The bramble cultivated widely in South Korea, which is known as Bokbunja-ddal-gi, is regarded as having originated from Korean native Rubus coreanus. This study was carried out to obtain basic phylogenetic information on Korean cultivated bramble (KCB) by comparing the internal transcribed spacer (ITS) regions with those of R. coreanus, blackberry (R. lanciniatus), black (R. occidentalis) and red (R. idaeus) raspberry. Sequences of the ITS 1 suggest that some KCB accessions share a significant similarity with both R. occidentalis and R. coreanus in the ITS 1 region. The ITS 2 sequences of the three KCB accessions clustered more closely to those of two R. occidentalis accessions than to those of R. coreanus. These results suggest that there exist variations in the sequences of ITS among KCB accessions and KCB accessions are more closely related to black raspberry than R. coreanus in the ITS regions.
Korean cultivated bramble, which is known as Bokbunja-ddal-gi is regarded to be originated from Korea native Rubus coreanus. However, little scientific evidence and significant morphological differences between Korean cultivated bramble(KCB) and R. coreanus throw doubt on the ancestry of KCB. This study was carried out to obtain phylogenetic information on KCB by comparing its nuclear genomic background with those of R. coreanus, black(R. occidentalis) and red(R. idaeus) raspberry, blackberry(R. lanciniatus) and R. crataegifolius. A total of 99 random amplified polymorphic DNA(RAPD) markers were generated and used for phylogenetic analysis of 76 Rubus accessions. Accessions of each species were grouped into each distinct subclade by the RAPD markers at a similarity coefficient of about 0.59. The KCB subclade formed a clade with R. occidentalis and R. crataegifolius subclades at a similarity coefficient of 0.47. The R. coreanus subclade formed a clade with R. idaeus, R. lanciniatus and R. crataegifolius subclades at a similar similarity coefficient. Only one KCB accession from Hoengsung was included in R. coreanus subclade. The accession shows leaf and flower characteristics different from the rest of the KCB accessions. The phylogenetic relationship inferred from the RAPD markers suggests that the nuclear genomic background of KCB accessions which show morphological similarity to black raspberry is more closely related to black raspberry than to R. coreanus. This brings about the need for close scientific evaluations on the ancestry of KCB at both morphological and molecular levels.
Cyanidin-3-glucoside (C3G) has been known to be more bioavailable than cyanidin-3-rutinoside (C3R), the most abundant anthocyanin in black raspberry (Rubus occidentalis). The aim of this study was to enhance the bioavailability of anthocyanins in black raspberry by cleaving ʟ-rhamnose in C3R using crude enzyme extracts (CEEs) from Aspergillus usamii KCTC 6956, A. awamori KCTC 60380, A. niger KCCM 11724, A. oryzae KCCM 12698, and A. kawachii KCCM 32819. The enzyme activities of the CEEs were determined by a spectrophotometric method using ρ-nitrophenyl-rhamnopyranoside and ρ-nitrophenyl-glucopyranoside. The CEE from A. usamii had the highest α-ʟ-rhamnosidase activity with 2.73 U/ml at 60℃, followed by those from A. awamori and A. niger. When bioconversion of C3R to C3G in black raspberry was analyzed by HPLC-DAD, the CEEs from A. usamii and A. awamori hydrolyzed 95.7% and 95.6% of C3R to C3G, respectively, after 2 h incubation. The CEEs from A. kawachii and A. oryzae did not convert C3R to C3G in black raspberry.
본 연구는 전립선암세포주인 LNCaP 세포주와 테스토스테론으로 유도된 전립선비대 백서모델에서 복분자 추출물의 전립선비대 억제 효과를 조사하였다. 첫째, 전립선암 세포주(LNCaP)에서 복분자 미숙과 추출물의 안드로겐 관련 전립선비대 유전자 억제 효과를 조사한 결과 미숙과 50% 에탄올 추출물은 안드로겐 수용체(AR)뿐만 아니라 전립선특이항원(PSA)과 5-알파 환원 효소 type 2(5AR2)의 발현을 가장 높게 억제하였다. 또한 LNCaP 세포에 DHT로 안드로겐 관련 유전자를 유도한 후 복분자 미숙과 50% 에탄올 추출물을 처리한 결과 AR과 PSA mRNA의 발현이 억제됨을 확인하였다. 둘째, 테스토스테론을 이용하여 전립선비대를 유도한 동물모델에서 복분자 미숙과 50% 에탄올 추출물을 6주간 투여한 후 전립선비대 개선 효과를 조사한 결과, 전립선비대유발군에 복분자 미숙과 추출물을 투여한 군에서 전립선 무게, 전립선 소포의 상피세포 두께 및 면적이 감소함을 확인할 수 있었고, 전립선비대 유발 호르몬인 DHT level이 감소함을 확인할 수 있었다.
본 연구에서는 토종 복분자와 외래종 복분자의 항산화 활성과 장세포 산화스트레스 보호의 차이를 알아보기 위해 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량, DPPH 및 ABTS 라디칼소거능, FRAP assay를 이용한 환원력을 비교 조사하였고, 사람의 장내 세포인 Caco-2 cell에 과산화수소를 이용하여 자극시켜 장세포 산화스트레스 보호를 확인하였다. 총 폴리페놀 및 플라보노이드 함량은 외래종 복분자가 유의적으로 높은 것으로 나타났다. ABTS 라디칼 소거능과 FRAP assay을 이용한 환원력에서도 외래종 복분자가 유의적으로 높은 것으로 나타났으나 DPPH 라디칼 소거능은 토종과 외래종 복분자 모두 비슷하게 나타났다. 장세포 산화스트레스 보호 역시 외래종 복분자가 유의적으로 높게 나타났다. 항산화 성분과 항산화 활성의 상관관계는 모두 유의하게 양의 상관관계를 보이는 것으로 나타났으며, FRAP value가 가장 높은 상관관계를 보이는 것으로 확인되었다. 따라서 FRAP value가 높았던 외래종 복분자 100% EtOH 추출물이 폴리페놀 함량, 플라보노이드 함량, ABTS 라디칼 소거능, DPPH 라디칼 소거능, 장세포 산화스트레스 보호능 모두 높은 추출물로 확인되었다.
The plant Rubus species (Rosaceae) mainly contains $19{\alpha}-hydroxyurane-type$ triterpenoids $(19{\alpha}-HUT)$ as bioactive components. Available functional food includes blackberry (the fruit of thornless Rubus sp.), red raspberry (R. idaeus) and black raspberry (R. occidentalis). However, the fruit of R. coreanus, which is used in Korea as a functional food, substitutes black raspberry. Rubi Fructus, which has been traditionally used as an oriental medicinal drug, designates only unripe fruit of R. coreanus but not its ripe fruit which indicates that it needs high content of $19{\alpha}-HUT$ as a crude drug. Throughout our experiment, we found that ripe fruits contain very little amount of $19{\alpha}-HUT$ when compared to unripe fruits. In addition, various and rich $19{\alpha}-HUT$ has been reported from Rubus species. The most common structure of $19{\alpha}-HUT$ of Rubus species, euscaphic acid or tormentic acid with $3{\alpha}-OH$ or $3{\beta}-OH$, respectively, can be glycosylated or oxidized to produce a number of $19{\alpha}-HUTs $as euscaphic acid and tormentic acid derivatives and even esterified to form dimeric triterpenoids. In this review, the bioactivity and biosynthetic pathway and chemical characterization of $19{\alpha}-HUTs$ found in Rubus species are discussed.
There is a considerable difference in morphological traits between Bokbunja cultivated in Korea (KCB) and Korea native Rubus coreanus, contrary to the conviction that the cultivated Bokbunja is the domestication of R. coreanus. To infer the phylogenetic relationship of KCB with other Rubus species, we compared the chloroplast DNA spacers of KCB with those of several Rubus species including black raspberry, R. occidentalis. The three chloroplast DNA spacers, atpB~rbcL, trnL~trnF, and trnT~trnL, were amplified using the specific primer pairs and converted to Single Strand Conformational Polymorphism (SSCP) markers. The SSCP makers of the chloroplast DNA spacers showed a considerable variation both within and among Rubus species. In the phylogenetic tree generated by the SSCP markers, KCB accessions were located in the same clade with R. occidentalis, but R. coreanus accessions in the different clade. Also, in the phylogenetic tree by the nucleotide sequences of the chloroplast DNA spacer trnL~trnF, KCB located in the same clade with R. occidentalis but not with R. coreanus. These results suggest that the three KCB accessions share higher similarity with R. occidentalis than with R. coreanus in the three chloroplast DNA spacers.
Cinnamate-4-hydroxylase (C4H) is a key enzyme of phenylpropanoid pathway, which leads a variety of secondary metabolites to participate in differentiation and protection of plant against environmental stresses. In this study, we isolated a full-length cDNA of the C4H gene from a black raspberry (Rubus occidentalis L.), using a reverse transcriptase-PCR and rapid amplification of the cDNA ends (RACE)-PCR. The full-length cDNA of the RocC4H gene contained a 1,515 bp open reading frame (ORF) encoding a 504 amino acid protein with a calculated molecular weight of about 57.9 kDa and an isoelectric point (pI) value of 9.1. The genomic DNA analysis revealed that RocC4H gene had three exons and two introns. By multiple sequence alignment, RocC4H protein was highly homologous with other plant C4Hs, and the cytochrome P450-featured motifs, such as the heme-binding domain, the T-containing binding pocket motif (AAIETT), the ERR triad, and the tetrapeptide (PPGP) hinge motif, were highly conserved. Southern blot analysis revealed that RocC4H is a single copy gene in R. occidentalis.
Lactic acid fermentation of black raspberry (Rubus occidentalis) juice was carried out by using the Lactobacillus plantarum GBL17 strain. The sterilized black raspberry juice was fermented using the L. plantarum GBL17 strain at $30^{\circ}C$ for 72 hours after which the total acidity increased and the pH value decreased. In addition, the highest total acidity content (2.38%) was reached, the lowest pH value (3.22) was observed, and the sugar content decreased by $9.8^{\circ}Brix$ after the 72 hour fermentation. The number of viable cells rapidly increased up until 24 hours, after which it gradually decreased. HPLC analysis of the organic acids showed 14.51 mg/g of lactic acid content in the fermented black raspberry juice, which was not detected in the non-fermented black raspberry juice (control). The content of fructose and glucose slightly decreased after fermentation. The total polyphenol and flavonoid contents of the fermented black raspberry juice increased significantly after fermentation. The DPPH radical scavenging activity of fermented black raspberry juice (70.92%) was higher than that of the control (62.96%). After lactic acid fermentation, there was no significant increase in ABTS radical scavenging activity. These results confirm that lactic acid bacteria, such as L. plantarum GBL17, showed generally higher activities with a potential as a functional beverage.
Flavanone-3-hydroxylase (F3H) is one of the key enzymes for the biosynthesis of flavonals, anthocyanins, catechins and proanthocyanins. F3H catalyzes the $3{\beta}$-hydroxylation of (2S)-flavonones to form (2R, 3R)-dihydroflavonols. In this report, we isolated a full-length cDNA of RocF3H from black raspberry (Rubus occidentalis L.) using a reverse transcriptase-PCR and rapid amplification of the cDNA ends (RACE)-PCR. The full-length cDNA of RocF3H contains a 1,098 bp open reading frame (ORF) encoding a 365 amino acid protein with a calculated molecular weight of about 41.1 kDa and isoelectric point (pI) of 5.45. The genomic DNA analysis revealed that the RocF3H gene had three exons and two introns. Comparison of the deduced amino acid sequence of the RocF3H with other F3Hs revealed that the protein is highly homologous with various plant species. The conserved amino acids ligating the ferrous iron and the residues participating in the 2-oxoglutarate binding (R-X-S) were found in RocF3H at the similar positions to other F3Hs. Southern blot analysis indicated that RocF3H exist a multi-gene family. The isolation of RocF3H gene will be helpful to further study the role of F3H gene in the biosynthesis of flavonoids in R. occidnetalis.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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