This investigation was intended to find out the estrogenic effect of chlortetracycline (CTC) on vitellogenin induction in adult male Japanese medaka (Oryzias latipes). Vitellogenin (Vtg) produced in male fish has been used to as one of a biomarker of endocrine disrupters. The positive control was $17{\beta}-estradiol$ (E2) that induced Vtg in male fish. As a result, male and female fish were exposed to 0.1, 1, 10 and 100 ppm of CTC. Western blot results showed approximately 205 kDa, that is similar to myosin at high molecular weight range Sigma maker. Vtg band was showed fainted to 10 and 100ppm for chlortetracycline. Vtg concentration of CTC was qunatified by total protein quantification and ELISA. Exposure of the male fish to CTC of 0.1, 1, 10 and 100 ppm produced Vtg concentrations of 0.24, 0.12, 7.61 and 40.02%o, respectively, that value was elevated than control male fish (0.14%o). CTC exerted as a Vtg inducer in male fish from 10 ppm, but it was a reducer in female fish from 0.1 ppm level. The results say that vitellogenin induction patterns alter in male medaka treated with CTC, and that CTC may caused endocrine disruption in fish.
The effects on CTC (T1) and CTC, Sulfathiazole and Penicillin Combination (T2) medication in feed through one life cycle of pigs, namely, weaning, mating, farrowing, lactation, growing, finishing and slaughter, were tested under local condition. In sow phase, productivity and the number of microflora in urine before and after medication of CTC were studied and average daily gain and feed conversion rate were checked during growing and finishing period. All pigs reached at 155 days old were slaughtered for pathological examination. 1. Litter size, farrowing rate and survival rate at birth were improved by CTC medication from weaning to 21th day after mating and mortality of piglet at weaning, 25 days after farrowing, was reduced in the CTC medication group, but no siginificant. 2. The number of microflora in the sow urine was changed with the medication at 200ppm of CTC in feed. In particular, the number of E coli, Samonella and Staphylococci were reduced by CTC medication. 3. The average daily gain and feed conversion rate of grower and finisher pigs was improved significantly in both treated groups, most in the high level CTC (T1) medicated group and was lowest in the control group. 4. The number of infected lungs was reduced not significant by both treatments (as % pneumonic lesions Co 66.7%, T1 47.1%, T2 31.4%) and the severity of lung lesions was significantly reduced by both high level of CTC and CTC combination medication in feed. 5. Although there were no statistical differences in atrophic rhinitis based on turbinate scores among the 3 groups, the number of mild and moderate (Grade 2 and 3) infections was higher in the control group (9/36) than in the treated groups (T1 2/34 & T2 4/35).
본 연구는 희토(rare earth RE)와 Chlortetracycline (CTC)의 육계사료에 대한 첨가 효과를 구명하고자 실시하였다. 실험은 pen별 평균 개시시 체중이 비슷하도록 15수씩 평사로 배치하여 4처리구 4반복으로 희토와 항생제-CTC, 그리고 두 가지 혼용였을 경우의 효과를 관찰하고자 0, RE 100 ppm, CTC 200 ppm, RE100 ppm+ CTC200 ppm으로 하였다. 증체량, 사료 섭취량, 사료 요구율이 실험 기간중에 조사 되었으며, 실험 종료후 도살하여 체중에 대한 간 및 복강 지방의 비율과 장내미생물의 변화를 조사하였다. 시험 결과, RE 첨가구가 대조구보다 높은 증체량을 나타냈고(P<0.05), 사료 섭취량은 대조구에 비해 현저히 낮았으며(P<0.05), 사료 요구율도 대조구에 비해 16.08% 개선된 효과를 나타냈다(P<0.05). 생체중에 대한 복강지방의 비율도 RE 첨가구가 대조구 뿐만 아니라 기타 처리구에 비해서도 현저히 감소되었다(P<0.05). 생체중에 대한 간장 무게의 비율은 모든 처리구가 대조구와 비슷한 수준을 보였다. 장내미생물은 회장과 맹장의 미생물에 대한 관찰 결과, 희토첨가로 총 균수와 E. coli의 증식을 현저하게 억제되었으며(P<0.05), Salmonella는 수가 감소되는 경향을 보였으며, Lactobacillus의 수는 차이가 없었다. 이러한 결과 희토는 육계사료에서 항생제를 대체할 가능성을 보였으며, 희토의 첨가로 생산성이 개선되고 복강 지방 감소되는 경향을 보였으며, 장내 병원성 미생물을 억제하는 결과를 보였다.
Chlortetracycline (CTC) is one of the most important compounds in antibiotic production, and its distribution has been widely investigated due to health and ecological concerns. This study presents systematic approach to optimize the high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry for analyzing CTC in a multiple reaction monitoring mode ($479{\rightarrow}462m/z$). One-factor-at-a-time (OFAT) test with response surface analysis (RSA) was used as optimization strategy. In OFAT tests, the fragmentor voltage, collision energy, and ratio of acetonitrile in the mobile phase were selected as major factors for RSA. The experimental conditions were determined using a composite in cube design (CCD) to maximize the peak area. As a result, the partial cubic model precisely predicted the peak area response with high statistical significance. In the model, the (solvent composition) and (collision $energy^2$) terms were statistically significant at the 0.1 ${\alpha}$-level, while the two-way interactions of the independent variables were negligible. By analyzing the model equation, the optimum conditions were derived as 114.9 V, 15.7 eV, and 70.9% for the fragmentor voltage, collision energy, and solvent composition, respectively. The RSA, coupled with the CCD, offered a comprehensive understanding of the peak area that responds to changes in experimental conditions.
Evaluation of viability and capacitation of canine sperm is of great importance to deter- mine good condition for freezing canine semen and consequently to improve conception rate by arti-ficial insemination. Semen were collected from nine male dots which had been proved to be fertile in the post and the semen were treaded for freezing procedure. Semen were thawed at 37$^{\circ}C$ for 30 seconds. In this study, hypoosmotic swelling(HOS) test and chlortetracycline(CTC) test were per- formed to evaluate post-thaw viability and capacitated status of sperm, respectively. In HOS test far canine sperm, the highest percentage of curled sperm was shown at 60 mOsm. In HOS test for canine semen, there were considerably significant correlation between HOS values and sperm motil- ity(r=0.9064, p<0.01) and converse correlation between HOS values and sperm abnormality(r=- 0.6905, p<0.05). The sperm viability and HOS-values for chilled extended semen were significantly decreased from 0 to 72 hours during storage at 5$^{\circ}C$ (p<0.05). Of the media added to canine semen after thawing, the most capacitated sperm were shown in CCM(p<0.01), and then This Fructose Cit- rate(TFC) medium with calcium from 3 hours after incubation with media. It was concluded that HOS test is of great value to determine the viability and motility of canine sperm, whereas CTC test is usable to determine the capacitated status. Consequently, both tests were thought to be useful as the additional tests to standard semen analysis.
This study presents a sensitive and reliable method for determining tetracycline (TC), oxytetracycline (OTC), and chlortetracycline (CTC) residues in shrimp samples. A two-step process involving liquid-liquid extraction (LLE) followed by solid-phase extraction (SPE) was developed prior to HPLC analysis. The target analytes were effectively extracted using EDTA/McIlvaine buffer (pH 4.0): methanol (80:20, %v/v), with subsequent clean-up using a C18 SPE cartridge. HPLC separation was conducted on a C18 column (250 mm × 4.6 mm i.d., 5 ㎛) at 30 ℃, using 0.01 % trifluoroacetic acid (A) and acetonitrile (B) as the mobile phase. A gradient elution protocol was applied, transitioning from 85(A):15(B) %v/v to 70(A):30(B) %v/v at 7 min, with a 5 min hold, followed by adjustment to 85(A):15(B) %v/v for 13-14 min. The detection was performed using photodiode array (PDA) at 365 nm with a flow rate of 1.0 mL/min. The calibration curves exhibited good linearity within a concentration range of 0.4-6.0 ㎍/mL (R2 > 0.995). The limits of detection (LOD) for TC, OTC, and CTC in shrimp were 0.034, 0.029, and 0.021 ㎍/mL, respectively. The limits of quantitation (LOQ) for TC, OTC, and CTC were found to be 0.114, 0.097, and 0.071 ㎍/mL, respectively. Recoveries of TC, OTC, and CTC from spiked shrimp samples ranged from 91.0 % to 95.5 %, 92.4 % to 97.2 %, and 93.3 % to 96.6 %, respectively. This method was successfully applied to the determination of TC, OTC, and CTC residues in shrimp samples sourced from various local markets.
육류중의 Tetracycline계 항상물질의 잔류량을 조사하기 위하여 시판 중인 쇠고기, 돼지고기. 닭고기 3종을 각각 3개시료씩 구입하여 Tetracycline(TC), Oxyteracycline(OTC) , Chlortetracycline(CTC) 의 잔류량을 분석하였으며, 아울러 잔류 항생물질의 조리가열에 의한 분해감소량을 조사한 결과는 다음과 같다. 1. 시판 육류중의 OTC 및 CTC 잔류량: OTC 잔류량은 닭고기의 경우 A 시료에서 흔적정도, B시료에서 불검출 , C시료에서는 0.09mg/kg이 검출되었다. 쇠고기 3개 시료에서는 C 시료에서만 돼지고기 A 및 B에서는 흔적정도로 검출되었다. CTC은 닭고기 A,C시료에서 0.14, 0.02mg/kg으로 각각 검출되었으며, 쇠고기와 돼지고기의 경우에는 쇠고기 B에서만 0.01mg/kg의 잔류량이 확인되었다. 2. TC 잔류량 : 쇠고기와 돼지고기의 Tc 분석에는 육류 자체에서 유래된 성분의 peak와 TC의 peak가 중복되어 잔류량의 판단을 방해하였으나, 닭고기의 경우에는 이러한 방해 성분이 없었으며, 3개중 A 시료에서만 0.01mg/kg의 잔류량이 검출되었다. 3. 가열방법별 항생물질의 분해정도 : 가장 고온가열인 굽기에서, 특히 TC 및 OTC의 분해가 많았다.. 4. 가열시간에 따른 분해정도 : 자불에서는 상당시간이 경과하여도 미량의 분해가 있었으나, 굽기에서는 시간경과에 따라 분해량의 현저한 증가를 보였다. 굽기와 같은 조리 효과를 가진 전자오븐 가열에서는 덜 분해되었다. 가열에 대한 각 항생물질의 내열성은 CTC>OTC>TC 의 순으로 나타났다.
현재 우리나라에서 널리 이용되고 있는 미생물학적 검사법을 이용하여 TCs 계열의 모화합물과 epimer에 대한 검출 그리고 이를 통한 모화합물과 epimer간의 상대적 생물학적 활성도를 확인하였다. 시험법의 관점에서 낮은 선택성과 낮은 민감도를 나타낸 균주는, 다양한 적용 가능 균주의 발굴 및 적용이 시험법 검증을 통해 이루어질 필요가 있다. 극단적으로 식품 중 epimer만이 잔류하여 미생물 시험에서 의양성이 나올 경우, 기기분석을 통해 확인 정량시 원물질이 검출되지 않는다면, 이는 분석화학과 독성학의 과학적 지식을 바탕으로 볼 때 제도적 맹점으로도 남을 수도 있다. 그리고, 현행 우리나라의 모화합물에 국한 된 잔류허용 기준은 활성이 있는 epimer나 대사산물까지 확대하여 검토 해 볼 필요가 있으며, 이는 최근 의약품류의 환경 중 잔류실태 조사, 환경 중 위해성 평가 및 관리를 위해서도 관리 대상물질을 과학적 근거에 따라 제시해 주는 중요한 자료가 된다.
Release of veterinary antibiotics (VSs) to agricultural environment through application of animal manure and/or animal manure-based composts to soils is of concern. The current study was conducted to examine decline of VAs during composting the chicken manure. For this, antibiotics free chicken manure (20 kg) and sawdust (10 kg) were added to the bench-scale composting apparatus and then the mixed material was spiked simultaneously with three VAs (chlortetracycline, CTC; sulfamethazine, SMZ; tylosin, TYL) at two different levels (10 and $20mg\;kg^{-1}$). Then the decline of VAs was determined using Charm II system during 53 composting period. For comparison, composting only chicken manure was included at VAs concentration of $10mg\;kg^{-1}$. During composting, the concentration of all three different VAs declined below the prospective guideline values ($0.8mg\;kg^{-1}$ for CTC, $0.2mg\;kg^{-1}$ for SMZ, and $1.0mg\;kg^{-1}$ for TYL) except CTC at $20mg\;kg^{-1}$ spiking when the chicken manure was composted together with sawdust. Interestingly, CTC at $10mg\;kg^{-1}$ spiking appeared to be declined under the guideline value without sawdust while SMZ was resistant to be declined without sawdust. Unlike CTC and SMZ, TYL showed immediate decline right after spiking TYL to composting materials regardless the spiking concentration and existence of sawdust. Appropriate composting procedure of chicken manure was able to decline the residual VAs in the manure below the prospective guideline value and the importance of organic substances on this decline was perceived.
Objective: Several studies have reported the development of new molecular methods for the prognosis and diagnosis of male fertility based on biomarkers aimed at overcoming the limitations of conventional male fertility analysis tools. However, further studies are needed for the field application of these methods. Therefore, alternative methods based on existing semen analysis methods are required to improve production efficiency in the animal industry. Methods: we examined the possibility of improving litter size in various pig breeds using combined Hoechst 33258/chlortetracycline fluorescence (H33258/CTC) staining. The correlation between field fertility and capacitation status by combined H33258/CTC staining in different ejaculates spermatozoa (n = 3) from an individual boar (20 Landrace, 20 Yorkshire, and 20 Duroc) was evaluated as well as overall accuracy. Results: The acrosome reacted (AR) pattern after capacitation (%) was positively correlated with the litter size of Landrace, Yorkshire, and Duroc pigs and the overall accuracy was 75%, 75%, and 70% in Landrace, Yorkshire, and Duroc pigs, respectively. The difference (${\Delta}$) in AR pattern before and after capacitation was positively correlated with the litter size of Landrace, Yorkshire, and Duroc pigs and the overall accuracy was 80%, 65%, and 55% in Landrace, Yorkshire, and Duroc pigs, respectively. However, the difference (${\Delta}$) in capacitated (B) pattern before and after capacitation was negatively correlated with the litter size of Landrace pigs and the overall accuracy was 75%. Moreover, average litter size was significantly altered according to different combined H33258/CTC staining parameters. Conclusion: These results show that combined H33258/CTC staining may be used to predict male fertility in various breeds. However, the selection of specific efficiency combined H33258/CTC staining parameters requires further consideration. Taken together, these findings suggest that combined H33258/CTC staining may constitute an alternative method for predicting male fertility until such time as fertility-related biomarkers are further validated.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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