Pseudomonas sp. MBEL21 was newly isolated from soil samples and found to accumulate medium-chain-length Polyhydroxyalkanoates(MCL-PHAs) using oleic acid as a sole carbon source. Among the various nutrient limiting conditions examined, including nitrogen, sulfur and phosphorus, only phosphorus limitation supported the accumulation of MCL-PHAs up to 15 wt% of dry cell weight in flask cultures. MCL-PHAs produced by Pseudomonas sp. MBEL21 was mainly composed of 3-hydroxy-5-cis-tetradecenoate. Fed-batch culture of Pseudomonas sp. MBEL21 by novel feeding strategies based on cell growth charcteristics was carried out under phosphorus limitation using oleic acid as a sole carbon source. The final cell concentration and PHA content of 82 g/L and 28 wt%, respectively, were obtained. Furthermore, PHA consisted of MCL-hydroxyalkanoates and 3-hydroxybutyrate could be produced using olive oil as a sole carbon source.
The gene for esterase (rEst1) was isolated from a new species of genus Rheinheimera by functional screening of E. coli cells transformed with the pSMART/HaeIII genomic library. E. coli cells harboring the esterase gene insert could grow and produce clear halo zones on tributyrin agar. The rEst1 ORF consisted of 1,029 bp, corresponding to 342 amino acid residues with a molecular mass of 37 kDa. The signal P program 3.0 revealed the presence of a signal peptide of 25 amino acids. Esterase activity, however, was associated with a homotrimeric form of molecular mass 95 kDa and not with the monomeric form. The deduced amino acid sequence showed only 54% sequence identity with the closest lipase from Cellvibrio japonicus strain Ueda 107. Conserved domain search and multiple sequence alignment revealed the presence of an esterase/ lipase conserved domain consisting of a GXSXG motif, HGGG motif (oxyanion hole) and HGF motif, typical of the class IV hormone sensitive lipase family. On the basis of the sequence comparison with known esterases/ lipases, REst1 represents a new esterase belonging to the class IV family. The purified enzyme worked optimally at $50^{\circ}C$ and pH 8, utilized pNP esters of short chain lengths, and showed best catalytic activity with p-nitrophenyl butyrate ($C_4$), indicating that it was an esterase. The enzyme was completely inhibited by PMSF and DEPC and showed moderate organotolerance.
Caballeronia sordidicola strain PAMC 26577 was isolated from Cladonia sp., a lichen collected from Svalbard Archipelago in the Arctic Ocean. Draft genomic sequences of PAMC 26577 were determined using Illumina and 182 contigs were submitted to GenBank and N50 value was 159,226. The genome of PAMC 26577 was comprised of 8,334,211 base pairs and %G+C content was 59.4. The genome included 8 ribosomal RNA genes and 51 tRNA genes as non-coding sequences. Protein-coding genes were 8,065 in number and they included central metabolism genes as well as butanol/butyrate biosynthesis, polyhydroxybutyrate metabolism, serine cycle methylotrophy genes, and glycogen metabolism. Membrane transporters were more than two-hundreds in number, but sugar phosphotransferase system and TRAP transporters were lacking. PAMC 26577 lacked CRISPR-associated sequences and proteins. No transposable elements were observed and there were only limited number of phage remnant regions with 11 phage-related genes.
The developing embryo naturally experiences relatively low oxygen conditions in vivo. Under in vitro hypoxia, mouse embryonic stem cells (mESCs) lose their self-renewal activity and display an early differentiated morphology mediated by the hypoxia-inducible factor-$1{\alpha}$ (HIF-$1{\alpha}$). Previously, we demonstrated that histone deacetylase (HDAC) is activated by hypoxia and increases the protein stability and transcriptional activity of HIF-$1{\alpha}$ in many human cancer cells. Furthermore HDAC1 and 3 mediate the differentiation of mECSs and hematopoietic stem cells. However, the role of HDACs and their inhibitors in hypoxia-induced early differentiation of mESCs remains largely unknown. Here, we examined the effects of several histone deacetylase inhibitors (HDACIs) on the self-renewal properties of mESCs under hypoxia. Inhibition of HDAC under hypoxia effectively decreased the HIF-$1{\alpha}$ protein levels and substantially improved the expression of the LIF-specific receptor (LIFR) and phosphorylated-STAT3 in mESCs. In particular, valproic acid (VPA), a pan HDACI, showed dramatic changes in HIF-$1{\alpha}$ protein levels and LIFR protein expression levels compared to other HDACIs, including sodium butyrate (SB), trichostatin A (TSA), and apicidin (AP). Importantly, our RT-PCR data and alkaline phosphatase assays indicate that VPA helps to maintain the self-renewal activity of mESCs under hypoxia. Taken together, these results suggest that VPA may block the early differentiation of mESCs under hypoxia via the destabilization of HIF-$1{\alpha}$.
Two mesophilic trickling bed bioreactors filled with two different types of media, hydrophilic- and hydrophobic-cubes, were designed and tested for hydrogen production via anaerobic fermentation of sucrose. Each reactor consisted of a column packed with polymeric cubes and inoculated with heat-treated sludge obtained from anaerobic digestion tank. A defined medium containing sucrose was fed with changing flow rate into the capped reactor, hydraulic retention time and recycle rate. Hydrogen concentrations in gas-phase were constant, averaging 40% for all conditions tested. Hydrogen production rates increased up to $10.5 L{\cdot};h^{-1}{\cdot}L^{-1}$ of reactor when influent sucrose concentrations and recycle rates were varied. Hydrophobic media provided higher value of hydrogen production rate than hydrophilic media at the same operation conditions. No methane was detected when the reactor was under a normal operation. The major fermentation by-products in the liquid effluent of the both trickling biofilters were acetate and butyrate. The reactor filled with hydrophilic media became clogged with biomass and bio gas, requiring manual cleaning of the system, while no clogging occurred in the reactor with hydrophobic media. In order to make long-term operation of the reactor filled with hydrophilic media feasible, biofilm accumulation inside the media in the reactor with hydrophilic media and biogas produced from the reactor will need to be controlled through some process such as periodical backwashing or gas-purging. These tests using trickling bed biofilter with hydrophobic media demonstrate the feasibility of the process to produce hydrogen gas in a trickle-bed type of reactor. A likely application of this reactor technology could be hydrogen gas recovery from pre-treatment of high carbohydrate-containing wastewaters.
Lee, Seong Shin;Joo, Young Ho;Choi, Jeong Seok;Jeong, Seung Min;Paradhipta, Dimas Hand Vidya;Noh, Hyeon Tak;Kim, Sam Churl
Journal of The Korean Society of Grassland and Forage Science
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v.41
no.3
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pp.155-161
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2021
This study was conducted to estimate the effect of different cutting lengths on fermentation characteristics and aerobic stability of whole crop rice (WCR) silage. The WCR was harvested at the yellow ripe stage (43.7%, DM), and then cut at 5 (R05), 10 (R10), and 20 cm (R20) of the theoretical length of cut with no cut WCR (R60). Each forage was ensiled into 20 L mini bucket silo (5 kg) for 150 days in quadruplicates. The cutting lengths were not affected the chemical compositions of WCR silage (p > 0.05). The pH (p < 0.001) and concentration of ammonia-N (p = 0.022) in WCR silage were increased linearly with the increase of cutting length. The concentration of lactate had quadratic effect (p = 0.007), which was highest in R20 silage (p < 0.05). The concentration of acetate was increased linearly (p = 0.014), but the concentration of butyrate was decreased linearly (p = 0.033). The lactic acid bacteria count was decreased linearly (p = 0.017), and yeast count had quadratic effect (p = 0.009), which was the highest in R20 silage (p < 0.05). Aerobic stability had strong quadratic effect (p < 0.001), which was the highest in R20 silage (p < 0.05). In conclusion, R60 silage had highest pH by a linear increase of ammonia-N concentration and led to low aerobic stability. While R20 silage had the lowest pH by high lactate concentration and led to high aerobic stability.
This study was conducted to investigate the effect of a steam chamber type on the ruminal fermentable characteristics and nutrient degradabilities of corn flakes in Hanwoo. Three Hanwoo equipped with a ruminal fistula were used as experimental animals. There were two treatments: Corn flake using a steam chamber (CFSC, 1.0 atm - $100^{\circ}C$ 96 min) or corn flake using a pressurized steam chamber (CFPSC, 1.5 atm - $111^{\circ}C$ 12 min), respectively. In the in vitro trial, the ruminal pH was significantly lower in the CFPSC than in the CFSC (p < 0.01). The ammonia concentration was increased by 14.1% in the CFPSC compared to the CFSC (p < 0.05). The concentration of acetic acid was higher in the CFSC than in the CFPSC (p < 0.01). The concentrations of propionate, butyrate and total-VFA at 24 and 48 h were higher in the CFPSC than in the CFSC (p < 0.05). In the in situ trial, the degradability of dry matter was significantly higher in the CFSC than in the CFSC (p < 0.01). In addition, the degradabilities of starch and crude protein were significantly higher in the CFSC than in the CFSC (p < 0.01). Thus, the present results indicate that the pressurized steam chamber could be recommended to improve the feed value of corn flake according to the increase in the starch degradability and volatile fatty acid production.
Objective: The objective of this study was to investigate the effect of bamboo grass (Tiliacora triandra, Diels) pellet (Bamboo-Cass) supplementation on feed intake, nutrient digestibility, rumen microbial population and methane production in Thai native beef cattle. Methods: Four Thai native beef cattle bulls ($190{\pm}2kg$) were randomly allotted to four respective dietary treatments in a $4{\times}4$ Latin square design. Treatments were the varying levels of Bamboo-Cass supplementation at 0, 50, 100, and 150 g/head/d, respectively. Rice straw was fed ad libitum and the concentrate offered at 0.5% of body weight. Results: Under this experiment, the findings revealed that acetate and butyrate production were decreased (p<0.05), propionate increased (p<0.05), whilst ruminal $NH_3-N$ concentration was decreased (p<0.05) by supplementation of Bamboo-Cass at 150 g/head/d. Moreover, rice straw intake, and microbial population were linearly increased (p<0.05), while methane production was decreased (p<0.05). Conclusion: The results from the present study indicate that supplementation of Bamboo-Cass at 150 g/head/d significantly enhanced feed intake, decreased protozoa and increased bacterial population, rumen fermentation efficiency while decreased methane production. Therefore, Bamboo-Cass as a supplement is promising as a rumen enhancer in beef cattle fed on rice straw.
Singh, Ram;Koo, Jin Su;Park, Sungkwon;Balasubramanian, Balamuralikrishnan
Korean Journal of Agricultural Science
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v.48
no.1
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pp.73-81
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2021
The current study investigated how Saccharomyces cerevisiae ameliorates the adverse effects of aflatoxin on in vitro rumen fermentation. In this study, five groups (T1: Control [basal feed]; T2: T1 + 300 ppb aflatoxin B1 [AFB1] and T3, T4, and T5: T2 with 0.05, 0.1, and 0.2% of S. cerevisiae, respectively) were prepared and incubated in vitro. The results revealed that truly degradable dry matter (TDDM), gas production (GP), microbial biomass production (MBP), truly degradable organic matter (TDOM), partitioning factor (PF), total volatile fatty acids (TVFA), acetate (A), propionate (P) and butyrate (B) values in the control group (T1) were higher (p < 0.05) than those of the AFB1 fed group (T2). The A : P ratio in the control group (T1) was reduced (p < 0.05) when compared to that of the T2 group. The TDDM, TDOM, GP, TVFA, A, P, and B values of T3, T4, and T5 improved with the increasing levels of S. cerevisiae; however, the values of group T5 were lower (p < 0.05) than that of the control. The values of MBP, A : P ratio and PF in group T5 were statistically similar to that of the control. It was concluded that the inclusion of S. cerevisiae (0.05 to 0.20%) to the AFB1 (300 ppb) contaminated feed partially to completely ameliorated the adverse effects of AFB1 on the in vitro rumen fermentation parameters.
Majewska, Malgorzata P.;Miltko, Renata;Belzecki, Grzegorz;Kedzierska, Aneta;Kowalik, Barbara
Animal Bioscience
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v.34
no.7
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pp.1146-1156
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2021
Objective: The aim of the study was to compare the effect of two plant additives, rich in polyphenolic compounds, supplemented to sheep diets on microorganisms and carbohydrate fermentation in rumen. Methods: In the experiment, 6 ewes of the Polish Mountain breed were fitted with ruminal cannulas. Sheep were divided into three feeding groups. The study was performed in a cross-over design of two animals in each group, with three experimental periods (n = 6 per each group). The animals were fed a control diet (CON) or additionally received 3 g of dry and milled lingonberry leaves (VVI) or oak bark (QUE). Additionally, plant material was analyzed for tannins concentration. Results: Regardless of sampling time, QUE diet increased the number of total protozoa, as well as Entodinium spp., Diplodinium spp. and Isotrichidae family, while decreased bacterial mass. In turn, a reduced number of Diplodinium spp. and increased Ophryoscolex spp. population were noted in VVI fed sheep. During whole sampling time (0, 2, 4, and 8 h), the number of protozoa in ruminal fluid of QUE sheep was gradually reduced as opposed to animals receiving CON and VVI diet, where rapid shifts in the protozoa number were observed. Moreover, supplementing sheep with QUE diet increased molar proportions of butyrate and isoacids in ruminal fluid. Unfortunately, none of the tested additives affected gas production. Conclusion: The addition of VVI or QUE in a small dose to sheep diets differently affected rumen microorganisms and fermentation parameters, probably because of various contribution of catechins in tested plant materials. However, it is stated that QUE diet seems to create more favorable conditions for growth and development of ciliates. Nonetheless, the results of the present study showed that VVI and QUE additives could serve as potential natural modulators of microorganism populations and, consequently, carbohydrate digestion in ruminants.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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