• 한국축산식품학회지
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• 제18권3호
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• pp.269-275
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• 1998

The purpose of this study was to determine the thermal inactivation of Salmonella enteritidis, Salmonella typhimurium and E. coli O111 in liquid cultures treated with microwave energy. Furthermore, this study was to introduce new methodologies for studying nonthermal microwave effects on microorganisms, using controlled microwave energy and specially designed apparatuses. For the automatic temperature control during microwave heating, the real time data acquisition and computation system is designed with BASIC routine. The automatic temperature control system used in the experiments perform relatively stable control at the experiment temperature of 45, 50, 55 60$^{\circ}C$ and 65$^{\circ}C$ for 30 minutes. The effects of microwave heating on liquid cultures was compared with that of conventional heating, still reduces effectively the number of pathogenic bacteria in liquid cultures. While no particular differences between microwave heating and conventional heating was observed in the activation of E. coli at 45$^{\circ}C$ test, the activation of Sal. enteritidis and Sal. typhimurium was slightly reduced during the microwave treatments.

• 미생물학회지
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• 제45권3호
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• pp.263-267
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• 2009

세포정지기 및 스트레스에서 유도되는 RpoS 인자는 다양한 세포반응에 관여하는 유전자의 전사발현에 관여하는 전자조절인자이다. 대장균에서 proline의 생합성에 관여하는 유전자인 proBA와 proC 발현을 세포생장 주기별로 조사해 본 결과, 세포지수기에서는 proBA와 proC 유전자의 발현이 유도되는데 비해, 세포정지기에서는 이 세유전자의 전사발현이 극적으로 저해되었다. 그러나 rpoS 돌연변이를 야생형 대장균에 도입한 결과 proline 생합성에 관여하는 유전자인 proBA와 proC 유전자의 발현이 세포정지기에서 저해되지 않았다. 이러한 결과는 RpoS가 proline 생합성에 관여하는 proBA와 proC 유전자의 전사발현에 음성효과를 미치고 있음을 의미한다. 한편 rpoS 돌연변이 균주에서는 proline 외에도 threonine, methionine, lysine, arginine 등의 아미노산이 야생형 대비 2배 이상 생합성이 증가되었는데, 이는 rpoS 대장균 돌연변이 균주가 아미노산의 대량생산에 이용될 수 있음을 의미한다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제26권4호
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• pp.296-301
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• 2011

본 연구에서는 식중독을 일으키는 병원균인 Escherichia coli O157:H7이 주요 소비 엽채류인 상추에서의 생장 가능성과 온도대별 생장변화를 구명하기 위하여 상추잎 즙액 에서 E. coli O157:H7의 생장, 상추잎 표면에서의 생장, 여러 가지 온도조건하의 상추잎 즙액 및 표면에서 E. coli O157:H7의 생장, 초기 접종 농도별 생장패턴을 조사하였다. E. coli O157:H7은 상추잎 즙액에서 20시간 이내에 밀도가 증가하였고 상추잎 즙액의 농도에 따라 병원균의 생장률은 다르게 나타났다. 조사기간 동안 $4^{\circ}C$ 조건에서는 E. coli Ol57:H7 밀도가 크게 변하지 않았고 $15^{\circ}C$ 이상의 조건에서는 10시간 이내에 밀도가 증가승하는 것을 확인할 수 있었다. 상추잎 표면에서도 E. coli Ol57:H7의 밀도는 초기 접종 밀도에 비해 증가하였고, 증가되는 정도는 온도가 높아질수록 증가율이 높은 것으로 나타났다. 상추의 E coli O157:H7 초기 오염 농도가 병원균의 최대 생장 밀도 에 큰 영향을 미치는 것으로 확인되었다. 따라서 본 연구 결과로부터 상추잎에서 식중독세균인 E. coli O157:H7의 생장이 일어나는 것을 확인하였고, 이는 온도의 영향을 많이 받는 것으로 나타났다. 위의 결과에 따라 농식품 안전성 확보를 위해서는 신선 엽채류는 생산 유통 소비 단계 에서 유해미생물의 오염을 예방하는 것이 중요하고 특히 유통과 소비단계에서 저온도 유지가 철저히 이루어져야 할 것으로 사료된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권6호
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• pp.1346-1352
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• 2005

We have developed a modified gene replacement method using PCR products containing short homologous sequences of 40- to 50-nt. The method required $\lambda$-Red recombination functions provided under the control of a temperature-sensitive CI857 repressor expressed from the $P_{lac}$ promoter in the presence of IPTG on an easily curable helper plasmid. The method promoted the targeted gene replacements in the Escherichia coli chromosome after shifting cultures of the recombinogenic host, which carries the helper plasmid, to $42^{\circ}C$ for 15 min. Since this method employs $\lambda$-Red recombination functions expressed from the easily curable helper plasmid, multiple rounds of gene replacements in the E. coli chromosome would be possible. The procedures described herein are expected to be widely used for metabolic engineering of E. coli and other bacteria.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권6호
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• pp.1249-1255
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• 2004

This study has developed Corynebacterium ammoniagenes (c. ammoniagenes) purine gene transcriptional reporters (purF-lacZ and purE-lacZ) that function in Escherichia coli (E. coli) DH5a. After transformation of a C. ammoniagenes gDNA library into E. coli cells harboring either purF-lacZ or purE-lacZ, C. ammoniagenes clones were obtained that repress purF-lacZ and purE-lacZ gene expression. The potential purE and purF regulatory genes are homologous to the genes encoding transcription regulators, the regulatory subunit of RNA polymerase, and genes for purine nucleotide biosynthesis of various bacteria. The C. ammoniagenes purE-lacZ and purF-lacZ reporters were repressed by adenine and guanine within E. coli, indicating similarity in the regulatory mechanism of purine biosynthesis in C. ammoniagenes and E. coli. Gene regulation of pur-lacZ by adenine and guanine was partly abolished in cells expressing potential purine regulatory genes, indicating functionality of the purine gene regulators in repression of purE-lacZ and purF-lacZ. The purE-lacZ and purF-lacZ reporters can be used for the screening of genes involved in the regulation of the de novo synthesis of the purine nucleotides.

• Molecules and Cells
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• 제20권1호
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• pp.142-150
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• 2005

Members of the multifunctional Cyp family have been isolated from a wide range of organisms. However, few functional studies have been performed on the role of these proteins as chaperones in red alga. For studying the function of cDNA GjCyp-1 isolated from the red alga (Griffithsia japonica), we expressed and purified a recombinant GjCyp-1 containing a hexahistidine tag at the amino-terminus in Escherichia coli. An expressed fusion protein, $H_6GjCyp-1$ maintained the stability of E. coli proteins up to $50^{\circ}C$. For a functional bioassay for recombinant $H_6GjCyp-1$, the viability of E. coli cells overexpressing $H_6GjCyp-1$ was compared with that of cells not expressing $H_6GjCyp-1$ at $50^{\circ}C$. After high temperature treatment for 1 h, E. coli overexpressing $H_6GjCyp-1$ survived about three times longer than E. coli lacking $H_6GjCyp-1$. Measurement of the light scattering of luciferase (luc) showed that GjCyp-1 prevents the aggregation of luc during mild heat stress and that the thermoprotective activity of GjCyp-1 is blocked by cyclosporin A (CsA), an inhibitor of Cyps. Furthermore, the Cyp-CsA complex inhibited the growth of E. coli under normal conditions. The results of the GjCyp-1 bioassays as well as in vitro studies strongly suggest that Cyp confers thermotolerance to E. coli.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제14권4호
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• pp.327-332
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• 1999

1996년 3월부터 1998년 10월간에 경남지방 시판 냉장육 888건, 냉동포장육 222건 및 수입 냉동육 117건의 시료로부터 식중독관련 병원균의 분포와 혈청형을 조사하였다. 식중독균의 분리률은 Staphylocorcus aureus. Campylobarter jejuni/coli, Listeria monocytogenes 및 Salmonella spp 순으로 높았고, Escherichia coli O157:H7은 전시료를 통해서 분리되지 않았다. C. jejuni /coli는 냉장육에서 높은 오염률을 나타내고, 냉동포장육에서는 거의 분리되지 않는데 반해서 L. monocytogenes는 냉장육에 이해서 냉동포장 계육에서 높은 분리율을 나타낸 것은 매우 흥미로운 일이다. 분리균의 혈청형 분포는 Sta. aureus의 경우 대부분이 enterotoxin type C와 D였고, Salmonella spp는 돈육유래균에서 모두 A group이었으며, 계육유래균은 대부분 B와 D group이었다. L. monocytogenes는 계육유래균의 대부분이 type 1 이었고, type 4는 소수로 분리되었다.

• 한국식품위생안전성학회지
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• 제13권4호
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• pp.365-369
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• 1998

가금류 가공등에서 사용이 허가된 Trisodium Phoshate(TSP)와 구강 청결제로 사용되면서 안전한 물질로 알려진 Cetylpyridinium chloride(CPC)를 이용하여 in vitro에서 E. coli O157:H7 및 Listerial monocytogenes에 대하여 살균작용을 조사하였다. E. coli O157:H7 및 Listerial monocytogenes에 대해서는 TSP는 $1{\times}10^{-2}\;M$ 농도에서} $37^{\circ}C$, 30분간 반응으로 각각 30~40%와 40~50%의 살균효과를 보였으며, CPC는 $5{\times}10^{-7}\;M$ 농도에서 $37^{\circ}C$, 30분간 반응으로 각각 90~95%와 95~99%의 살균효과를 보였다. 또한, TSP와 CPC는 온도와 pH에 따라 E.coli O157:H7 및 Listerial monocytogenes에 대한 살균작용이 영향을 받았는데, 온도가 높을수록 두 물질 모두 그 살균 효과 컸으며, TSP는 pH가 높을수록, CPC는 pH가 낮을수록 살균효과가 컸다. 이러한 결과로 보아 TSP와 CPC도 E. coli O157:H7 및 Listerial monocytogenes의 오염방지를 위하여 사용이 가능할 것으로 본다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제20권3호
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• pp.550-557
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• 2010

Escherichia coli (E. coli) heat-labile enterotoxin B subunit (LTB) was regarded as one of the most powerful mucosal immunoadjuvants eliciting strong immunoresponse to coadministered antigens. In the research, the high-level secretory expression of functional LTB was achieved in P. pastoris through high-density fermentation in a 5-1 fermentor. Meanwhile, the protein was expressed in E. coli by the way of inclusion body, although the gene was cloned from E. coli. Some positive yeast and E. coli transformants were obtained respectively by a series of screenings and identifications. Fusion proteins LTB-6$\times$His could be secreted into the supernatant of the medium after the recombinant P. pastoris was induced by 0.5% (v/v) methanol at $30^{\circ}C$, whereas E. coli transformants expressed target protein in inclusion body after being induced by 1 mM IPTG at $37^{\circ}C$. The expression level increased dramatically to 250-300 mg/l supernatant of fermentation in the former and 80-100 mg/l in the latter. The LTB-6$\times$His were purified to 95% purity by affinity chromatography and characterized by SDS-PAGE and Western blot. Adjuvant activity of target protein was analyzed by binding ability with GMI gangliosides. The MW of LTB-6$\times$His expressed in P. pastoris was greater than that in E. coli, which was equal to the expected 11 kDa, possibly resulted from glycosylation by P. pastoris that would enhance the immunogenicity of co-administered antigens. These data demonstrated that P. pastoris producing heterologous LTB has significant advantages in higher expression level and in adjuvant activity compared with the homologous E. coli system.

• 디지털융복합연구
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• 제14권4호
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• pp.371-378
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• 2016

본 연구에서는 한국의 닭에서 분리된 E. coli 균주들로부터 퀴놀론계 항생제 내성을 나타내는 균주를 분리 동정하고 그 내성 기전과 유병률에 관하여 조사하였다. 또한 multilocus sequence typing (MLST)을 이용하여 E. coli 균주들의 분자생물학적 성상을 분석하였다. 항생제 감수성 테스트에서 63.5% (54/85) 의 E. coli 균주들에서 퀴놀론계 항생제 내성률을 보였다. 또한 퀴놀론계 항생제 내성을 보이는 54개 모두에서 gyrA 유전자의 sense mutations과 parC 유전자의 $57^{th}$, $80^{th}$, or $84^{th}$residues에서 점돌연변이를 관찰할 수 있었다. MLST를 통한 분석에서 E. coli ST는 parE 유전자의 염기치환과 깊은 상관관계를 보이는 것으로 관찰되었다. 이 결과들을 바탕으로 우리가 먹는 가축 및 가금류에 대한 무분별한 항생제 사용은 항생제 내성균의 증가와 유전변이를 초래함을 알 수 있었다. 따라서 식용 동물에 대한 지속적인 감시와 모니터링을 통하여 항생제 내성균의 확산방지를 통제하는 것이 필요할 것으로 사료된다.