본 연구에서는 분말 식품에서 real-time PCR과 배지배양법을 사용하여 Cronobacter spp.를 검출하는 방법이 비교검증 되었다. 조제분유, 이유식, 미숫가루에 Cronobacter를 인위적으로 접종시킨 후, 식품공전의 방법에 따라 멸균증류수와 Enterobacteriaceae enrichment (EE) broth에서 각각 1, 2차 증균배양 하였으며, Druggan-Forsythe-Iversen에 선택배양하여 Cronobacter를 검출하였다. Real-time PCR은 멸균증류수 및 EE broth에서 1 ml을 채취한 후 DNA를 추출하여 시행하였다. 실험결과 모든 식품에서 배지배양법과 real-time PCR간에는 통계학적 유의차가 존재하지 않았다(p>0.05). 한편 모든 실험회차에서 real-time PCR 수행 시, 1차 증균액인 멸균증류수에서의 양성검출율이 2차 증균액인 EE broth에서보다 높았는데, 이는 2차 증균액 내의 구성성분 중 일부분이 real-time PCR의 반응을 저해했기 때문으로 사료된다. 연구결과를 종합해 볼 때, 1차 증균 후, real-time PCR을 통해 Cronobacter를 검출하는 방법은 정확한 민감도를 보이면서도 시간과 노동력을 절감할 수 있는 효과적인 방법으로 사료된다.
A total of 42 strains of Candida albicans were examined for susceptibility to three antifungal agents, amphotericin B(AMB), 5-fluorocytosine(5-FC), and ketoconazole(KTZ), using defined medium, synthetic amino acid medium-fungal(SAAM-F), supplemented yeast nitrogen base(SYNB) and undefined medium Sabouraud's dextrose broth(SDB) and Kimmig broth media. A tube dilution method was used with minimum inhibitory concentrations(MICs) determined after incubation for 24 hour and 48 hours. All testes were performed in duplicate. In general, MICs were more reproducible after 48 hour of incubation. Forthermore, MICs determined after incubation for 48 hours were significantly higher than those determined after 24 hours. The actural MICs obtained with the different antifungal agents were clearly influenced by the test medium used. The rank order of AMB MICs according to the test medium was as follows: SAAM-F>SYNB>SDB>Kimmig broth. With 5-FC, the following pattern was observed: SYNB>SAAM-F>SDB>Kimmig borth. For ketoconazole, the MICs according to the test medium was SAAM-F>SDB>SYNB> Kimmig broth. In amphotericin B, the MICs mean value with the test medium was as follows: SDB, 0.24 mcg/ml; Kimmig broth, 0.29 mcg/ml; SYNB, 0.21 mcg/ml and SAAM-F, 0.15mcg/ml. The actural value of 5-FC was; SDB, 37.20 mcg/ml; Kimmig broth, 67.41mcg/ml; SYNB, 21.29 mcg/ml and SAAM-F, 24.61 mcg/ml and in ketoconazole, the MICs value was; SDB, 1.83 mcg/ml; Kimmig broth, 4.08 mcg/ml; SYNB, 1.95 mcg/ml and SAAM-F, 1.41 mcg/ml. The results of this investigation suggested that broth dilution susceptibility testing of yeast and yeast-like fungi are best performed with an incubation period of 48 hours. Furthermore, medium composition can significantly influence the results of such testing.
본 연구는 P. japonira의 액체배양을 통해 HPLC를 이용하여 유용물질인 cordycepin의 농도를 분석하였다. 배지성분중 무기질소원, 아미노산, 무기염류 및 금속이온의 영향을 검토하였다. 그 결과 균사체의 경우에서는 cordycepin의 농도가 매우 낮음을 알 수 있었고, 배양여액의 경우에서는 $(NH_4)_2HPO_4$. histidine. $CaCO_3$ 등을 첨가했을 때 control에 비해 높은 농도의 cordycepin의 생성을 확인할 수 있었다.
버섯 균사체 혼합배양액을 이용하여 어류질병세균에 대한 항균 및, 항산화활성, 그리고 인체 암세포에 대한 항암 활성을 조사하였다. 항균활성 측정 결과 대부분의 시료에서 항균활성이 있는 것으로 나타났다. 그 중 YM broth에서 배양한 상황버섯과 운지버섯 균사체 배양 추출물이 가장 높은 활성을 띄었지만 10% 감귤추출물배지에서 배양한 상황버섯과 운지버섯 균사체 배양 추출물 또한 비교적 활성이 높아 합성배지가 고가임을 고려할 때 의의가 있다고 생각된다. 항산화 활성의 측정결과 10% 감귤추출물배지에서 배양한 상황버섯, 운지버섯, 꽃송이 버섯 균사체 배양추출물과 PD broth에서 배양한 상황버섯과 운지버섯 균사체 배양 추출물의 경우 1 mg/ml에서 90%에 가까운 라디컬 소거활성을 보였다. 항암활성 측정결과 10% 감귤추출액만을 첨가한 대조군보다 모든 실험구가 높은 활성을 나타냈으며 특히 10% 감귤추출물배지에서 배양한 상황버섯, 운지버섯 배양 추출액과 10% 감귤추출물배지에서 배양한 상황버섯, 운지버섯, 꽃송이버섯 균사체 배양 추출액이 높은 활성을 나타났다. 이러한 다양한 생리활성을 측정한 결과 최종적으로 감귤농축액이 첨가된 버섯균사체 배양 추출물들의 활성이 가장 좋은 것으로 나타났으며, 감귤의 천연배지로서의 이용가능성을 확인할 수 있었다. 따라서 감귤농축액 및 버섯균사체 혼합 배양을 이용한 다양한 사료첨가제 및 신소재의 개발이 가능할 것이다.
A total of 30 strains of Candida albicans were examined for susceptibility to amphotericin B and ketoconazole using Sabouraud's dextrose broth, Kimmig broth and Supplemented yeast nitrogen base broth media. Furthermore, the growth curve and colony forming units were checked for use of stationary-phase cells and 2-hour incubation cells in the absence of atifungal agents. The viable counts were determined periodically during incubation by standard plate count techniques. The minimum inhibitory concentrations of amphotericin B for use of stationary phase cells were as follows: SDB, $0.09{\sim}0.97mcg/ml$(0.39mcg/ml); Kimmig broth, $0.19{\sim}0.39mcg/ml$(0.42 mcg/ml) and SYNB, $0.19{\sim}0.39mcg/ml$mcg/ml(0.23mcg/ml). In ketoconazole, MICs were value SDB, $3.12{\sim}25.0mcg/ml$(12.5mcg/ml); Kimmig broth, $12.5{\sim}25.0mcg/ml$ (22.5mcg/ml) and SYNB, $3.12{\sim}12.5mcg/ml$(6.71mcg/ml). The MICs of amphotericin B(0.2mcg/ml cone.) for use of 2-hour incubation cells in absence of AMB were, SDB, $0.04{\sim}0.39mcg/ml$(0.11mcg/ml); Kimmig broth, $0.09{\sim}0.39mcg/ml$(0.18mcg/ml) and SYNB, $0.09{\sim}0.19mcg/ml$(0.14mcg/ml) and in KTZ, the value of MICs were SDB, $3.12{\sim}25.0mcg/ml$(12.22mcg/ml); Kimmig broth, $0.78{\sim}25.0mcg/ml$(11.01mcg/ml) and SYNB, $1.56{\sim}12.5mcg/ml$(3.90mcg/ml). The two-log reductions in CFU per milliliter observed when 2 hour preincubation cells were treated with 0.2mcg/concentrations of AMB and 25.0mcg/ml of KTZ. However, AMB treated cells were restored to growth activity, it suggested that the AMB has no active antifungal activity.
맥주 폐 효모액(waste from beer fermentation broth, WBFB)은 바이오 에탄올 생산을 위한 우수하고 저렴한 원료이다. 본 연구에서는 바이오 에탄올 생산을 위해 WBFB의 당화능과 발효능을 확인하는 실험을 진행하였다. 당화능은 온도를 30, 40, 50, 60, $70^{\circ}C$로 다르게 하여 실험했는데 온도가 올라감에 따라 당화능은 증가하였고 4시간 후 $60^{\circ}C$와 $70^{\circ}C$에서 많은 양의 glucose가 생산되었다. WBFB와 chemically defined media (CDM) 혼합물에서는 어떠한 미생물의 첨가 없이도 발효가 되어 에탄올이 생산되었다. 동시당화발효능을 30, 40, 50, $60^{\circ}C$의 다양한 온도에서 실험해본 결과 $30^{\circ}C$에서 에탄올이 가장 많이 생산되었다. 또 이 실험은 WBFB, starch 용액 그리고 CDM을 이용하여 수행하였는데 WBFB에 있는 당화 효소와 효모가 어떠한 추가적 미생물 첨가 없이 당화와 발효를 가능케 하는 요인이었다.
Optimal media and cultural conditions for the production of prodigiosin-like pigment were established using Serratia sp. KH-95. Glucose and phosphate(K2PO4) stimulated the cell growth, but inhibited the production of pigment at concentration levels of above 10 g/L and 2.0 g/L, respectively. Addition of soy been oil or rice oil to the production medium accelerated cell growth up to more than 2-3 times, but the production of prodigiosin increased about 15-20% in spite of the good cell growth. The effect of pH on the production of pigment was investigated in a 5 liter-bioreactor. When the pH of culture broth was maintained below 8.0, most of pigment was attached to the surface of cells. When the pH of culture broth was above 8.5, however, about 70% of total pigment was suspended in the supernatant of the broth. The cell growth and production of pigment were inhibited at dissolved oxygen concentration of below 10% of air-saturation.
A fungus, Penicillium sp. PS-113, isolated from soil showed the high phosphate-solubilizing activity in patato dextrose broth-rock phosphate to produce free phosphates to the culture broth with the concentrations of 585 ppm against rock phosphate. In this medium, the optimum temperature and initial pH to solubilize rock phosphate were 30$^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. In order to make the mass production of the conidia from this fungus, we cultured in on various solid-based media like barley, corn, wheat, rice, rice bran, and compost. As a result, the fungus highly produced conidia ranging from 2.1 to $5.1{\times}10_9$ conidia/g${\cdot}$media on these solid media except compost-based medium, which was 0 times less than others. Effects of inoculation of the phosphate solubilizing fungus as a biofertilizer were studied in perlite-based pot cropped with Zea mays Suwon 19. Inoculation of Penicillium sp. PS-113 increased in plant height (1.4 times), plant weight (5.2~8.1 times) and root length (1.1~1.2 times) at 60-day cultivation, compared to Hogland solution either without $NH_4H_2PO_4$ or displace $NH_4H_2PO_4$ to powdered rock phosphate, a phosphorus source for plant growth.
구취를 일으키는 구강 내 혐기성 세균 일종인 Fusobacterium nucleatum은 유황 성분이 함유된 배지에서 $H_2S$와 같은 휘발성 유황화합물을 생성하고 철 성분과 결합하면 FeS를 형성한다. 구강내 여러 인자에 의하여 Fusobacterium nucleatum에 의하여 생성되는 유황화합물 농도가 달라진다. 본 연구에서는 Fusobacterium nucleatum의 유황화합물 생성시 영양 물질과 pH의 영향을 연구하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 배지에 sodium thiosulfate가 1.0% 되도록 첨가하면 배지의 흡광도는 $0.817{\pm}0.032$로, L-cysteine hydrochloride를 0.05% 되도록 첨가하면 $1.297{\pm}0.024$가 되었다. 2. 배지에 자일리톨을 첨가하면 배지의 흡광도는 $0.799{\pm}0.032$인데 반하여 포도당과 병합으로 첨가하면 $1.775{\pm}0.003$으로, 과당과 병합으로 첨가하면 $1.648{\pm}0.022$로 증가하였다. 3. 배지의 pH가 5.5 이상이면 휘발성 유황화합물 농도는 20,000 ppb이상이었다. 배지의 흡광도는 배지 내 L-cysteine hydrochloride 농도가 높을수록 높았으며, 배지의 pH가 산성으로 갈수록 낮았다. 4. 배지 위에 증류수나 식염수가 있을 때, 그리고 그 양이 적을수록 휘발성 유황화합물 농도는 높았다. 이상의 결과를 종합하면 Fusobacterium nucleatum에 의한 유황화합물 생성 이 자일리톨과 산에 의하여 억제되었다.
The hyphal growth, production of color pigments and monacolin K by Monascus strains were investigated in liquid medium. Thirty five different strains were collected and cultured in potato dextrose yeast extract broth (PDYB), potato dextrose broth (PDB) and malt extract broth (MEB) medea at $25^{\circ}C$ for 7 days. The growth rates of most of strains were highest in PDYB medium. Growth rate as well as pigment production were influenced by suspension conditions of mycelia during liquid cultivation. Most of strains producing monacolin K corresponded to strains producing red pigment highly and showing more pH changes of liquid media. Monacolin K produced from strains was detected in culture broth as well as mycelia. Any citrinin was not detected in monacolin K producing strains. These results imply that the selection of the strains producing red pigment highly and showing more pH changes in liquid cultivation could be applied for primary screening of Monascus strains for preparation of red mold rice.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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