,3'-trihydroxy-7',8'-didehydro-${\beta}$-carotene($18.26\%$)였다.