• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제15권8호
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• pp.1091-1097
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• 2002

Capacitated goat spermatozoa generated diacyl glycerol (DAG) when suspended in Krebs-Ringer bicarbonate medium and induced by progesterone or $Ca^{2+}$ ionophore A23187. We have added Sn-1-oleoyl-2-acetyl glycerol externally, to study the effect of DAG in goat sperm acrosomal exocytosis. Addition of neomycin abolished the DAG generating capacity of progesterone in a dose dependent manner, suggesting the involvement of a phosphoinositidase C activated phospholipase C system in the process. The level of increase in phosphatidic acid was considerably low and was produced well after the DAG generation thereby suggesting the involvement of a DAG kinase which phosphorylates DAG to produce PA. The inhibition of progesterone mediated effect by inhibitors of $GABA_A/Cl^{-}$ channel and $Ca^{2+}$ channels further supports the evidence that the events of binding of agonist to the receptor(s), opening of $Ca^{2+}$ channels and the activation of phospholipase C are reconciled to perform the function of acrosome reaction in capacitated goat spermatozoa.

• Journal of Plant Biology
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• 제37권3호
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• pp.263-269
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• 1994

Involvement of ethylene and Ca2+ on the induction of phenylalanine ammonia-lyase (PAL) was investigated in Daucus carota L. suspension culture system. Ethylene production started to increase about 3 h after glucan treatment. And the maximal induction of ethylene was preceded by PAL induction by 30 min. After the treatment of ethrel, PAL activity was increased. When cells were treated with glucan and Co2+, PAL activity was simultaneously reduced. Ethylene production was reduced dramatically in calcium-free medium, even though glucan was treated. PAL activity and ethylene producton was inhibited conspicuously when ethylene glycolbis($\beta$-aminoethyl ether) N,N,N',N'-tetraacetic acid (EGTA) was treated with glucan. Verapamil and trifluoperazine also inhibited PAL activity. When cells were treated with calcium ionophore A23187, PAL activity was increased in nontreated medium. We report here PAl activity is increased in related to ethylene production and involvement of Ca2+ in glucan-treated carrot suspension cells.

• Biomolecules & Therapeutics
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• 제16권1호
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• pp.21-27
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• 2008

Clotrimazole (CLT), a potent antifungal drug, is known to inhibit tumor cell proliferation. In the present study, we examined the role of intracellular $Ca^{2+}$ in CLT-induced cell cycle arrest of colon adenocarcinoma HT29 cells. CLT inhibited growth of HT29 cells in a concentration-dependent manner, which was associated with inhibition of cell cycle progression at the G(1)-S phase transition and an increase in the expression of cell cycle inhibitor proteins p27 and p53. CLT also suppressed the $Ca^{2+}$ overload by A23187, a calcium ionophore, suggesting its role in modulation of intracellular $Ca^{2+}$ concentration in HT29 cells. The simultaneous application of CLT and A23187 with addition of $CaCl_2$ (1mM) to the medium significantly reversed CLT-induced p27 and p53 protein level increase and growth suppression. Our results suggest that CLT induces cell cycle arrest of colon adenocarcinoma HT29 cells via induction of p27 and p53, which may, at least in part, be mediated by alteration of intracellular $Ca^{2+}$ level.

• The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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• 제4권6호
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• pp.463-469
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• 2000

It has been well known that 4-aminopyridine (4-AP) has an excitatory effect on vascular smooth muscle due to causing membrane depolarization by blocking $K^+-channel$. However, we observed that 4-AP had an inhibitory effect on the mesenteric artery of rat. Therefore, we investigated the mechanism of 4-AP-induced vasorelaxation. The mesenteric arcuate artery and its branches were isolated and cut into ring. The ring segment was immersed in HEPES-buffered solution and its isometric tension was measured. 4-AP $(0.1{\sim}10\;mM)$ induced a concentration-dependent relaxation, which was unaffected by NO synthase inhibitor, $N^G-nitro-L-arginine$ methylester $(100\;{\mu}M)$ or soluble guanylate cyclase inhibitor, methylene blue $(100\;{\mu}M).$ Glibenclamide $(100\;{\mu}M)$, ATP-sensitive $K^+$ channel blocker, did not exert any effect on the 4-AP-induced vasorelaxation. 4-AP relaxed the sustained contraction induced by 100 mM $K^+$ or $Ca^{2+}$ ionophore, A23187 $(100\;{\mu}M)$ in a dose-dependent manner. In addition, 4-AP significantly decreased the phasic contractile response to norepinephrine in the absence of extracellular $Ca^{2+}$. However, 4-AP did not block the $^{45}Ca$ influx of rat aorta. From the above results, we suggest that 4-AP may not block the $Ca^{2+}$ influx through $Ca^{2+}-channel,$ but act as a nonspecific vasorelaxant in arterial smooth muscle.

• Applied Biological Chemistry
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• 제39권3호
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• pp.189-194
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• 1996

세포의 활성을 좌우하는 세포질내의 칼슘농도 조절기작을 이해하기 위하여, 전갈 Leiurus quinquestriatus hebraeus (Lqh) 에서 얻은 전갈독소의 세포내 칼슘농도 조절기능과 관련된 효소들의 활성변화에 미치는 효과를 조사하였다. 칼슘펌프와 칼슘채널 효소활성은 돼지의 호흡기 상피세포에서 분리된 마이크로솜에서 측정되었으며, 전갈 독소 Lqh는 온전한 마이크로솜 시료의 경우 총 ATPase의 활성을 약 32% 증가시켰고, Triton X-100나 $Ca^{2+}$ ionophore A23187을 처리한 마이크로솜 시료에서는 총 ATPase의 활성을 약 28% 증가시켰다. Lqh 독소에 의한 ATPase의 활성증가는 $Ca^{2+}-ATPase$의 특이적 저해제인 thapsigargin의 처리로 완전히 저해되었으며, 이것으로 전갈독소 Lqh가 마이크로솜에 위치한 $Ca^{2+}-ATPase$의 활성을 특이적으로 증가시킴을 확인할 수 있었다. 이러한 결과는 결국 Lqh 독소가 $Ca^{2+}-ATPase$의 활성화에 의해 마이크로솜의 $^{45}Ca^{2+}$ uptake를 증가시킬 것이라는 예상을 가능하게 하나, 실제로는 Lqh의 처리가 마이크로솜의 $^{45}Ca^{2+}$ uptake를 오히려 약 30% 감소시켰다. 예상되었던 Lqh에 의한 $^{45}Ca^{2+}$ uptake의 증가는 오직 $InsP_3$ 수용체 칼슘채널의 저해제인 Heparin의 존재시에만 얻어졌다. 이것은 Lqh 독소가 $Ca^{2+}-ATPase$의 활성화에 따른 $^{45}Ca^{2+}$ uptake를 증가시킴과 동시에 또한 $^{45}Ca^{2+}$ release를 유발시킴을 의미하며, Lqh 독소는 실제로 $InsP_3$에 의한 칼슘채널 활성화시에 얻어지는 것과 같은 정도의 $^{45}Ca^{2+}$ release를 유발시킴이 확인되었다. 위의 결과들로부터 Lqh독소에는 적어도 두 가지의 활성성분이 포함되어 있음을 알 수 있었고, 그중 하나는 $InsP_3$ 수용체 칼슘채널의 활성을, 다른 하나는 칼슘펌프의 활성을 촉진시킨다는 결론을 얻었다. 현재 Lqh 독소의 활성성분에 대한 화학적, 전기생리학적 특성들이 연구되어지고 있다.

• 한국양식학회지
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• 제11권2호
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• pp.241-248
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• 1998

Vitellogenin(VTG) 합성에 미치는 A23187의 영향을 무지개송어의 배양 간세포를 이용하여 실험을 행하였다. 간세포는 2일간 배양한 후, Estradiol-$17^{\beta}$($E_2$, $2{\times}10^{-6}$M) 및 A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)을 첨가하여 7일간 배양하였다. 그리고, $E_2$에 의한 VTG 합성시의 A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187이 미치는 영향에 대해서도 조사하였다. A23187 ($10^{-7)$~$10^{-5}$M)의 첨가에 의해 간세포에서의 VTG 합성은 농도의 증가에 따라 감소하였다.$E_2$에 의해 합성된 VTG는 A 23187 ($10^{-5}$M)의 첨가에 의해 대조군($E_2$만의 첨가)의 약 18%로 유의하게 감소하였다. 그러나,$E_2$제거로는 대조군의 약 47% 밖에 감소되지 않았다. 이러한 결과로 보아, 세포내의 저장 Ca은 번역 단계 또는 번역 후 단계를 조절함으로써, VTG 합성을 조절하는 것으로 추정된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제40권3호
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• pp.202-208
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• 1997

콩 뿌리조직의 이온 흡수와 관련된 생리활성을 조사하기 위하여 뿌리조직으로부터 마이크로솜을 분리하였고, 마이크로솜 ATPase (이온점프) 활성을 분광학적 방법인 enzyme-coupled 분석방법에 따라 측정하였다. 마이크로솜 ATPase의 활성에 미치는 여러 가지 이온의 효과 또는 ATPase의 이온선택성을 조사하기 위하여 $10mM\;Na^+$과 $120mM\;K^+$을 포함하는 대조용액에서의 평균활성을 측정한 결과 190 nmol/min/mg protein으로 나타났다. 대조활성에 비하여 $Na^+$을 포함하지 않은 $130mM\;K^+$ 용액에서는 활성이 150%로 증가하였고, $K^+$을 포함하지 않은 $130mM\;Na^+$ 용액에서는 활성이 63%로 감소되었다. 반응용액의 $K^+$ 농도에 따른 활성변화를 측정한 결과, ATPase의 활성은 외부용액의 $K^+$ 농도 증가에 따라 활성이 증가됨을 알 수 있었다. 또한 마이크로솜 ATPase 활성은 반응용액의 pH 감소에 따라 증가되어 $pH\;6{\sim}7$에서는 비교적 높은 활성을 보였으나, pH 8 이상에서는 급격히 활성이 감소되었고, pH 9에서는 80%이상의 활성이 저해되었다. $Ca^{2+}$에 의한 이온펌프의 활성조절 여부를 평가하기 위해서 마이크로솜 내부 및 외부의 $Ca^{2+}$에 의한 ATPase 활성변화를 측정하였다. 마이크로솜 ATPase의 활성은 반응액의 $Ca^{2+}$ 농도가 낮아질수록 증가하여 $10^{-9}M$ 이하에서 최대활성이 관측되었고, $Ca^{2+}$ 농도가 증가할수록 활성은 감소하여 $500\;{\mu}M$ 전후에서 50%의 활성이 감소하였다. 또한 ATPase의 활성은 마이크로솜 내부의 $Ca^{2+}$ 농도증가에 의해서 저해되어, $Ca^{2+}\;ionophore\;A23187$처리에 의한 외부의 $Ca^{2+}$ 유입에 의해서 약30%의 활성감소를 보였으며, EGTA 처리에 의한 $Ca^{2+}\;chelation$에 의해서 마이크로솜 내부의 $Ca^{2+}$ 농도가 감소되었을 때, ATPase 활성은 증가하였다. 위의 조건에서 실제 마이크로솜 내부로의 $Ca^{2+}$ 유입 여부는 $‘Ca^{2+}’$를 이용하여 확인하였다. 이상의 결과는 마이크로솜 막에 위치한 ATPase의 내부 및 외부에 $Ca^{2+}$에 의한 효소활성 조절부위가 각각존재함을 시사한다.

• Reproductive and Developmental Biology
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• 제33권1호
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• pp.49-54
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• 2009

The current study was designed to evaluate the effects of the reactive oxygen species (ROS) generated with a xanthine (X) and xanthine oxidase system (XO) on sperm function and DNA fragmentation in porcine spermatozoa. ROS were produced by a combination of $1,000{\mu}M$ X and 50 mU/ml XO. The ROS scavengers such as superoxide dismutase (SOD) (200 U/ml) and catalase (CAT) (500 U/ml) were also tested. Spermatozoa were incubated for 2 hours in BWW medium with a combination of X-XO supplemented with or without antioxidants at $37^{\circ}C$ under 5% $CO_2$ incubator. Ca-ionophore-induced acrosome reaction, the proportion of swollen spermatozoa under hypo-osmotic condition, malondialdehyde formation for the analysis of lipid peroxidation, and the proportion of DNA fragmentation were determined after 2 hours incubation. The action of ROS on porcine spermatozoa resulted in decreased Ca-ionophore-induced acrosome reaction and membrane integrity, increased the formation of malondialdehyde, and the proportion of sperm with DNA fragmentation(p<0.05). The toxic effects caused by ROS were completely alleviated by CAT in terms of sperm function and characteristics, however SOD did not serve the same scavenger effect as CAT. To conclude, the ROS can cause significant damage to porcine sperm functions and characteristics, which can be minimized by the use of antioxidants.

• 한국동물학회지
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• 제32권1호
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• pp.40-47
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• 1989

계배 근원세포의 배양 배지에 calcium ionophore A23187이나 EGTA를 배양 24시간에 첨가함으로서 초래된 세포내 칼슘 농도의 변화는 근원세포의 분화과정에 상당한 영향을 미쳤다. 배양 24시간에 A23187이나 EGTA를 첨가한 후 배양 48시간, 72시간, 및 96시간에 각각 세포를 [35S]methionine으로 1시간 표지시킨 후 수확하여 2차원 전기영동법으로 단백질을 분리시켰을 때, 일부 단백질은 배양 조건에 따라 합성 양상을 달리함을 보였다. 배양 24시간에 처리한 A23187과 calcium-activated neutral protease는 대조군에 비해 세포융합을 촉진시켰으나 동일 시기에 처리된 phosphoprotein을 정량함으로써 조사하였을 때, A23187이 배양 초기에는 대조군에 비해 약간 이 효소의 활성도를 높이는 효과를 보였으나 세포융합이 완성된 시기인 96시간에는 대조군에 비해 활성도를 높이는 효과를 보였으나 세포융합이 완성된 시기인 96시간에는 대조군에 비해 활성도의 차이를 나타내지 않았다. A23187 및 calcium-activated neutral protease에 의한 세포융합의 촉진, 그리고 A23187에 의한 protein kinase C 활성도의 증가가 모두 근원세포의 융합이 활발히 진행되는 시기인 배양 48-72 시간에 관찰됨을 볼 때, 세포내 칼슘의 농도는 protein kinase C 및 calcium-activated neutral protease와 상호연관을 가지면서 세포분화에 관여하는 것으로 사료된다.

• Asian-Australasian Journal of Animal Sciences
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• 제10권1호
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• pp.15-19
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• 1997

An experiment was conducted to clarify the effects of dietary supplementation of monensin or salinomycin on mineral utilization of growing goats. Six goats weighing 10.54 kg initially were randomly assigned to treatments in a replicated $3{\times}3$ Latin square design. Treatments were a basal diet, basal plus 30 ppm monensin and basal plus 20 ppm salinomycin on a DM basis. The basal diet was a mixture of Italian ryegrass wafer, soybean meal, ground maize and $CaCO_3$ with DM proportions of 50, 13.76, 36 and 0.24%, respectively. Each period lasted for 21 days, and the apparent absorption and retention of minerals were measured during the last 7 days of each period. Salinomycin supplementation improved NDF digestibility and plasma glucose. The apparent absorption and retention of Ca, P, Mg, Na and K were not influenced by the treatments. The concentrations of plasma Ca, P, Mg, Na, K and Cl were similar in all treatments. The ionophore supplementation had no significant effect on acid excretion. The results suggest that 30 ppm monensin or 20 ppm salinomycin supplementation is not effective in improving the utilization of Ca, P, Mg, Na and K in growing goats fed a diet composed of the 50% concentrate.