A bacteriocin-producing strain identified as Pediococcus acidilactici was isolated from kimchi. The bacteriocin was identified to belong to the pediocin family and exhibited bactericidal activity against most Gram-positive bacteria as well as some Gram-negative bacteria. The bacteriocin was stable up to $80^{\circ}C with wide pH ranges (5.0-10.0). The bactericidal activity remained unchanged after treatment with nonproteolytic enzymes such as nuclease and ${\alpha}$-amylase, however, it was destroyed after treatment with protease. The bacteriocin was effectively extracted by the pH-mediated adsorption-desorption method and purified effectively by semi-preparative RP-HPLC. The molecular weight of the bacteriocin was 4,622, as determined by electrospray mass spectrometry. The amino acid sequence consisted of 44 amino acid residues with four cysteines. The high solubility and pH stability of the isolated pediocin provide definite advantages over nisin and other bacteriocins in regards to its potential applications.
Four strains of lactic acid bacteria (LAB), that lower the pH of sausage $\leq$ 4.2 within 24 h of incubation at $37^{\circ}C$, were screened from 57 bacteriocin producing LAB which were isolated from kajamie shikhae and natural fermented sausages. The proteinaceous nature of the bacteriocin was confirmed by losing antimicrobial activity after pronase treatment. Inhibitory activity against pathogens, times of bacteriocin production and sensory tests were compared between 4 isolates and 3 commercial starters. Especially, strain NFS #8-1, screened from natural fermented sausage and identified as Pediococcus acidilactici, antagonized a large number of foodborne pathogens including Listeria monocytogenes, Aeromonas hydrophila, Bacillus cereus, Clostridium perfringens, Salmonella typhimurium and Staphylococcus aureus. Production of bacteriocin by strain NFS #8-1 was early in the growth phase (mid log phase) and its sensory acceptance was high. The feasibility of using strain NFS #8-1 as a starter for the production of microbiologically safe fermented sausage is envisaged.
Pediococcus acidilactici strain M produced a bacteriocin which was proteinaceous, heat stable, and exhibited antimicrobial activity against lactic acid bacteria, variety of food spoilage and pathogenic bacteria. The antimicrobial activity was not caused by $H_2$$O_2$ and organic acid, and was remained between pHs of 4.0 to 9. Molecular weight of crude bacteriocin was approximately 2, 500. Phenotypic assignment after plasmid cruing experiment demonstrated that a 53.7 kilobase (kb) plasmid, designated as pSUC53, was responsible for the sucrose fermentation phenotype ($Suc^+$) and a 11.1 kb plasmid, designated as pBAC11, was associated with bacteriocin production phenotype ($Bac^+$). Neither of the two plasmids were linked to antibiotic resistance.
Lactobacillus acidophilus 223, 606, and NCFM-F among 21 isolated from fecal contents of humans demonstrated inhibitory activity attributed to bacteriocin(s). The bacteriocin(s) were heat stable and nondialyzable proteinous compounds and exhibited narrow inhibitory spectra of activity. Neither hydrogen peroxide nor pH were responsible for inhibitory action. All of the producer strains were resistant to their own bacteriocin(s). The bacteriocin(s) were purified by ammonium sulfate precipitation, gel chromatography and ion exchange chromatography for further characterization. The bacteriocin(s) of human origin exhibited similar characteristics.
The purpose of this study was to isolate bacteriocin-producing bacteria with antagonistic activities against pathogens from the intestines of pigs for probiotic use. Lactobacillus sp. AP 116 possessing antimicrobial property was selected from a total of 500 isolates. The AP 116 strain showed a relatively broad spectrum of inhibitory activity against Listeria monocytogenes, Clostridium perfringens, Pediococcus dextrinicus, and Enterococcus strains using the spot-on-lawn method. Bacteriocin activity remained unchanged after 15 min of heat treatment at $121^{\circ}C$ and exposure to organic solvents; however, it diminished after treatment with proteolytic enzymes. Maximum production of bacteriocin occurred at $34^{\circ}C$ when a pH of 6.0 was maintained throughout the culture during fermentation. According to a tricine SDS-PAGE analysis, the molecular weight of the bacteriocin was approximately 5 kDa. The isolate tolerated bile salts and low pH, and also induced nitric oxide (NO) in mouse peritoneal macrophages. Bacteriocin and bacteriocin-producing bacteria, such as Lactobacillus sp. AP 116, could be potential candidates for use as probiotics as an alternative to antibiotics in the pig industry.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.30
no.3
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pp.410-414
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2001
A new bacteriocin produced by Bacillus licheniformis cy2 was partially purified and characterized. The bacteriocin named as BSCY2 was stable in the pH range of 2.5~9.5. BSCY2 was stable below 4$0^{\circ}C$ and it retained its antimicrobial activity during long tern storage at -2$0^{\circ}C$ and -7$0^{\circ}C$. BSCY2 was inactivated 15 min exposure to temperatures over 8$0^{\circ}C$ and lost 50% of its antimicrobial activity within 2 hr at 7$0^{\circ}C$. BSCY2 was inactivated by proteinase K treatment, which indicates its proteinous nature. Direct detection of the BSCY2 band showing antimicobial activity on Tricine-SDS-PAGE suggested an apparent molecular mass of about 6,500 dalton. These characterizatics of BSCY2 are considered as potential compounds for use in bioindustry.
Bacteriocin J105 is a proteinaceous inhibitory substance produced by Latococcus latis subsp. lactis j105 isolated from Kimchi. Bacteriocin J105 was purified to homogeneity by the pH-dependent adsorption-desorption method and reverse-phase HPLC from the culture broth of Lactococcus lactis subsp. lactis J105. Purification of bacteriocin J105 resulted in a 1.47-fold increase in the specific activity and the recovery was 1.5%. Its molecular mass measured by the electrophoretic pattern in the sodium, dodecyl sulfate polyacrylamide gel was about 3.4 kDa. It was stable at $121^{\circ}C$ for 15 min at pH between 2 and 4. However, at pH above 5, bacteriocin was rapidly inactivated. Twenty-one residues from the N-terminal portion of bacteriocin J105 were sequenced using sequence analysis of lantibiotics. Bacteriocin J105 showed significant homology with known nisin A from lactic acid bacteria.
A bactriocin produced by Lactrococcus sp. HY449 was purified by sequential purfication steps such as n-propanol-acetone precipitation ion -exchange chromatography using CM-Sequential CL6B. gel filtration chromatography using Sephacry HR100 and reverse-phase chromatography using pro RPC HR 5/10. Reverse-phase chromatography the final step of the purfication yielded a single symmetrical peak of bacteriocin activity The purification resulted in final yield of 3.25% and 413.35 fold increase of the specific activity of bacteriocin. The active fraction from reverse-phase chromatography was used for N-terminal amino acid analysis . The purified bacteriocin contained isoleucine, leucine, methionine, and glycine at but N-terminal end no aromatic amino acids. Calculation of the number of amino acid residues in the bacteriocin revealed that it is consisted of 32 residues assuming the molecular weight of bacteriocin to be about 3.6kDa. Edman degrandation elucidated amino acid residues of the first four of the N-terminus to be $NH_2$-Ile-Leu-Pro-GIn.
A bacteriocin-producing organism, Enterococcus sp. T7, was isolated from human fecal samples. Bacteriocin T7, named tentatively as the bacteriocin, was produced by Enterococcus sp. T7 and it inhibited some strains of Lactobacillus. Staphylococcus, Enterococcus, and Streptococcus, but not all the lactococci and gram-negative bacteria tested. Bacteriocin T7 inhibited the growth of Listeria monocytogenes Scott A, but the degree of inhibition was less than those for other sensitive gram-positive vacteria. Bacteriocin T7 in MRS broth started to produce at the middle of the exponential growth phase and the inhibitory activity reached its maximum level during the stationary growth phase. Bacteriocin T7 was stable against heat treatments, pH variations (pH 2-10), and exposure to organic solvents. The molecular weight of bacteriocin T7 was estimated to be 6.500 Da by SDS-PAGe. All these facts, including physico-chemical stabilities, small molecular size, and inhibition of Kisteria monocytogenes, indicate that bacteriocin T7 is likely to be a member of the class IIa bacteriocins.
Lactobacillus brevis DK25 isolated from Dongchimi was identified by physiological and biochemical tests and 16S rDNA sequence analysis. Bacteriocin of L. brevis DK25 exhibits inhibitory activity against Enterococcus faecalis and Listeria monocytogenes when using agar well diffusion method. Maximal production of bacteriocin was reached in the beginning of the stationary phase, and inhibitory activity declined after the late stationary phase. This result suggested that bacteriocin was produced in a growth-associated manner. Complete inactivation of bacteriocin activity was observed after treatment with protease, but the activity was stable between pH 4-9 and heat resistant (30 min at $100^{\circ}C$). Bacteriocin showed a concentration-dependent antimicrobial activity against L. monocytogenes KCTC 3569. Moreover, the application experiment showed that combination of bacteriocin (320 AU/ml) with potassium benzoate (0.05%) could significantly reduce the counts of L. monocytogenes KCTC 3569 in mayonnaise during storage at 4 or $25^{\circ}C$ for 10 days. Thus, bacteriocin from L. brevis DK25 may be used for hurdle technology by combination with potassium benzoate in order to increase pathogenic bacteria inactivation in food processing and food safety control.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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