The stable anchorage of pyridoxal 5'-phosphate (PLP) in the active site of D-amino acid transaminase (D-AT) is crucial for the enzyme catalysis. The three-dimensional structure of D-AT revealed that Glu32 is one of the active site groups that may playa role in PLP binding. To prove the role of Glu32 in PLP stability, we firstly checked the rate of the potential rate-limiting step. The kinetic analysis showed that the rate of the ${\alpha}$-deprotonation step reduced to 26-folds in E32A mutant enzyme. Spectral analyses of the reaction of D-AT with D-serine revealed that the E32A mutant enzyme failed to stabilize the key enzyme-substrate intermediate, namely a quinonoid intermediate (E-Q). Finally, analysis of circular dichroism (CD) on the wild-type and E32A mutant enzymes showed that the optical activity of PLP in the enzyme active site was lost by the removal of the carboxylic group, proving that Glu32 is indeed involved in the cofactor anchorage. The results suggested that the electrostatic interaction network through the groups from PLP, Glu32, His47, and Arg50, which was observed from the three-dimensional structure of the enzyme, plays a crucial role in the stable anchorage of the cofactor to give necessary torsion to the plane of the cofactor-substrate complex.
Cr-B2, a Gram-negative hexavalent chromium [Cr(VI)] reducing bacteria, was isolated from the aerator water of an activated sludge process in the wastewater treatment facility of a dye and pigment based chemical industry. Cr-B2 exhibited a resistance for 1,100 mg/l Cr(VI) and, similarly, resistance against other heavy metal ions such as $Ni^{2+}$ (800 mg/l), $Cu^{2+}$ (600 mg/l), $Pb^{2+}$ (1,100 mg/l), $Cd^{2+}$ (350 mg/l), $ZN^{2+}$ (700 mg/l), and $Fe^{3+}$ (1,000 mg/l), and against selected antibiotics. Cr-B2 was observed to efficiently reduce 200 mg/l Cr(VI) completely in both nutrient and LB media, and could convert Cr(VI) to Cr(III) aerobically. Cr(VI) reduction kinetics followed allosteric enzyme kinetics. The $K_m$ values were found to be 43.11 mg/l for nutrient media and 38.05 mg/l for LB media. $V_{max}$ values of 13.17 mg/l/h and 12.53 mg/l/h were obtained for nutrient media and LB media, respectively, and the cooperativity coefficients (n) were found to be 8.47 and 3.49, respectively, indicating positive cooperativity in both cases. SEM analysis showed the formation of wrinkles and depressions in the cells when exposed to 800 mg/l Cr(VI) concentration. The organism was seen to exhibit pleomorphic behavior. Cr-B2 was identified on the basis of morphological, biochemical, and partial 16S rRNA gene sequencing chracterizations and found to be Acinetobacter sp.
한국식품영양과학회 2001년도 International Symposium on Food,Nutrition and Health for 21st Century
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pp.52-60
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2001
Purpose: We performed a randomized, double-blind, placebo-controlled trial in mild to moderate myopia patients to evaluate the benefit of taking a nutrient supplement containing anthocyanoside oligomers for improving nocturnal visiual function and/or clinical symptoms. Methods: The subjects included have refractive error between -lD(Diopters) $\~$-8D in both eyes, symptoms of decreased night vision and asthenopia based on the scoring result of a pre-structured questionnaire, and abnormal results of mesopic contrast sensitivity(MCS) screening test showing abnormal curve of contrast sensitivity in the middle and high frequency level, between 6.0 and 30.0 CPD(Cycles per degree) at mesopic condition(-2$\~$0 log cd/$m^2$). Total 60 people who qualified the criteria above were enrolled and the subjects were instructed to take the investigational product (anthocyanoside or placebo) twice daily for a 4 week period. The enrolled subjects were investigated for nocturnal vision performance by MCS and clinical symptoms at their first visit and re-evaluated at post-intervention (4 weeks later). MCS was measured and improvement of contrast threshold level according to each CPD was calculated by subtracting initial values from final values. Age, refractive error, and MCS were compared between the placebo and anthocyanoside. Results: After 4 weeks of drug administration 22 of the anthocyanoside group showed symptom improvement compared to 1 of the placebo group (p=0.000). Contrast sensitivity levels according to each CPD before and after drug treatment showed significant improvement in the anthocyanoside group but not in the placebo group. Mean MCS change of anthocyanoside group is 2.41$\pm$1.91 which showed significant improvement compared to -0.40$\pm$2.47 of the placebo group(p=0.000). MCS changes of anthocyanoside group showed significant improvement compared to placebo group in all levels of CPD(p<0.05). During our investigation none of the subjects complained of specific side effects related to anthocyanoside use. Conclusion: Our results show that under careful selection of people with significant symptoms and definite MCS abnormalities, anthocyanoside oligomers may improve the subjective symptoms and objective MCS results.
A soluble Cr(VI) reductase was purified from the cytoplasm of Escherichia coli ATCC 33456. The molecular mass was estimated to be 84 and 42 kDa by gel filtration and SDS-polyacrylamide gel electrophoresis, respectively, indicating a dimeric structure. The pI was 4.66, and optimal enzyme activity was obtained at pH 6.5 and $37^{\circ}C$. The most stable condition existed at pH 7.0. The purified enzyme used both NADPH and NADH as electron donors for Cr(VI) reduction, while NADPH was the better, conferring 61% higher activity than NADH. The $K_m$ values for NADPH and NADH were determined to be 47.5 and 17.2 umol, and the $V_max$ values 322.2 and 130.7 umol Cr(VI) $min^{-1}mg^{-1}$ protein, respectively. The activity was strongly inhibited by N-ethylmalemide, $Ag^{2+},\;Cd^{2+},\;Hg^{2+}$, and $Zn^{2+}$. The antibody against the enzyme showed no immunological cross reaction with those of other Cr(VI) reducing strains.
본 연구에서는 녹두 및 대두의 용매추출물을 제조하고 hepatoma 1c1c7 세포 및 대식세포인 RAW264.7 배양을 이용하여 항암 및 항염증 효과를 비교분석하였다. 녹두추출물은 대두추출물 보다 ethylacetate 및 ethanol 추출물에서 모두 유의적으로 높은 QR 유도활성과 NO 및 $PGE_2$의 생성 억제 효과를 보였으며 농도 의존적 효과를 나타냈다. C18 silica flash column chromatography를 이용하여 회수된 녹두에탄올 추출물의 7개 분획 중 소수성이 가장 강한 분획은 24 ${\mu}g$/mL의 CD value와 783 ${\mu}g$/mL의 $IC_{50}$를 보였다. 현재 다수의 염증 억제물질의 작용기전이 prostaglandin 합성 억제이며 이는 COX-2의 생성 및 활성저해에 의한 것임을 근거로 할 때 녹두의 ethanol 추출물은 항염증 및 암 발생 예방 성분을 분리하기 위한 중요한 식품 자원으로 생각된다.
Jeong, Jaemin;Kim, Eunki;Jeong, Youngeun;Jeong, Seong Mok;Lee, Hae Beom;Kwon, Youngsam
한국임상수의학회지
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제37권4호
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pp.169-174
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2020
The purpose of this study was to establish normal values for the thoracic limb joint reference angles in Shih Tzu dogs and to describe the standardized CT methodology for measuring the joint reference angle of the humerus. Five pairs of thoracic limbs of Shih Tzu dogs were collected for the CT scans in this study. Three blinded observers measured the joint reference angle of the humerus and radius for each dog by using CT scans in the frontal, sagittal, and axial planes. The means (± SDs) for the average of the right and left humeral joint reference angles were as follows: mMPHA, 83.74 ± 3.95°; mLDHA, 85.04 ± 2.57°; mCaPHA, 46.75 ± 2.20°; mCrDHA, 79.47 ± 1.97°; and HTA, 19.16 ± 2.38°. Means (± SD) for the average of right and left of the radial joint reference angles were as follows: aMPRA, 85.04 ± 1.58°; aLDRA, 87.59 ± 1.37°; aCrPRA, 84.60 ± 1.46°; aCdDRA, 84.27 ± 1.79°; and RTA, 20.91 ± 3.00°. The intraclass correlation coefficients (ICCs) of the joint reference angles for the inter- and intraobserver reliability were good to excellent, except those for the mCrHA and HTA were moderate. Our results suggest that the method of measuring joint reference angles of other long bones by using CT can be applied to thoracic limbs and can extract valid values for one specific breed.
Kim, Seong-Il;Kim, Hee-Jin;Kwak, Jin-Hwan;Kim, In-Chull;Lee, Chang-Ho
Biomolecules & Therapeutics
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제3권4호
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pp.322-326
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1995
General pharmacology of LB20304, a quinolone antibiotic, were examined in terms of general behaviour, cardiovascular, and central nervous system. LB20304 at oral dose of 2,000 mg/kg did not induce significant behavioural changes in mice. In contrast with ciprofloxacin, LB20304 at dose of 20 mg/kg, iv. did not show any observable effects on the blood pressure in rats. Displacement of [$^3$H]muscimol binding to the rat brain synaptic membranes was measured. LB20304 was shown to be about five times less potent than ciprofloxacin in specific GABA receptor binding. Drug interaction between LB20304 and 4-biphenyl acetic acid, an active metabolite of fenbufen, was assessed in mice by measuring convulsion and/or subsequent death. A single oral pretreatment with 4-BPA at 400 mg/kg increased the incidence of convulsion and death after oral administration of ciprofloxacin at the doses of 25, 50, and 100 from zero of five to three of five, two of five, and four of five, respectively, whereas LB20304 alone or combination with 4-BPA caused neither convulsions nor death at the doses of 12.5, 25, 50, and 100 mg/kg, respectively. Quinolones-induced epileptogenic activities were assessed by a direct intracerebral injection of test articles. The CD$_{50}$ values (nmole) are as follows; 169.47, 35.36, 105.29, and 88.67 for LB20304, ciprofloxacin, of loxacin, and lomefloxacin, respectively. From these data, LB 20304 at therapeutic doses seems to be much more safe than any other quinolones tested.d.
Narantsogt, Giimaa;Min, Arim;Nam, Young Hee;Lee, Young Ah;Kim, Kyeong Ah;Agvaandaram, Gurbadam;Dorjsuren, Temuulen;El-Benna, Jamel;Shin, Myeong Heon
Parasites, Hosts and Diseases
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제53권5호
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pp.597-603
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2015
Trichomonas vaginalis is a flagellated protozoan parasite that causes vaginitis and cervicitis in women and asymptomatic urethritis and prostatitis in men. Mast cells have been reported to be predominant in vaginal smears and vaginal walls of patients infected with T. vaginalis. Mitogen-activated protein kinase (MAPK), activated by various stimuli, have been shown to regulate the transcriptional activity of various cytokine genes in mast cells. In this study, we investigated whether MAPK is involved in ROS generation and exocytotic degranulation in HMC-1 cells induced by T. vaginalis-derived secretory products (TvSP). We found that TvSP induces the activation of MAPK and NADPH oxidase in HMC-1 cells. Stimulation with TvSP induced phosphorylation of MAPK and $p47^{phox}$ in HMC-1 cells. Stimulation with TvSP also induced up-regulation of CD63, a marker for exocytosis, along the surfaces of human mast cells. Pretreatment with MAPK inhibitors strongly inhibited TvSP-induced ROS generation and exocytotic degranulation. Finally, our results suggest that TvSP induces intracellular ROS generation and exocytotic degranulation in HMC-1 via MAPK signaling.
Heavy metal concentration as well as chemical composition were surveyed in commercial liquid pig manure to provide the basic information for mitigation research of hazardous material to agro-product. Seventy-five samples of liquid pig manure were collected and analyzed from 2009 to 2010 nationwide. Average contents of T-N, $P_2O_5$, and $K_2O$ were 0.29%, 0.08%, and 0.11%, respectively. The contents of heavy metals ranged from 0.001~0.083 for As, 0.001~0.108 for Cd, 0.002~0.495 for Cr, 0.07~47.8 for Cu, ND~0.005 for Hg, 0.035~1.033 for Ni, ND~0.291 for Pb, and $0.75{\sim}342.4mg\;L^{-1}$ for Zn, respectively. It was noted that among 75 samples, only four samples exceeded the Zn guideline ($130mg\;L^{-1}$) of liquid fertilizer derived from livestock manure but others were not exceeded the regulation.
de Carvalho, Nadia Giulian;do Amaral, Maria Isabel Ramos;de Barros, Vinicius Zuffo;dos Santos, Maria Francisca Colella
Journal of Audiology & Otology
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제25권2호
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pp.65-71
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2021
Background and Objectives: In masking level difference (MLD), the masked detection threshold for a signal is determined as a function of the relative interaural differences between the signal and the masker. Study 1 analyzed the results of school-aged children with good school performance in the MLD test, and study 2 compared their results with those of a group of children with poor academic performance. Subjects and Methods: Study 1 was conducted with 47 school-aged children with good academic performance (GI) and study 2 was carried out with 32 school-aged children with poor academic performance (GII). The inclusion criteria adopted for both studies were hearing thresholds within normal limits in basic audiological evaluation. Study 1 also considered normal performance in the central auditory processing test battery and absence of auditory complaints and/or of attention, language or speech issues. The MLD test was administered with a pure pulsatile tone of 500 Hz, in a binaural mode and intensity of 50 dBSL, using a CD player and audiometer. Results: In study 1, no significant correlation was observed, considering the influence of the variables age and sex in relation to the results obtained in homophase (SoNo), antiphase (SπNo) and MLD threshold conditions. The final mean MLD threshold was 13.66 dB. In study 2, the variables did not influence the test performance either. There was a significant difference between test results in SπNo conditions of the two groups, while no differences were found both in SoNo conditions and the final result of MLD. Conclusions: In study 1, the cut-off criterion of school-aged children in the MLD test was 9.3 dB. The variables (sex and age) did not interfere with the MLD results. In study 2, school performance did not differ in the MLD results. GII group showed inferior results than GI group, only in SπNo condition.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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