• 생명과학회지
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• 제28권1호
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• pp.99-104
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• 2018

Streptococcus pneumoniae는 pneumolysin과 같은 병원성 인자를 가지고 있으며, 지역사회에서 전파되는 심각한 병원성균에 포함된다. Pneumolysin (PLY)은 콜레스테롤 의존적으로 세포막에 구멍을 형성하는 세포독소로서 백신의 주요한 표적 항원이다. PLY의 연구를 위하여 Streptococcus pneumoniae D39 균주에서 추출한 genomic DNA를 주형으로 하여 PCR을 시행하였다. 합성된 PLY 유전자 DNA를 pQE-30 vector에 삽입하고, E. coli M15에 형질전환 시킨 후 LB 배지에 IPTG를 첨가하여 PLY 단백질을 생산하였다. 재조합 단백질은 $Ni^{2+}$-agarose column을 사용하여 정제하였다. 또한, EGFP를 PLY C-말단에 부착한 융합단백질도 동일한 방법으로 클로닝하여 재조합 단백질을 생산하였다. 500 ng/ml 농도의 재조합 PLY는 1.0% 적혈구 현탁액을 100% 용혈시켰으며, 240 ng/ml 농도는 50% 용혈을 나타내었다. 그러나 재조합 PLY-EGFP는 용혈 활성이 전혀 나타나지 않았으나 형광현미경으로 관찰하였을 때 적혈구 막에 결합되어 있었다. 즉, EGFP의 PLY C-말단 부착은 PLY의 세포막 결합능은 유지시켰으나 용혈기능은 방해하였다. PLY C-말단은 용혈기능에 아주 중요한 영역이며, 세포막 결합은 PLY의 다른 영역이 보다 중요하게 작용할 것으로 추측된다. 따라서, 육안으로 관찰이 가능한 결합능은 가졌으나 용혈 기능이 결여된 PLY-EGFP를 대조군으로 활용함으로써 두 재조합 단백질은 폐렴 유발에 있어서 PLY 작용 연구에 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Journal of Dairy Science and Biotechnology
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• 제38권2호
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• pp.89-98
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• 2020

본 연구의 목적은 한국 전통 음식 김치에서 분리한 유산균의 특성을 연구하기 위해 형태학적, 생화학적 특성을 조사하였다. 한국의 전통 발효 식품에서 젖산균을 확인하기 위해 분리된 균주의 그람염색을 수행한 후 Macrogen에서 16S rRNA 분석 결과, DKGF9(Lactobacillus plantarum), DKGF1(Lactobacillus paracasei ), DKGF8(Lactobacillus casei ), DK207(Lactobacillus casei ), DK211(Lactobacillus casei )이 확인되었다. 우리는 한국의 전통 발효 식품인 김치에서 분리된 5가지 LAB의 기본 생물학적 활성에 대한 실험을 수행했다. 37℃, 55℃, 65℃, 75℃에서 각각 5분, 15분 5균주의 내열성 확인 결과, 상업 균주인 Lactobacillus acidophilus LA-5의 내열성과 유사하거나 더 높음을 보여주었다. 장내부착능에서는 선발균주 모두 상용균주와 비교했을 때 10⁷ CFU/mL 이상으로 우수한 결합능을 보여주었고, KCTC(한국생명공학연구원 생물자원센터)에서 분양받은 Escherichia coli KCTC1682, Salmonella enterica KCTC2054, Bacillus cereus KCTC3624 3종을 활용한 항균활성 결과, 모든 균주는 상업용 균주인 L. acidophilus LA-5와 비교하여 유사하거나 더 높은 항균 활성을 나타냈다. 단백질분해능력 실험에서, 5개의 균주는 clear-zone의 직경이 24시간에서 72시간으로 갈수록 점차 증가하고, L. paracasei DKGF1이 가장 큰 직경을 갖고 있어 단백질분해능력이 가장 우수한 것으로 나타났다. 5개의 균주로부터 선택된 3개의 균주는 ABTS, DPPH, FRAP, Hydroxyl radical scanenging 활성을 포함하여 다양한 항산화활성 효과를 나타냈다. 결과적으로, 5가지 균주 중에서 우수한 기능성을 갖는 L. paracasei DKGF1이 잠재적인 프로바이오틱스 활성을 나타내며, 건강 관련 제품의 개발에 유용한 균주라고 판단된다.

• 한국수산과학회지
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• 제35권6호
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• pp.671-675
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• 2002

우렁쉥이 껍질에서 추출한 autoclave 추출구와 neutrase 추출구는 지방흡수력의 경우 대조시료인 chitin과 chitsan에 비해 떨어지는 대략 250$\~$$300\%$ 정도이었으나, 포말성은 각각 0.70과 0.67로, 포말안정성은 0.50과 0.38로 우수하였다 Autoclave 추출구 및 neutrase 추출구의 유화능은 각각 $49.2\%$와 $47.1\%$, 유화안정성의 경우 각각 $48.3\%$와 $44.8\%$ 정도였으며 특히, 색소흡착능은 각각 $85.2\%$와 $85.6\%$로 대조시료에 비해 다소 우수하였다 항혈액응고능은 모든 시료에서 hPn 저 지효과는 나타났으나 PT값은 약 14.5초로 일정하여 혈액응고저지 효과가 거의 없었다. 특히 autoclave 처리구를 DEAE-cellulose ion exchange chromatography하여 얻은 F4 (획분4)는 APTT가 75초로 가장 효과적 이 었으며, Sephadex G-100의 $F_2$가 70초 정도였다. ACE저해능은 모든 시료에서 ACE 저해효과가 있었으며, 채택된 실험방법에 따라 동일시료 경우에 있어서도 저해효과 값이 차이가 났으며, 특히 DEAE-cellulose 이온교환 처리한 $ F_4$ (획분4)가 $35.7\%$로 가장 효과적이었다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제34권4호
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• pp.460-465
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• 2005

Rue잎을 물과 에탄올로 추출하여 항균활성과 생리활성 효과를 탐색하였다. 그 결과 각 추출물의 총페놀 함량은 물 추출물에서 16.39 mg/g 알콜 추출물에서 17.07 mg/g로 나타났다. Helicobacter pylori에 대한 disc 방법에서 $200\;{\mu}g/mL$의 폴리페놀 첨가 시 물과 알콜 추출물은 각각 12 mm, 13 mm의 직경을 나타내어 항균활성이 있음을 알 수 있었으며, 2-fold dilution 방법으로 항균활성 검증 결과 물 추출물보다 알콜 추출물에서 더 높은 항균활성을 나타내었다. 물과 알콜 각 추출물의 ABTS radical decolorlization과 antioxidant protection factor(PF)를 살펴 본 결과 ABTS는 물 추출물이 약 $96\%$로 높은 저해율을 나타내었으며 PF는 알콜 추출물에서 1.2로 물 추출물 0.8보다 높게 나타났다. DPPH에 대한 전자공여능은 물 추출물이 89.38로 알콜 추출물 $86.90\%$보다 높게 나타났으며 활성 산소중 지방산화를 일으키는데 주요한 역할을 하는 hydroxyl radical에 대한 각 추출물의 영향은 알콜 추출물이 binding능력이 탁월하여 물 추출물에 비해 낮은 TBARS 값을 나타내었다. Angiotensin converting enzyme과 xanthine oxidase 저 해 활성은 알콜 추출물이 물 추출물보다 더 높게 나타났고, HPLC에 의한 페놀 분석 결과 rosemarinic acid의 함량이 알콜 추출물에서 가장 많았으며 다음으로 qurcetin 함량이 높게 나타났다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제34권9호
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• pp.1308-1313
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• 2005

구기자를 에탄올과 물로 추출하여 항산화와 항고혈압효과를 탐색하였다. 구기자 추출물의 폴리 페놀함량은 물 추출물과 에탄을 추출물에서 9.5 mg/g과 8.7 mg/g으로 나타났으며, HPLC에 의한 Polyphenol 화합물을 분리한 결과 물 추출물과 $60\%$ 에탄올에서 1.7 mg/g과 1.3 mg/g으로 chlorogenic acid가 가장 많이 검출되었다. 항산화효과 실험 중 DPPH는 물 추출물에서 $92.6\%$, 에탄을 추출물에서 $88.8\%$으로 높은 전자공여능을 나타냈으며, ABTS 측정에서는 물 추출물이 에탄을 추출물의 $52.8\%$보다 높은 $76.7\%$로 나타났다. PF는 물 추출물과 에탄을 추출물에서 각각 1.1과 1.0으로 나타났으며, TBARS값은 에탄을 추출물이 $1.5{\times}10^{-3}\;{\mu}M$ 로 대조구 $1.5{\times}10^{-3}\;{\mu}M$보다 낮은 TBARS 값을 나타내어 산화촉진인자를 binding하는 능력이 물 추출물보다 높게 나타났다. ACE 저해 활성은 물 추출물에서 $75.1\%$가, 에탄올을 추출물에서 $71.8\%$의 저해활성을 나타냈다. 이상의 결과로 구기자추출물이 기능성 식품소재로 활용이 가능할 것으로 사료된다.

• Applied Biological Chemistry
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• 제49권4호
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• pp.298-303
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• 2006

상황버섯을 에탄올 농도별로 추출하여 항산화 효과와 생리활성을 측정해 보았다. 농도별로 추출한 상황버섯의 페놀 함량은 추출에탄올 농도가 짙어질수록 페놀함량이 높게 나타났으며 그 중 80%에탄올 추출물에서 28.36mg/100ml로 가장 높게 나타났다. 상황버섯 추출물의 수용성물질에 대한 항산화 효과는 DPPH radical소거활성이 전체적으로 80%가 넘는 높은 저해율을 나타났고, 80% 및 90%에탄올추출물에서는 각각 94.12, 94.14%로 가장 높은 저해율을 나타내었으며, ABTS radical cation decolorization에서는 80% 에탄올 추출물에서 96.02%로 가장 높은 저해율을 나타내었다. 지용성물질에 대한 항산화효과는 antioxidant protection factor(PF)는 80% 에탄올 추출물에서 1.69로 가장 높게 나타났으며, TBARS는 80%, 90%에탄올 추출물에서 $1.15{\times}100{\mu}M,\;1.21{\times}100{\mu}M$로 대조구인 $1.95{\times}100{\mu}M$보다 낮게 나와 산화촉진인자를 binding하는 능력이 좋은 것으로 나타났다. 고혈압에 관여하는 angiotensin converting enzyme과 gout에 관여하는 xanthine oxidase의 저해효과에서는 80% 에탄올 추출물에서 각각 95.10, 85.07%로 높은 저해율을 나타내었다. 농도별로 추출한 상황버섯을 HPLC로 분석한 결과 protocatecuic acid가 가장 많이 검출되었으며, 이외에도 cafferic acid, coumaric aicd 가 존재하는 것으로 나타났다.

• 동의생리병리학회지
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• 제19권5호
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• pp.1391-1398
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• 2005

The anti-thrombic properties of the oriental herbal medicine Daejowhan(DJW, 大造丸) which consists of 11 kinds of herbs (indicated as ratio) of Rehmanniae Radix 24%, Hominis Placenta 5%, Testudinis Carapax 9%, Eucommiae Cortex 9%, Asparagi Radix 9%, Phellodendri Cortex 9%, Achyranthis Radix 7%, Liriopis Tuber 7%, Angelicae Sinensis Radix 7%, Ginseng Radix 5% and Schizandrae Fructus 3% were investigated. The water extracts from DJW inhibited Platelet-activating factor(PAF) induced platelet aggregation. DJW was extracted with methanol and further fractionated by ethylacetate. A 70% methanol extract showed a strong inhibition against PAF-induced aggregation in vitro and in vivo assays. The ethylacetate soluble fraction was shown to have inhibitory effect on PAF-induced platelet aggregation in vitro assay. The ethylacetate soluble fraction specially protected against the lethality of PAF, while verapamil did not afford any protection. These results indicate that the water extracts and alcoholic-fractions inhibit the action of PAF in vivo by an antagonistic effect on PAF, so that it may be useful in treating disorders caused by PAF, such as acute allergy, inflammation, asthma, gastrointestinal ulceration, toxic shock and so forth. DJW was investigated regarding its assumed anti-thrombic action on human platelets which was deduced from its ability to suppress Arachidonic acid(AA)-induced aggregation, exocytosis of ATP, and inhibition of Cyclooxygenase(COX) and Thromboxane synthase(TXS) activity. The latter two effects were estimated from the generation of Prostaglandin $E_2(PGE_2)$ and Thromboxane $A_2(TXA_2)$ respectively. Exogenously applied AA ($100{\mu}mol/{\ell}$) provoked a $89\%$ aggregation of platelets, the release of 14 pmol ATP, and the formation of either 225 pg $TXA_2$ or 45 pg $PGE_2$, each parameter being related to 106 platelets. An application of DJW 5 min before AA dose-dependently diminished aggregation, ATP-release and the synthesis of $TXA_2$ and $PGE_2$ with $IC_{50}$ values of 74, 108, 65, $72{\mu}g/m{\ell}$, respectively. The similarity of the $IC_{50}$ values suggest an inhibition of COX by DJW as primary target, thus suppressing the generation of $TXA_2$ which induces aggregation of platelets and exocytosis of ATP by its binding on $TXA_2$-receptors.

• 대한지역사회영양학회지
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• 제6권5호
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• pp.726-733
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• 2001

This study was designed to investigate the effect of iron supplementation on the iron nutritional status and anemia of high school girls in Korea. One hundred thirty-five female students residing in Ulian metropolitan city in Korea diagnosed as having anemia or iron deficiency participated in this study. One or two tablets of iron medicine(80-160 mg Fe as ferrous sulfate/day) were administered to all participants for 3 months. Subjects were evaluated with a questionaire, measurement of hematological indices before and after iron supplementation. The average height and weight of respondents were 161.62 $\pm$ 4.68 cm and 53.87 $\pm$ 6.10 kg, respectively. Daily intakes of energy were 1597.8 $\pm$ 302.35 kcal(76.0% RDA). Iron intakes were 13.72 $\pm$ 4.17 mg (76.3% of RDA) and calcium intakes were 580.74 $\pm$ 177.21(72.5% of RDA) before iron supp]ementation. At baseline, 63% of all participants had depleted store(serum ferritin 12 ug/ml and/or transferrin saturation(TS) < 14%). After iron supplementation, this proportion declined to 19.3%. 55.6% of subjects had 12 ug/m1 of basal ferritin concentration before iron supplementation, and this proportion declined to 16.3% after iron supplementation. The basal hemoglobin(Hb) concentrations were 12.13 $\pm$ 1.01 g/dl and they increased to 12.79 $\pm$ 0.81 g/dl, which showed significant difference artier iron supplementation(p < 0.001). The basal ferritin and TS(%) were 13.24 $\pm$ 11.66 ng/ml, 18.42 $\pm$ 10.12% and they significantly increased to 32.95 $\pm$ 21.14 ng/ml, 33.53 $\pm$ 16.64%, respectively(p < 0.001). The basal total iron binding protein(TIBC) were 467.81 $\pm$ 97.24 ug/dl and they significantly decreased to 325.05 $\pm$ 48.89 ug/dl(p < 0.001) after iron supplementation. The number of tablets administered was positively correlated with serum iron(t = 0.553, p < 0.01), serum ferritin(t = 0.557, p < 0.01), TS(%)(t = 0.588, p < 0.01) and negatively correlated with TIBC(t= -0.409, p <0.01). The anemia symptoms such as ‘Shortening of breath when going upstairs(p < 0.01)’, ‘Tired out easily(p < 0.01)’, ‘Feeling blue(p < 0.001)’, ‘Decreased ability to concentrate(p < 0.01)’, and ‘Poor memory(p < 0.001)’improved significantly after iron supplementation. In this study, daily iron supplementations were efficacious in improving the iron status and anemic symptoms of female high school students. Regular check-ups and nutrition education for adolescents are necessary because of their vulnerability to iron deficiency. Further studies are needed to determine the minimum effective dose of iron and to examine the adverse effect of long-term iron supplementation.

• 한국식품저장유통학회지
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• 제24권7호
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• pp.885-890
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• 2017

살모넬라는 주요한 식중독균의 하나로 미생물학적 식품품질을 보증하기 위해 신속 정확하게 현장에서 관리되고 모니터링되어야 한다. 본 연구팀에서는 광학 현미경 기반의 이미징 시스템과 바이오센서가 결합된 모니터링 시스템을 개발하였고, 이를 살모넬라에 적용하기 위해서는 바이오센서에 적용되는 생물학적 수용체의 개발이 절대적으로 필요한 실정이다. 따라서 본 연구에서는 살모넬라에 반응하는 특이적인 anti-Salmonella 다중클론 항체를 토끼로부터 성공적으로 생산 정제하였으며, 최종 항체의 농도는 2 mg/mL로 결정되었다. 또한, 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체의 역가가 상업용 anti-Salmonella 다중클론 항체보다 전 항체 농도 범위에서 우수함을 알 수 있었다. 정제된 항체 특이성 검토를 위해, 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체를 20 종의 살모넬라 serotypes과 20 종의 non-Salmonella strains과 반응시킨 결과, 20 종의 non-Salmonella strains과는 특이성을 보여주지 않은 반면 19 종의 살모넬라 serotypes와 유의적으로 높은 반응성으로 보여 주었다. 최종적으로, anti-Salmonella 다중클론 항체가 고정화된 골드센서를 살모넬라 현탁액에 노출시켰을 때, 수 백여 개의 살모넬라가 센서 표면에 capture되어 있음을 확인할 수 있었다. 따라서, 본 연구를 통해 생산 정제된 anti-Salmonella 다중클론 항체는 새로운 생물학적 수용체로서 충분한 역가와 특이성 그리고 센서에 적용 시 살모넬라와의 높은 결합력을 보여주었으므로 광학현미경 기반 이미징 시스템을 활용한 바이오센서 모니터링 시스템에 새로운 생물학적 수용체로 적용될 수 있으리라 판단된다.

• BMB Reports
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• 제33권6호
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• pp.454-462
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• 2000

Interleukin-4(IL-4) is known to be a major cytokine regulating immunoglobulin E(IgE) response by the induction of IgE production and type II IgE receptor(IgER II: CD23) expression. Recently, however, the role of neuroendocrine factors has been implicated in modulating the IgE response. Among various neuroendocrine growth factors, we investigated the effects of the insulin-like growth factor-1(IGF-1) since IL-4 and IGF-1 share common intracellular signaling molecules, such as the insulin receptor substrate-1/2(IRS-1/2) to induce a specific cellular response. In the human peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures, IGF-1 was capable of inducing a substantial level of IgE production in a dose-dependent manner. It also noticeably upregulated the IL-4-induced or IL-4 plus anti-CD40-induced IgE production. Similarly, the IGF-1-induced IgE production was enhanced by IL-4 or anti-CD40 in an additive manner, which became saturated at high concentrations of IGF-1. Although IGF-1 alone did not induce IgER II (CD23) expression, it augmented the IL-4-induced surface CD23 expression in a manner similar to the action of anti-CD40. These results imply that IGF-1 is likely to utilize common signaling pathways with IL-4 and anti-CD40 to induce IgE and IgER II expression. In support of this notion, we observed that IGF-1 enhanced the IL-4-induced signal transducers and activators of transcription 6(STAT6) activation and independently induced $NF-{\kappa}B$ activation. Both of these bind to the IgE(C) or IgER II (CD23) promoters. Together, our data suggest that IL-4 and IGF-1 work cooperatively to activate STAT6 and $NF-{\kappa}B$. This leads to the subsequent binding of these transcription factors to the $C{\varepsilon}$ and CD23 promoters to enhance the expression of IgE and IgER II. The observed differential ability of IGF-1 on the induction of IgE vs. IgER II is discussed based on the different structure of the two promoters.