• Applied Biological Chemistry
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• 제41권8호
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• pp.563-567
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• 1998

Computer aided molecular modeling can help to predict the three dimensional structure of the polypeptide without the sample. The study on soybean Bowman-Birk protease inhibitor (SBI) is valuable, because it has been recently known that SBI possesses anticarcinogenic activities and immune-stimulating properties. SBI has several isoinhibitors, whose isolation and characterization were reported in 1990. Among these, DII inhibits trypsin only. The different inhibitory specificities cannot be explained only by their different primary sequences, but is possible with further assistance by the study on their different three dimensional structures. The study on the three dimensional structure of DII using homology method is reported in this paper.

• Applied Biological Chemistry
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• 제32권2호
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• pp.116-125
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• 1989

대두로부터 추출, 정제한 Bowman-Birk형 protease inhibitor 들의 함량과 전기영동양상을 비교하고 정제된 inhibitor내에 존재하는 각 isoinhibitor들의 함량을 조사하였으며 종실내 총 chymotrypsin 저해활성도와 cysteine 함량과의 관계를 알아보았다. 8품종의 대두로부터 Sephadex G-75를 이용하여 얻은 정제된 Bowman-Birk형 protease inhibitor들의 함량은 단백질 100g당 $6.67{\sim}9.36g$으로 품종간에 큰 차이가 있었다. 정제된 Bowman-Birk형 protease inhibitor들의 전기영동 양상은 품종간에 많은 차이를 보였으며 각 band의 함량에도 차이가 있었다. 8품종의 정제된 inhibitor에서 나타나는 총 14개의 전기영동 band 중 10개의 band가 protease 저해활성도를 보유하였고 그중 chymotrypsin 저해활성도가 높은 것은 band 7이었으며 그 함량은 단백질 100g당 $0.768{\sim}1.271g$으로 품종간에 차이를 보여 종실내 chymotrypsin 저해활성도가 높은 품종에서 함량이 많았다. 대두품종별 chymotrypsin 및 trypsin저해활성도는 각각 종실 g당 $52,200{\sim}15,225$와 $164,700{\sim}37,500$으로 품종간에 3배 및 4배의 차이를 보였고 단백질 g당으로 환산한 값은 $158,662{\sim}40,033$ 및 500, $608{\sim}120,347$로서 종실 g당 저해활성도와 같은 경향이었으며 3배 이상의 차이를 보였다. 품종별 cysteine 함량은 단백질 g당 $0.1258{\sim}0.0763-mmoles$로서 품종간에 차이를 나타내었으며 이는 실내 총 chymotrypsin 저해활성도와 정의상관관계가 있었다.

• 식품기술
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• 제13권2호
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• pp.98-108
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• 2000

• Applied Biological Chemistry
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• 제42권4호
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• pp.310-316
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• 1999

대두가공제품 중에 존재하는 Bowman-Birk protease inhibitor(BBPI) 함량을 protease 저해활성 측정 및 경합 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay(ELISA)로 살펴보았다. 항체제조를 위한 BBPI는 ion exchange chromatography와 전기영동 후 gel slicing 방법으로 시판 soybean trypsin-chymotrypsin inhibitor로부터 순수, 분리하였다. 순수분리한 BBPI를 면역원으로 rabbit anti-BBPI antibody를 조제하였으며 단백질 농도별 titration방법으로 BBP에 비교적 선택적으로 결합하는 항체임을 확인하였다. 이를 이용한 경합 ELISA 방법으로 BBPI를 정량하기 위한 표준 정량곡선을 작성하였으며 시료용액중의 BBPI 함량이 $0.03{\sim}30\;{\mu}g/ml$ 범위일 경우에 정량적인 분석이 가능하였다. 대두품종별 chymotrypsin 저해활성은 $8,462{\sim}12,428\;U/g$이었으며 BBPI 함량은 $482{\sim}692\;mg%$ 이었다. 시판 대두 가공제품 중에서 5종의 콩나물은 건물량 기준으로 $10,695{\sim}13,249\;U/g$의 chymotrypsin 저해활성과 $529{\sim}803\;mg%$의 BBPI 함량을 나타내었으며 일부 두부제품에서도 68.9 mg%정도의 BBPI가 검출되었다. 그 밖의 두유, 된장, 고추장 및 간장 등의 대두발효식품, 탈지대두박 등에서는 chymotrypsin 저해활성 및 BBPI가 거의 검출되지 않았다.

• BMB Reports
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• 제33권2호
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• pp.112-119
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• 2000

Three kinds of serine protease inhibitors, members of the Bowman-Birk trypsin inhibitor, were purified from Dolichos lablab seeds and named Dolichos protease inhibitor 1, 2 and 3 (DI-1, DI-2 and DI-3), respectively. Each inhibitor showed a single band with gel mobility at around 15.9, 12.1 and 14.6 kDa on 20% SDS-PAGE under reducing conditions. To characterize inhibitory specificity, the inhibition constant (Ki) for these inhibitors was measured against several known serine proteases. All three Dolichos protease inhibitors (DI-1, DI-2 and DI-3) inhibited the activity of trypsin and plasmin, but had no effect on thrombin and kallikrein (either for human plasma kallikrein or for porcine pancreas kallikrein). DI-1 inhibited chymotrypsin most effectively (Ki = $3.6{\times}10^{-9}\;M$), while DI-2 displayed inhibitory activity for porcine pancreatic elastase (Ki = $6.2{\times}10^{-8}\;M$). Pre-treatment of the 33 mg/kg of DI-mixture (active fractions from $C_{18}$ open column chromatography that included DI-1, DI-2 and DI-3) inhibited the induction of pseudomonal elastase-induced septic hypotension and prevented an increase in bradykinin generation in pseudomonal elastase-treated guinea pig plasma. Also, the increase of kallikrein activity, by injection of pseudomonal elastase, was inhibited by the pretreatment of the DI-mixture in a guinea pig. Since the DI-mixture had no inhibitory effect on kallikrein activity when Z-Phe-Arg-MCA was used as a substrate in vitro, its inhibitory activity in the pseudomonal elastase-induced septic hypotension model might not be due to a direct inhibition of plasma kallikrein in the activation cascade of the Hageman factor and prekallikrein system. These results suggest that the Dolichos DI-mixture might be used as an inhibitor in pathogenic bacterial protease-induced septic shock.