Bovine colostrum contains various bio-functional Proteins. Especially, transforming: growth factor-${\beta}$1 (TGF-${\beta}$1) has a function in concerns with immune response. The purpose of this study was to establish the purification Processing of transforming growth factor-${\beta}$1(TGF-${\beta}$1). The highest concentration of TGF-${\beta}$1 was measured within 48 h after parturition in bovine colostrum using ELISA kit. Purification of TGF-${\beta}$1 from whey protein was carried out by the gel filtration, AF-heparin chromatography and AF-heparin rechromatography. After final purification step, TGF-${\beta}$1 with a molecular weight of 25 kD was obtained, and confirmed by silver staining and western blotting. Finally, TGF-${\beta}$1 was identified native form of 25 kD and reducing form of 12.5 kD by reducing agent.
A colostral protein that augments natural killer (NK) cell activity was isolated from bovine colostrum. This protein, designated matemal immunity enhancing factor (MIEF), increased NK cell-mediated cytotxicity against human tumor targets wheb added to cultures of resting peripheral blood lymphocytes. The NK cell stimulatory activity of the MIEF was demonstrated at the concentrations as low as 0.1-0.01 $\mu$g/ml. Purified MIEF showed an apparent molecular weight of 22,000 in SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The unusual biochemical characteristics of the MIEF distinguish it from other cytokines. The MIEF was soluble at a cold tgemperature, and precipitated by raising the temperature. This themal precipitability was reversible, and dependent on the concentration, pH and ionic strength. Maximal precipitation was observed at neutral pH, and higher ionic strength.
Milk exosomes contain several bioactive molecules, including lipids, proteins, and miRNAs, which enhance immune response. This study aimed to assess the resistance effects of bovine colostrum exosomes (BCEs) on pathogenic microbial infections in a Caenorhabditis elegans model. BCEs have been shown to enhance the protective response of C. elegans to pathogenic bacterial infections. Our study revealed that BCE extended the lifespan of worms compared to control OP50 worms. In addition, nematode colostrum exosomes promoted nematode resistance to four pathogenic bacteria and prolonged their lifespan in a killing assay. In contrast, mature milk-derived exosomes (BME) did not affect the resistance and lifespan of nematodes exposed to pathogenic bacteria. BCE exposure extended the lifespan of C. elegans against pathogenic infections by stimulating the innate immune response and increasing antimicrobial protein expression. Using biological process-related gene ontology (GO) enrichment analysis, the significantly upregulated GO terms related to C. elegans immunity in BCE-exposed C. elegans included defense, innate immunity, and immune responses. This study demonstrated that BCE enhanced the host defense of C. elegans to prolong its lifespan, thereby suggesting a new natural product against infection by pathogenic bacteria.
This paper outlines research to study two aspects of Cryptooridium. First, specific antigenic determinants were identified and followed through the growth cycle of C. parvum to investigate antigenic sharing of molecular epitopes among the different life cycle stages. Secondly, the importance of passive immune protective mechanisms in cryptosporidial infection was assessed by following the course of infection in neonatal mice which have been subjected to treatments using either monoclonal antibodies (mAbs) or hyperimmune bovine colostrum.
These experiments were carried out to isolate SIgA from human and bovine milk. The immunochemical properties of SIgA from human and bovine milk were examined by Gel filtration, DEAE and SDS-PAGE. Double Immunodiffusion, and Immunoelectrophoresis. The results obtained are as follows: 1. Human SIgA was purified from colostrum of Korean women by repeated gel filtration on Sephadex G-200 and Sepharose 6B, but bovine SigA was not cleary purified from bovine colostrum of Holstein cows by anion exchange chromatography using DEAE-Sephadex A-50 and gel filtration on Sephadex G-200 and Sepharose 6B. 2. The immunochemical properties of fractions from gel filtration on the Sephadex G-200 and Sepharose 6B column as assessed by Immunoelectrophoresis and double Immunodiffusion to identify the presence of IgM in first peak fraction, and the presence of pure SIgA in second peak fraction. However, Bovine SigA rich fraction from bovine colostrum of Holstein cows contained a large amount of $IgG_1$-dimer in addition to SIgA. 3. The fragments of reduced bovine colostrum SIgA rich fraction were estimated to have molecular weights of secretory component, heavy chain and light chain (75,000-80,000, 50,000-60,000, 25,000-27,000 daltons) by SDS-PAGE, respectively. Those were similar to the molecular weight of reduced SIgA from human milk.
Colostrum basic proteins (CBP) (MW 1$\sim$30 kDa) were isolated from bovine colostrum using a series of ultrafiltration processes and their effects on osteoblast cell proliferation and bone metabolism were investigated in cell line and animal models. Treatments with CBP (1, 10, 100 $\mu$g/mL) dose-dependently increased cell proliferation of osteoblastic MC3T3 cells. Alkaline phosphatase activity, a marker of osteoblastic phenotype, in the cells was also increased after treatments with CBP in a dose-dependent manner. Significant increases in bone density were observed in femur of ovariectomized rats which were fed a diet with 1% and 10% CBP, compared to rats fed a normal diet. These results suggest that CBP may increase bone mass and density and be useful for the prevention of bone-related diseases.
Porcine colostrum and milk were separated into the acid-soluble and casein fractions by acidification followed by centrifuge. The acid-soluble fraction of porcine colostrum was further separated by liquid chromatography and anisotropic membrane filtration. Trypsin and chymotrypsin inhibitory capacity in porcine colostrum, milk and their components was determined by incubating bovine trypsin or chymotrypsin in a medium containing their corresponding substrates with or without addition of various amounts of porcine colostrum, porcine milk or their components. The inhibition of insulin-like growth factor I (IGF-I) and epidermal growth factor (EGF) degradation in pig small intestinal contents by porcine colostrum was measured by incubating iodinated IGF-I or EGF with the intestinal contents with or without addition of porcine colostrum. Degradation of labeled IGF-I or EGF was determined by monitoring the generation of radioactivity soluble in 30% trichloroacetic acid (TCA). The results showed that porcine colostrum had high levels of trypsin and chymotrypsin inhibitory activity and increased the stability of IGF-I and EGF in pig intestinal contents. The inhibitory activity declined rapidly during lactation. It was also found that trypsin and chymotrypsin inhibitory activity and the inhibition on IGF-I and EGF degradation in the acid-soluble fraction were higher than that in the casein fraction. Heat-resistance study indicated that trypsin inhibitors in porcine colostrum survived heat treatments of $100^{\circ}C$ water bath for up to 10 min, but exposure to boiling water bath for 30 min significantly decreased the inhibitory activity. Compared with the trypsin inhibitors, the chymotrypsin inhibitors were more heatsensitive. Separation of the acid-soluble fraction of porcine colostrum by liquid chromatography and anisotropic membrane filtration revealed that the trypsin and chymotrypsin inhibitory capacity was mainly due to a group of small proteins with molecular weight of 10,000-50,000. In conclusion, the present study confirmed the existence of high levels of protease inhibitors in porcine colostrum, and the inhibition of porcine colostrum on degradation of milk-borne growth factors in the pig small intestinal tract was demonstrated for the first time.
Extracellular microvesicles are membranous nano-sized cellular organelles secreted by a variety of cells under normal and pathological conditions and heterogeneous in size ranging from 30 nm to $1{\mu}m$. They carry functional microRNAs that can influence immunity and development. For a particular application of microvesicles, choice of isolation method is particularly important; however, their isolation methods from colostrum in particular have not been described clearly. In this work, differential ultracentrifugation as a conventional method, ultracentrifugation with some modification such as additional precipitations, ultrafiltration, sucrose gradient separation and ExoQuick$^{TM}$ as a commercial reagent were compared. The goal was to compare mainly microvesicular total microRNA yield, distribution and purity among the methods then select the best isolation method for bovine colostrum microvesicles based largely on microRNA yield with the view of applying the vesicles in work where vesicular microRNA cargo is the target bioactive component. Highest yields for vesicular microRNA were obtained using conventional methods and among them, subsequent ultracentrifugation with 100,000 g and 135,000 g conventional method 2 was selected as it had the highest RNA to protein ratio indicating that it pelleted the least protein in relation to RNA an important factor for in vivo applications to assess microvesicle functionalities without risk of contaminating non-vesicular biomaterial. Microvesicles isolated using conventional method 2 were successfully internalized by cells in vitro showing their potential to deliver their cargo into cells in vitro and in vivo in case of functional studies.
Renchinkhand, Gereltuya;Son, Ji Yoon;Nam, Myoung Soo
Journal of Dairy Science and Biotechnology
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v.34
no.1
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pp.1-7
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2016
Colostrum, a nutrient-rich fluid produced by female mammals after giving birth, is the specific initial diet of mammalian neonates. Colostrum is important for the nutrition, growth, and development of newborn infants and contributes to the immunologic defense of neonates. It contains immunoglobulins, antimicrobial peptides, such as lactoferrin and lactoperoxidase, and other bioactive molecules, including growth factors, such as IGF (insulin-like growth factor), EGF (epithermal growth factor), $TGF-{\beta}$ (transforming growth factor), and FGF (fibroblast growth factor). Bovine colostrum is a rich source of growth factors, which play a central role in wound healing. The biological activities of colostrum emphasize the relevance of the synergistic activity of growth factors to stimulate keratinocyte proliferation and migration, which are essential for tissue repair. Colostrum increases the expression of early differentiation markers, such as keratin 1 and 10 and involucrin, and late differentiation markers, including loricrin and filaggrin. Additionally, colostrum increases granulation tissue volume in the dermis, suggesting that it has a beneficial effect on wound healing. The therapeutic use of colostrum or individual peptides present in colostrum has a positive and curative influence on various gastrointestinal diseases.
The importance of milk for the growth and health of a newborn offspring is well known. Milkcontains immunoglobulin G (Ig G), Ig A, lactoperoxidase, lactoferin, cytokines, and growth factors.Osteopontin, one of the multifunctional proteins, is secreted by macrophages, T cel, and epithelial cells.bovine milk have not been clarified. The aim of this study was to observe the expression of osteopontin,in bovine milk during the lactation period or bovine mamary glands..Western blot analysis detected thatosteopontin was expressed in bovine milk whey and mamary glands. The expression level of osteopontinin colostrum whey was higher than those in early milk and mature milk whey. Immunohistochemistryshowed that osteopontin was detected in the glandular epithelium and epithelial cels of intralobular ductof mamary glands. These findings suggest that osteopontin transiently shows high expression in colostrumand plays a potential role in the immunological development of breast-fed calves.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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