• 한국미생물·생명공학회지
• /
• 제35권2호
• /
• pp.104-111
• /
• 2007

본 연구에서는 단일 탄소원과 질소원으로 aniline을 이용하는 것으로 보고된 바 있는 Bukholderia sp. HY1과 Deiftia sp. HY99로부터 aniline의 첫 번째 분해 단계에 관련된 aniline dioxygenas의 위치를 확인하고 그 유전자를 클로닝하여 아미노산 서열을 결정하고 비교하였다. 한 개 이상의 플라스미드 DNA를 포함하고 있을 것으로 조사된 B.a sp. HY1에서 유래된 플라스미드의 curing 실험을 통해, B. sp. HY1의 aniline oxygenase는 플라스미드가 아닌 염색체 DNA에 존재하는 것으로 확인되었다. B. sp. HY1과 D. sp. HY99에서 유래된 aniline dioxygenase small subunit는 146개 아미노산을 기준으로 약 79%의 상동성을 보였다. 특히, B. sp. HY1으로부터 얻어진 ado2는 aniline dioxygenase small subunit의 terminal dioxygenase에 속하는 것으로 Frateuria sp. ANA-18의 tdnA2와 99%, 그리고 Delftia sp. HY99의 ado2는 Delftia sp. AN3의 danA2와 99% 이상의 아미노산 상동성을 나타내었다. 또한 본 연구에서 두 균주에서 얻어진 catechol oxygenase의 아미노산 서열분석을 통해 B. sp. HY1은 catechol 1,2-dioxygenase에 의해 ortho pathway를 D. sp. HY99는 catechol 2,3-dioxygenase에 의해 meta pathway를 운영할 것이라는 이전 보고를 강력하게 뒷받침해 주었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제18권6호
• /
• pp.1005-1010
• /
• 2008

The genus Burkholderia consists of extremely versatile bacteria that occupy diverse niches and are commonly encountered in the rhizosphere of crop plants. In this study, we characterized three plant growth promoting strains assigned as Burkholderia sp. using biochemical and molecular characterization. The Burkholderia spp. strains CBMB40, CBPB-HIM, and CBPB-HOD were characterized using biochemical tests, BIOLOG carbon substrate utilization, fatty acid methyl ester analysis, analysis of recA gene sequences, and DNA-DNA hybridization. The results from these studies indicated that the strains CBMB40, CBPB-HIM, and CBPB-HOD can be assigned under Burkholderia vietnamiensis, Burkholderia ubonensis, and Burkholderia pyrrocinia, respectively.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제50권4호
• /
• pp.281-287
• /
• 2007

Microorganisms were isolated from earthworm intestine and examined for their ability to degrade 3-methyl-4-nitrophenol (MNP), a main degradation product of the insecticide fenitrothion. An isolate that showed the best degradation of MNP was selected for further study. The 16S rRNA analysis showed that the isolate belongs to the genus of Burkholderia, close to phenanthrene-degrading Burkholderia sp. S4.9, and is named Burkholderia sp. SH-1. When time-course degradation of MNP by SH-1 was examined by high performance liquid chromatographic analysis, almost complete degradation of MNP was observed within 26 h. Colony forming unit value assays indicated that the isolate SH-1 was capable of utilizing MNP as a sole carbon source. SH-1 could also degrade p-nitrophenol (PNP) but could not degrade ortho-substituted nitroaromatics such as 2,4-, 2,6- and 2,5-dinitrophenol. Catechol was detected as the main degration product of MNP and PNP. SH-1 was also found in the soil from which earthworms were obtained. These results suggest that the dispersal of Burkholderia sp. SH-1 into different environment with the aid of earthworms is likely to play a role in bioremediation of the soil contaminated with MNP.

• 농약과학회지
• /
• 제17권3호
• /
• pp.193-199
• /
• 2013

Burkholderia pyrrocinia CAB08106-4은 Sclereotium cepivorum와 Sclereotium sp.균주에 의해 발생하는 마늘 흑색썩음균핵병에 대한 항박테리아 효능을 가지고 있다. 이는 Sclereotium cepivorum와 Sclereotium sp.에 의해 발생하는 마늘 흑색썩음균핵병을 포함한 다양한 식물병원체를 관리하고 예방하는데 있어 친환경적인 미생물 제품이다. 이번 시험의 목적은 Burkholderia pyrrocinia CAB08106-4를 경구, 호흡기, 정맥에 대한 단회투여 시의 급성독성 증상과 병원성을 비교하고 평가하고자 한다. 급성독성/병원성 시험에서 랫드를 3, 7, 14, 21일에 안락사하여 체내 미생물잔존상황을 관찰하였고, 투여 후 21일 동안 매일 임상증상 관찰과 체중증가량을 평가하였다. 이번 시험에서 전체 시험기간 동안 투여군에 있어서 사망례는 물론 시험물질 투여와 관련된 임상증상은 관찰되지 않았고 체중도 정상적으로 증가한 것으로 관찰되었다. 미생물의 체 내외 관찰결과에 있어서도 모든 군에서 미생물은 검출되지 않았으며, 생존동물을 부검 관찰한 병리소견에서도 Burkholderia pyrrocinia CAB08106-4 투여와 관련된 이상은 관찰되지 않았다. 이상의 결과를 통해 급성경구, 급성호흡기 및 급성정맥 시험에서 투여된 미생물의 시험물질은 독성과 병원성에 문제가 없는 것으로 평가되었다.

• 미생물학회지
• /
• 제54권4호
• /
• pp.428-435
• /
• 2018

본 연구는 담수환경에서 항균활성을 보유한 미생물을 발굴하고, 활성 증진을 위해 배양조건을 최적화하는 것이다. 상주시 중동면 오상저수지에서 시료를 채취하여 38종의 미생물을 순수분리하였다. 16S rRNA 염기서열 분석에 근거하여 Proteobacteria강(22종), Actinobacteria강(7종), Bacteroidetes강(6종), Firmicutes강(3종)으로 구성되어있는 것을 확인하였다. 메티실린내성 황색포도상구군 등 10종의 유해미생물에 대한 항균활성을 보유한 Burkholderia sp. OS17 균주를 선발하였다. 항균활성 증진을 위한 상용배지, 온도, 초기 pH별 생육 및 항균활성 비교실험을 수행하였다. OS17 균주는 YPD 배지, $35^{\circ}C$, pH 6.5로 배양했을 때 가장 활성이 높았다. LB, NB, TSB, R2A 배지와 $20^{\circ}C$, $25^{\circ}C$ 배양했을 때는 생장은 가능하나 항균활성이 전혀 없었다. 이전결과를 바탕으로 YPD 배지, $35^{\circ}C$에서 배양하면서 5 L fermenter를 이용하여 생육, 항균활성, pH 확인을 통해 배양 48시간을 최적 배양시간으로 선정하였다. 항균활성을 보유한 미생물의 배양 최적화는 항균물질 생산에 영향을 미치고, 이는 상업적 응용에 이점으로 작용할 수 있다.

• 한국식품영양과학회지
• /
• 제29권6호
• /
• pp.1145-1150
• /
• 2000

면역증강물질을 생산하는 균주를 해수로부터 분리하여 동정한 결과 크림색의 둥근 점질성의 집략을 나타내었으며, Gram 음성의 간산형이고, 미약한 운동성을 가지며 catalase 양성과 oxidase 음성 반응을 보였다. 균주를 6시간 , 20시간, 72시간, 및 144시간 뱅양하여 전자 현미경사에서 관찰한 결과 20시간 배양한 영양세포는 1.25~0.6$\times$0.6$\mu\textrm{m}$ 크기의 간균 형태를 갖추었으며 시간이 흐를수록 세포내 관립의 밀도가 증가하면서 세포형태가 다형태성으로 변하였다. 세포내 과립의 존재를 확인하기 위해 sudan black B로 염색한 결과 양성으로 polyhy-droxy butyrate로 예상되었다. 생육을 위한 최적 온도는 3$0^{\circ}C$, pH는 3.0~10.0이었으며, 호기성균이었다. D-Glu-cose, D-mannose, D-mannitiol. insitol, maltose 등의 당과 L-asparagine, L-glutamate 등의 아미노산을 이용하였고 특시, O/F test에서 glucose와 maltose를 산화 하였다. 이상과 같은 결과로 해양세균 유래인 Pseudo-mallei group의 Burkholderia 속으로 확인되었음로 본 균주를 Burkholderia sp. IS-203으로 명명하였다.

• 미생물학회지
• /
• 제39권4호
• /
• pp.267-271
• /
• 2003

Polycyclic aromatic hydrocarbons(PAHs)를 분해하는 Burkholderia sp. D5를 유류 오염 토양으로 분리하였고, PAHs의 분해특성을 조사하였다. 분리균주는 유일 탄소원으로 phenanthrene(Phe)을 이용하여 생장이 가능하였고, pyrene (Pyr)을 유일 탄소원으로 이용하여 생장하지는 못하였으나 yeast extract(YE)를 공기질로 첨가해 준 조건에서는 Pyr를 분해할 수 있었다. 분리 균주의 PAH 분해속도는 YE, peptone 및 glucose의 첨가에 의해 향상되었으며, 특히 YE 첨가 효과가 가장 우수하였다. 무기염배지(BSM)에 215 mg-Phe/L와 1 g-YE/L를 첨가한 조건에서 Burkholderia sp. D5의 비생장속도(0.28/h)와 Phe 분해속도(29.30 ${\mu}mol$/L/h)는 YE를 첨가하지 않은 조건에서 얻은 비생장속도(0.02/h)와 Phe 분해속도(12.00 ${\mu}mol$/L/h)의 각각 10배 및 2배였다. Phe를 기질로 공급한 경우 최대 비생장속도(${\mu}$_max)와 최대 Phe분해속도(V_max)는 각각 0.34 h-1 및 89 ${\mu}mol$/L/h 이었고. Pyr을 기질로 공급한 경우 ${\mu}$_max와 V_max는 각각 0.27 h-1 및 50 ${\mu}mol$/L/h이었다. Phe 혹은 Pyr 단독 기질하에서 분해속도와 비교 하였을 때(29.30 ${\mu}mol$-Phe L/h, 9.58 ${\mu}mol$-Pyr L/h), 두 기질의 혼합조건에서 Phe와 Pyr 분해속도는 각각 2.20 및 2.18 ${\mu}mol$ L/ h로 저하되었다. Burkholderia sp. D5 균주는 토양에서 Phe와 Pyr을 분해할 수 있었는데, Phe와 Pyr 분해속도는 각각 20.03 및 1.09 ${\mu}mol$ L/h 이었다.

• 미생물학회지
• /
• 제41권3호
• /
• pp.208-215
• /
• 2005

본 연구는 농업과 어업, 그리고 생태체험과 같은 인간들의 활동으로 인하여 상당히 영향을 받는 갯벌환경 중의 하나인 순천만을 모델장소로 갈대의 환경정화 기능에 있어 근권에 분포하는 미생물의 역할에 대한 기초 자료를 얻고자 수행하였다. 우선, 순천만의 갈대근권 토양을 시료로하고 anthracene, naphthalene, phenanthrene, pyrene 등이 첨가된 다환성 방향족 화합물(polycyclic aromatic hydrocarbons; PAH)을 탄소원 및 에너지원으로 하는 농화 배양을 통하여 두 개의 consortium을 획득하였다. 두 consortium으로부터 순수 분리된 우수한 PAH분해능을 갖는 4개의 균주(SCB1, SCB2, SCB6,그리고 SCB7)를 형태 및 생리학적 특성과 16S rRNA유전자서열을 기초로 분석한 결과 각 균주는 $99{\%}$ 이상의 신뢰도로 Burkholderia sp., Aicaligenes sp., Achromobacter sp., and Pseudomonas sp.로 동정되었다. 주목할 만한 점은 Burkholderia sp. SCB1과 Alcaligenes sp. SCB2는 naphthalene이나 phenanthrene보다 훨씬 안정되어 있는 구조의 anthracene이나 pyrene에서 더 빠른 성장률과 기질 분해율을 나타내는 것으로 밝혀졌다. 반면,Achromobacter sp. SCB6와 Pseudomonas sp. SCB7은 pyrene을 제외한 다른 시험기질에 대하여 유사한 성장 및 분해패턴을 나타내었다. 이러한 결과는 주요한 염습지 식물중의 하나인 갈대의 근권에서 살아가는 이들 PAH 분해 균주들이 PAH와 같은 물질로 오염된 근권 환경의 정화작용에 중요한 역할을 할 수 있음을 제시해 주었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제24권7호
• /
• pp.936-942
• /
• 2014

Using racemic (R,S)-2-(4-chlorophenyl)-3-methylbutyramide, an intermediate for the chiral pyrethroid insecticide Esfenvalerate, as a sole nitrogen source in a minimal medium, several strains with high enatioselectivity (${\geq}98%$) were isolated by enrichment techniques. One of the strains, LG 31-3, was identified as Burkholderia multivorans, based on physiological and morphological tests by a standardized Biolog station for carbon source utilization. A novel amidase was purified from B. mutivorans LG 31-3 and characterized. The enzyme exhibited (S)-selective amidase activity on racemic (R,S)-2-(4-chlorophenyl)-3-methylbutyramide. Addition of the racemic amide induced the production of the enantioselective amidase. The molecular mass of the amidase on SDS-PAGE analysis was shown to be 50 kDa. The purified amidase was subjected to proteolytic digestion with a modified trypsin. The N-terminal and internal amino acid sequences of the purified amidase showed a high sequence homology with those deduced from a gene named YP_366732.1 encoding indole acetimide hydrolase from Burkholderia sp. 383.

• 생명과학회지
• /
• 제12권6호
• /
• pp.759-764
• /
• 2002

해수에서 분리한 Burkholderia sp. IS-203으로부터 면역 증강물질을 생산하기 위한 최적조건을 검토한 결과는 다음과 같다. 면역증강물질을 생산하는 최적 배양조건은 인공해수에 1% glucose와 1% yeast extract 였으며, 최적 NaCl 요구성은 3%로 전형적인 해양세균의 특징을 보여주는 것으로 생각되어진다. 그리고 최적 배양조건으로 최적 초기 pH는 8.0, 최적 온도는 $30^{\circ}C$였으며, 산소를 요구하는 호기성균이었다. 면역증강물질을 생산하기 위한 배양조건은$35^{\circ}C$, pH 6.0이었으며, 최적생육 배지는 1.5% soluble starch, 1% tryptone, 0.5% yeast extract로 조성하여 500 $m\ell$의 삼각플라스크에 $50m\ell$씩 분주하여 진탕배양하였다. 이와 같은 최적조건에서 항생물질은 정지기부터 생산되는 비증식연관형으로서 포자형성이후부터 생산되었다.