T-butyl alcohol (TBA) freeze-drying method originally designed by Inoue and Osadake (1989) was adopted to dry specimens for scanning electron microscopy and the results were compared with those dried using critical point dryer (CPD). Small pieces $(1\times1\times3mm)$ of liver of Sprague-Dawley rats were cut and fixed in 2% glutaraldehyde in 0.1 M sodium cacodylate buffer after anesthesia, and processed for scanning electron microscopy by several modifications of TBA freeze-drying methods and by the standard preparation method using CPD. The bile canaliculi and sinusoidal endothelial surface were observed. Tissue dehydrated with TBA before TBA freeze-drying preserved the structures best comparable to those prepared with CPD. This result suggests that combination of dehydration with TBA and TBA freeze-drying is a superior method to the original TBA freeze-drying method dehydrated with ethanol.
To investigate the effect of alcohol on the ultrastructural changes of liver the experiment was undertaken by dividing in 3 groups (control, alcohol and alcohol-camitine groups). Chronic administration of ethanol to adult rats led to striking fat accumulation and ultrastructural changes in the liver. Mitochondrial abnormalities. dilation of endoplasmic reticulum, focal cytoplasmic degradation, dilation of bile canalicli and swelling of nucleus were observed. In alcohol-carnitine group, there were less fat accumulation and ultrastructural changes than alcohol group. These alterations suggest that ethanol is very toxic to the liver and carnitine prevents fat accumulation induced by alcohol. 알콜이 흰쥐 간장의 미세구조에 미치는 영향을 관찰하기위해 대조군, 알콜 처리군, 알콜-carnitine처리군으로 나누어 실험하였다. 만성적인 알콜 투여는 간에서의 지방축적을 유발하였으며 미토콘드리아의 이상, 소포체의 팽대, 세포질의 손상 Bile canaliculi의 확장 및 핵의 수축 등의 미세구조적 변화를 가져왔다. 알롤- carnitine으로 처리한 군에서는 지방의 축적과 미세구조의 변화가 알콜 처리군에서 보다는 약하였다. 이러한 구조적 변화는 알콜이 간에 매우유독하며 carnitine은 알콜에 의해 유발된 지방의 축적을 방지해 보여주는 것으로 사료된다.
In order to examine the effect of extrahepatic cholestasis induced by common bile duct ligation on the hepatic function, the pharmacokinetics of antipyrine and d-propranolol were investigated in rats. In addition, in an attempt to observe the degree of direct hepatic injury, light and electron microscopic observations and conventional pathologic test using serum were performed. Five days after common bile duct ligation, antipyrine(15 mg/kg) and d-propranolol(3 mg/kg) were intravenously administrated to the rats, respectively. The total clearances of antipyrine and d-propranolol were significantly(p<0.05) decreased. Because hepatic clearance of antipyrine poorly extracted by the liver and that of d-propranolol highly extracted by the liver are respectively dependent on the hepatic intrinsic clearance and the hepatic blood flow, it may be concluded that extrahepatic cholestasis following five days after common bile duct ligation decreased the hepatic intrinsic clearance and the hepatic blood flow. SGPT, SGOT, cholesterol, bilirubin(total bilirubin, direct bilirubin) and alkaline phosphatase were significantly increased(p<0.05). The proliferation of bile ducts was prominent, and degeneration and necrosis of hepatocytes were observed by light microscope. Also, ultrastructurally, bile canaliculi were containing the amorphous materials and losing microvilli, and SER and RER in hepatocytes were dilated and vacuolated.
In this study, we have made morphological and cytochemical observations to investigate the type of Golgi apparatus around the bile canaliculus. The animal (Wister, $220{\sim}250gm$) were divided into 4 groups; normal, hydrochol, colchicine and hydrochol-colchicine. The Golgi apparatus is classified into 16 different types from 4 different groups. In the normal group, we could observe 12 different types of the sixteen. Type I which showed convexed cisterns facing the bile canaliculi was most abundant of the types. In the hydrochol group, 14 types were observed. Type VII and type I showed convexed cisterns facing the bile canaliculus and were abundant. In the colchicine group, 11 different types were viewed and type XIV which showed intensely dilated cisterns without the polarity was predominant. In the hydrochol-colchicine group, we observed 3 different types. Type XIV clearly showed the highest percentage, although that type was less numerous in this group than in the colchicine group. In the hydrochol group, the Golgi apparatus showed a tendency to increase in numbers, while in the hydrochol-colchicine group the Golgi apparatus showed a tendency to decrease in numbers. The reactive products of thiamine pyrophosphatase and acid phosphatase were apparent over the distal Golgi cistern in the normal and hydrochol groups, but were decreased or not observed in the colchicine and hydrochol-colchicine groups. From the results, it is assumed that with the presence of the microtubule, Golgi cisterns are dilated with polarity after stimulation of secretion. Without the microtubule, the cistern becomes more intensely dilated and none polaric. Also the enzymes within the cisternal membrane become decreaed or absent and the Golgi apparatus decreases in numbers after activation of secretion.
The study was designated to investigate the electron microscopic findings following diethylnitrosamine (DEN) treatment in rats. Forty four male (Srague Dawley) rats were continuously given water containing 0.01% DEN for 13 weeks and livers of five rats with more tumor lesions at 16 and 17 weeks after initial treatment were used as EM materials. In transmission electron microscopic findings, most small-sized hepatocytes were active cells containing large mount of organelles, but light (pale staining) hepatocytes among small-sized hepatocytes were injured cells containg disorganized organelles. Tumor cells among small-sized hepatocytes were irregularly arranged and have pleomorphic nuclei containing electron dense chromatin but the organelles in cytoplasm were swelled. Large-sized hepatocytes were active cells with condensed chromatin but the cytoplasm of these cells were pale due to be injured and dilated organelles. Dark hepatocytes were apoptotic cells with homogenous pyknotic nuclei and cytoplasm, and the cytoplasm of these cells contained dilated smooth endoplasmic reticulum (sER) but these sER were non-vesiculated. Cholangiocarninoma cells were crowded and were pale by far less number of organelles in cytoplasm and nuclei. In scanning electron microscopic findings, the lumens of portal veins, bile canaliculi, bile ductules, bile ducts and sinusoids were dilated and have irregular folded inner surface by protruded parenchyma.
본 연구에서는 반수서동물인 Suncus Murinus간실질의 구조와 간소엽에 존재하는 간실질세포, 동모양내피 세포, Kupffer세포 및 Ito세포의 미세구조를 관찰하고 이들의 특징을 포유동물 및 비포유동물의 것들과 비교 고찰하였다. 간실질세포는 지방소적과 비교적 큰 사립체를 많이 함유하고 있었으며 세포간격은 좁았으나 세포 표면은 가늘고 긴 돌기를 많이 갖고 있어 그 미세구조가 비포유동물의 일부 동물종에 유사한 소견을 나타냈다. 내피세포 또한 일부 비포유동물에 있어서와 같이 용해소체를 많이 함유하고 있어 Kupffer세포와의 식별이 어려웠다. 간소엽에는 담세관이 많았으며 일부 담세관과 담관은 Disse강에서 관찰되었는데 이러한 담관계는 Disse강에 있는 소세포와 간실질세포에 의해서 형성되어있거나 소세포들이 내강을 둘러 싸면서 형성하고 있었다. 담관계형성에 관여하는 소세포들은 지방소적을 함유하거나 함유하지 않은 Ito세포일 것으로 추정되었다. 이상의 소견으로 미루어 Suncus Murinus간장은 포유동물과 비포유동물의 구조와 미세구조를 동시에 갖추고 있는 것같이 보인다.
This study was carried out to investigate the fine structural changes of rat hepatocytes by repeated treatment of cyclosporin A that has been widely used for immunosuppressive drug in organ transplantation. Sprague-Dawley rats were kept in experimental circumstances for 2 weeks and 50mg/kg B.W of cyclosporin A was injected once a day subcutaneously for 7 days and sacrificed at 1 hour, 1 day, 3 days, 7 days, 14 days, 28 days after the last injection. Fine structural changes were observed by transmission electron microscope (JEM 1200EX II) and the results obtained were as follows. 1. Accumulation of lipid droplets in hepatocytes was prominently increased in 1 hour and 1 day lapse groups, and this finding was slightly reduced in 3 days lapse group and remarkably reduced from 7 days lapse group enough to be recovered completely in 14 days lapse group. 2. Dilatation of rough endoplasmic reticule cisternae, detachment of membrane bound ribosomes, proliferation of smooth endoplasmic reticula were observed in 1 hour and 1 day lapse groups, and these findings were mild in 3 days lapse group and abruptly reduced from 7 days lapse group enough to be recovered completely in 28 days lapse group. 3. Small myelin figures were observed in 3 days lapse group after CsA-treatment. 4. Swelling of mitochondria and destruction of their cristae were observed in 1 hour and 1 day lapse groups, and these findings were recovered from 3 days lapse group. 5. Dilatation of bile canaliculi and remarkable loss of microvilli in the pericanalicular wall were observed in 1 hour lapse group and the most severe change was shown in 1 day lapse group and lasted to 3 days lapse group, and these findings were reduced gradually from 7 days lapse group enough to recovered completely in 28 days lapse group.
This study was designed in order to investigate the effect of copper sulfate to the ultrastructural changes of the hepatocytes in Sprague Dawley rats. The animals were administered with copper sulfate (10mg/kg B.W.), which was dissolved in normal saline. The solution was injected into abdominal cavity every day. The animals were sacrificed at the 6th, 12th, and 24th day from the beginning of administration. The specimens obtained from the liver were observed with electron microscope and significant changes were as follows. 1. A prominent dilatation and disruption of the cisternae of rough endoplasmic reticulum were recognized. Also, the detachment of membrane bound ribosomes was shown. 2. The proliferation of smooth endoplasmic reticulum and the depletion of glycogen particles were noted. 3. The increase of primary lysosomes and autophagic vacuoles was obserbed. 4. The dilatation of mitochondrial cristae was obserbed. And it was irregulary scattered in the stroma of mitochondria. 5. The atrophy of microvilli in the bile canaliculi and space of Disse was prominent. 6. Membrane of hepatocytes was damaged and significant hydrophic degeneration was obserbed in the perisinusoidal regions. 7. The damage of Fat-storing cells was more significant than that of hepatocytes.
Microcystin-LR(MC-LR), a cyanobacterial toxin produced by Microcystis aeruginosa, causes severe hepatotoxicity. Here we investigated the morphologic changes of rat hepatocyte spheroid induced by exposure of MC-LR($10^{-6}M$) in vitro. In addition, to determine the effects of such toxin in the process of hepatocyte spheroid formation, primarily isolated hepatocytes were incubated with MC-LR and the process of spheroid formation was observed. In both hepatocyte spheroid and suspension culture systems, the morphologic changes caused by MC-LR were noticible at 5 min post exposure and were characterized by the loss of microvilli, cytoplasmic vacuolation, the accumulation of lipid droplets, and blob formation. Especially, the size and numbers of blob on the cell surface were increased as the incubation time prolonged and the appearance of electron dense bodies were observed in the cytoplasm of hepatocyte at 20 min post exposure. Furthermore, bile canaliculi-like structures in the hepatocyte spheroids were slightly widened and the process of spheroids formation was inhibited in the isolated hepatocytes incubated with MC-LR. These results indicate that morphologic changes in. the hepatocyte membrane and organelles seem to be typical events in showing the MC-LR induced hepatotoxic effects and the spheroid culture method might be a useful experimental tool to evaluate hepatoxicity since it reflects the in vivo status of hepatocytes.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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