• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권6호
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• pp.1249-1255
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• 2004

This study has developed Corynebacterium ammoniagenes (c. ammoniagenes) purine gene transcriptional reporters (purF-lacZ and purE-lacZ) that function in Escherichia coli (E. coli) DH5a. After transformation of a C. ammoniagenes gDNA library into E. coli cells harboring either purF-lacZ or purE-lacZ, C. ammoniagenes clones were obtained that repress purF-lacZ and purE-lacZ gene expression. The potential purE and purF regulatory genes are homologous to the genes encoding transcription regulators, the regulatory subunit of RNA polymerase, and genes for purine nucleotide biosynthesis of various bacteria. The C. ammoniagenes purE-lacZ and purF-lacZ reporters were repressed by adenine and guanine within E. coli, indicating similarity in the regulatory mechanism of purine biosynthesis in C. ammoniagenes and E. coli. Gene regulation of pur-lacZ by adenine and guanine was partly abolished in cells expressing potential purine regulatory genes, indicating functionality of the purine gene regulators in repression of purE-lacZ and purF-lacZ. The purE-lacZ and purF-lacZ reporters can be used for the screening of genes involved in the regulation of the de novo synthesis of the purine nucleotides.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제18권4호
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• pp.639-647
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• 2008

The heat-inducible expression vectors for Corynebacterium glutamicum and C. ammoniagenes were constructed by using the ${\lambda}O_L1$ and the cryptic promoters, CJ1 and CJ4 that express genes constitutively in C. ammoniagenes. Although the promoters were isolated from C. ammoniagenes, CJ1 and CJ4 were also active in C. glutamicum. To construct vectors, the $O_L1$ from the ${\lambda}P_L$ promoter was isolated and fused to the CJ1 and CJ4 promoters by recombinant PCR. The resulting artificial promoters, CJ1O and CJ4O, which have one ${\lambda}O_L1$, and CJ1OX2, which has two successive ${\lambda}O_L1$, were fused to the green fluorescent protein (GFP) gene followed by subcloning into pCES208. The expression of GFP in the corynebacteria harboring the vectors was regulated successfully by the temperature-sensitive cI857 repressor. Among them, C. ammoniagenes harboring plasmid pCJ1OX2G containing GFP fused to CJ1OX2 showed more GFP than the other ones and the expression was tightly regulated by the repressor. To construct the generally applicable expression vector using the plasmid pCJ1OX2G, the His-tag, enterokinase (EK) moiety, and the MCS were inserted in front of the GFP gene. Using the vector, the expression of pyrR from C. glutamicum was tried by temperature shift-up. The results indicated that the constructed vectors (pCeHEMG) can be successfully used in the expression and regulation of foreign genes in corynebacteria.

• 한국식품영양학회지
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• 제6권3호
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• pp.158-168
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• 1993

For the conversion of WAD to NADP, Immobilized Brevibacterium ammoniagenes cells with NAD kinase was coupled with ATP-generating system by acetate kinase. The membrane permeability of B. ammoniagenes was improved by toluene treatment of cells. The toluene treated B. ammoniagenes cells were immobilized for stable enzyme activity. Partially purified acetate kinase was used in the reaction system. The optimum conditions for the efficient conversion of UAD to WADP by energy-coupled system were investigated. B. ammoniagenes cells treated with toluene for the Improvement of membrane permeability showed 4.5 fold improved permeability in the conversion of NAD to NADP compared with Intact cells. 3% k-carrageenan as the immobilization matrix of B. ammoniagenes showed the best efficiency for the conversion of NAD to NADP The optimum conditions for the WAR to WARP conversion reaction coupled nth ATP-generating system were 10mM acetylphosphate, 5mM ADP 200mM inorganic phosphate, 10mM MgCl2, 250mg/ml Immobilized cells, 49.3mUnit/ml acetate kinase, pH 7.5 and 37$^{\circ}C$. Under the optimum conditions, 72% of 5mM(340mg/ml ) NAD was converted to UADP In 12 hours.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권3호
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• pp.214-221
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• 1998

A Brevibacterium ammoniagenes gene coding for glucose/mannose-specific enzyme II ($EII^{Glc}$) of the phosphoenolpyruvate-dependent phosphotransferase system (PTS) was cloned by complementing an Escherichia coli mutation affecting a ptsG gene, and the complete DNA nucleotide sequence was determined. The cloned gene was identified to be a ptsG, which enables the E. coli transportment to use glucose more efficiently than mannose as the sole carbon source in an M9 minimal medium. The ptsG gene of B. ammoniagenes consists of an open reading frame of 1,983 nucleotides putatively encoding a polypeptide of 661 amino acid residues and a TAA stop codon. The deduced amino acid sequence of the B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ shows, at $46\%$, the highest degree of sequence similarity with the Corynebacterium glutamicum EII specific for both glucose and mannose. In addition, the $EII^{Glc}$ shares approximately $30\%$ sequence similarities with sucrose-specific and ${\beta}$-glucoside-specific EIIs of the several bacteria belonging to the glucose-PTS class. The 161-amino-acid C-terminal sequence of $EII^{Glc}$ is also similar to that of E. coli enzyme $IIA^{Glc}$, specific for glucose ($EIIA^{Glc}$). The B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ consists of three domains; a hydrophobic region (EIIC) and two hydrophilic regions (EIIA, EIIB). The arrangement of structural domains, IIBCA, of the $EII^{Glc}$ is identical to those of EIIs specific for sucrose or ${\beta}$-glucoside. While the domain IIA was removed from the B. ammoniagenes $EII^{Glc}$ the remaining domains IIBC were found to restore the glucose and mannose-utilizing capacity of E. coli mutant lacking $EII^{Glc}$ activity with $EIIA^{Glc}$ of the E. coli mutant. $EII^{Glc}$ contains a histidine residue and a cysteine residue which are putative phosphorylation sites for the protein.

• 미생물학회지
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• 제45권3호
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• pp.233-238
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• 2009

Corynebacterium ammoniagenes의 purF 유전자의 발현을 purF의 프로모터 추정 부위에 cat 유전자를 융합시킨 transcriptional fusion 플라스미드를 제작하여 분석하였다. 유전자 purF는 adenine과 guanine에 의해 20~30%의 전사 저해효과를 나타내지만, hypoxanthine에는 저해를 받지 않는 것으로 나타났다. 또한 purF의 발현은 대수기중반에 최대에 달한 후 정체기 후반부까지 일정한 것으로 나타났다. 동시에, C. glutamicum에서 사용되는 강력한 프로모터인 $P_{180}$이 Escherichia coli의 $P_{tac}$보다 C. ammoniagenes에서 모든 성장 단계에서 40~50%의 향상된 프로모터 활성을 나타내었고 대수기 후반부에 최고 활성에 달해, C. ammoniagenes의 연구에도 활용 가능함을 확인하였다. DNA-affinity purification에 의해 C. ammoniagenes의 purF 프로모터에 결합하는 단백질로서 C. glutamicum의 Crp-family transcriptional regulator (NCgl0120)와 상동성이 높은 단백질을 검출하였다. 이 단백질은 크기가 40.1 kDa으로서 PAGE에서 관찰된 단백질 크기와 일치하였다. 이에 상응하는 C. ammoniagenes의 단백질은 400개의 아미노산으로 구성되어 있고, 42 kDa의 단백질을 만들며, pI는 4.9일 것으로 추정되었다. 이는 기존에 알려져 있는 E. coli 및 Bacillus subtilis의 PurR과 각각 14.1%, 15.8%의 아미노산 상동성을 보여, PurR과는 다른 종류의 단백질일 것으로 여겨진다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제28권3호
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• pp.147-151
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• 2000

Brevibacterium ammoniagenes 염색체상에서 phosphotrans-ferase system의 glucose permease를 코드하는 ptsG 유전자와 인접한 지역의 염기서열을 결정한 결돠 1,467 nucleo-tides로 구성된 1개의 open reading frame(ORF)이 발견되었고 이것은 489 아미노산 잔기로 구성되는 단백질을 코드하는 것으로추정된다. 이러한 ORF로부터 추정된 단백질의 아미노산 잔기배열을 분석한 결과 30S 리보좀을 구성하는 단백질중의 하나인 S1과 상동성이 높은 것으로 나타났는데 특히 Mycobacterium tuberculosis M. leprae와 Srepto-myces coelicola의 S1단백질의 아미노산 잔기배열과 각각 83%, 74%m, 77%의 매우 높은 상동성을 보였으며 Escherichia coli의 것과도 약 40%의 상동성을 보였다 이로보아 B.ammoniagenes 염색체상에서 ptsG 유전자와 인접한 지역에 존재하는 ORF는 리보좀 단백질 S1의 유전자로 추정된다. 또한 이들은 염색체상에서 동일한 방향으로 판독되며 S1의 유전자가 ptsG의 위 지역으로 266 nucleotides 떨어져 존재하고 있다.

• 한국수산과학회지
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• 제24권2호
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• pp.111-116
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• 1991

5'-XMP의 효소적 전환에 의한 효율적인 5'-GMP의 생산을 위하여 동결 건조한 Bevibacterium ammoniagenes ATCC 19216을 K-carrageenan, polyacrylamide, Ca-alginate 및 agar등 4가지 담체에 고정화시켜 XMP aminase 효소원으로 사용하였다. 최적담체로서 선정된 $3\%$ K-carrageenan에 고정화한 균체를 이용하여 5'-GMP를 생산하였다. 고정화되지 않은 전환균주에 의한 5'-GMP의 최적 생산 조건은 $42^{\circ}C$, pH 7.0, 100mg/ml의 glucose, 8mg/ml의 $MgSO_4\cdot7H_2O,$ 5mg/ml의 POESA, 120mg/ml cell, 5mg/ml의 phytic acid으로 나타났으며, 이때 전환율은 $94.5\%$이었다. 고정화균체에 의한 5'-GMP의 최적생산 조건은 $37^{\circ}C$, pH 7.5, 50mg/ml의 glucose, 1mg/ml의 $KH_2PO_4,$ 10mg/ml 의 phytic acid, 60mg/ml의 고정화균체, 8mg/ml의 $MgSO_4\;\cdot\;7H_2O,$ POESA이며 이때 전환율은 $64.7\%$이었다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제24권2호
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• pp.105-111
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• 1981

전보(前報)에서 변이처리에 의해서 얻은 Brevibacterium ammoniagenes BA 17-2로부터 5'-XMP aminase를 생산(生産)하기 위하여 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thinamine의 예비적정농도를 정(定)하고자 생육도(生育度)를 조사했다. 본실험(本實驗)에서 배지중(培地中)의 인산염의 농도(濃度)가 균(菌)의 생육(生育)에 중요한 영향을 미치는 것을 보여주었다. $MgSO_4{\cdot}7H_2O$, 0.2% $MnSO_4{\cdot}H_2O$ 3mg/l, $thiamine{\cdot}HCl$를 포함한 배지(培地)를 사용하면 최대 균체량은 $KH_2PO_4$, $K_2HPO_4$ 각각 0.4%의 농도에서 얻어졌다. 이러한 인산염 농도 이상에서 균생육(菌生育)은 인산염 농도가 1%까지 증가함에 따라 저해되었지만 저해작용은 1%의 $MgSO_4{\cdot}7H_2O$와 3mg/l의 $thiamine{\cdot}HCl$을 첨가하여 해소되었다. 5'-XMP aminase 역가도 역시 인산염, 마그네슘이온, 망간이온, thiamine의 농도에 영향을 받았다. 그밖에 효소역가에 대한 배양 최적 pH와 온도는 각각 6.8과 $32^{\circ}C$로 밝혀졌다.

• 한국식품과학회지
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• 제6권1호
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• pp.6-11
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• 1974

Four new compounds; 2,2'-methylene-bis [3, 4, 6-trichloro ${{\beta}-(o-nitroanilino)$ propionoxy} benzene]; m.p. $200{\sim}202^{\circ}C,\;C_{31}H_{22}O_8N_4Cl_6$ 2,2'-methylene-bis [3, 4, 6-trichloro ${{\beta}-(p-nitroanilino)$ propionoxy} benzene]; m.p. $168-170^{\circ}C,\;C_{31}H_{22}O_8N_4Cl_6$ : 2,2'-Methylene-bis [3, 4, 6-trichloro ${{\beta}-(o-chloro-p-nitroanilino)$ propionoxy} benzene]; m.p. $170.5-172.5^{\circ}C,\;C_{31}H_{20}O_8N_4Cl_8$ : 2,2'-Methylene-bis [3, 4, 6-trichloro ${{\beta}-(c-methyl-p-nitroanilino)$ propionoxy} benzene]; m.p. $163-164^{\circ}C,\;C_{33}H_{26}O_8N_4Cl_6$-were synthesized by Mannich reaction from 2,2'-Methylene-bis (3, 4, 6-trichloroacetoxy benzene) and their antimicrobial activities against the microorganisms Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis Natto, Brevibacterium ammoniagenes, Candida tropicalis, Rhodotorula glutinis, Pseudomonas ovalis, Aspergillus candidus Link, Aspergillus awamori Nakazawa. Aspergillus niger var. Tieghem, Aspergillus usami Sakakuchi, Penicillium notatum-were tested. 2,2'-methylene-bis [3, 4, 6-trichloro ${{\beta}-(o-nitroanilino)$ propionoxy} benzene] showed a strong antimicrobial activity against Bacilus subtilis Natto and Brevibacterium ammoniagenes.

• 한국식품과학회지
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• 제4권2호
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• pp.72-76
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• 1972

2,2'-methylene bis(3,4,6-trichloroacetoxy benzene)을 모체로 한 7가지 hydroxyamine 유도체의 13가지 균주에 대한 항균성을 paper disk method와 tube dilution method에 의하여 얻은 결과는 다음과 같다. 1) hydroxyamine유도체 중에서 -OH기가 meta위치에 있는 유도체가 다른 유도체보다 항균력이 강하고, para위치에 -OH기가 있는 화합물은 전연 어느 균에도 항균력이 없으며, para위치에 있는 -OH기의 H대신에 $CH_{3-}$기가 치환된 유도체도 항균력이 별로 강하지가 않았다. 2) $-NH\;OH,\;-NH\;CH_2\;CH_2OH$ 및 $-N\;(CH_2\;CH_2\;OH)_2$화합물 중에서 -NH OH화합물이 가장 강하고 나머지 두 화합물은 몇 가지 균주에 대하여 약간의 항균력을 나타내었다. 3) 모든 합성화합물 중에서 -NH OH화합물의 항균력이 제일 강했으며 Brevibacterium ammoniagenes에 대한 M.I.C.는 $1.6{\mu}g/ml$이며, S. aureus와 Bacillus subtilis에 대한 M.I.C.는 $5{\mu}g/ml$이었다.