• 한국미생물·생명공학회지
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• 제32권2호
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• pp.110-116
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• 2004

B. thuringiensis subsp. kurstaki HD1 살충성 결정체 단백질 icp 유전자를 클로닝하여 두개의 클론 pHLNl-80(＋) 및 pHLN2-80(－)을 제조하였으며, pHLNl-80(＋) 클론에는 icp 유전자의 전사개시부위가 정방향으로 클론이 되었고, 유전자 프로모터의 일부인 -80 bp를 가지고 있고, pHLN2-80(－) 클론은 핀자의 전사개시부위가 역방향으로 클로닝이 되었다. 상기 두 클론을 대장균에서 발현을 조사한 결과 icp 유전자가 역으로 삽입된 pHLN2-80(－) 클론은 pHLNl-80(＋)클론보다 ICP발현량이 현격히 증가하는 것을 확인하였다. pHLN2-80(－) 플라스미드에서의 -80 bp 프로모터에서 SD서열(-14 bp sequences) 상류부위를 제거한 후 동일한 살충성 결정체 단백질 icp 유전자의 과다발현 현상이 일어나는지 조사하기 위해 icp 유전자가 역방향으로 클로닝된 pHLRBSl-14와 icp 유전자가 정방향으로 클로닝된 pHLRBS2-14 클론을 제조하였다. 또한 상이한 클로닝 운반체에서도 과다 발현이 일어나는지를 보기위하여 pHLNl-80(＋)과 pHLN2-80(－) 플라스미드에서와 동일한 구조가 되도록 icp 유전자를 pUC18과 pUC19플라스미드에 각각 클로닝하여 pHLNUCl-80과 pHLNUC2-80 클론을 제조하였다. pHLRBSl-14과 pHLRBS2-14클론을 대장균에서 발현을 시킨 후에 파쇄하여 SDS-PAGE와 Western blot으로 분석을 한 결과는 클론 pHLRBSl-14는 클론 pHLRBS2-14보다 많은 양의 ICP를 생산하였고, pHLRBSl-14는 pHLN2-80(－) 클론 보다는 적게 ICP를 생산하였다. 이러한 발현 현상은 -80 bp promoter 에서 결실된 SD서열의 상류부위가 발현에 직접적인 영향을 주고 있다는 것을 의미한다. pHLNUC1-80이 역방향으로 클로닝된 pHLNUC2-80 클론보다 적게 ICP 의 발현을 하였다. 이 결과는 상기 클론이 icp 유전자 과다발현이 특정 클로닝 운반체에만 국한되어 일어나는 것이 아니며 유전자와 프로모터 간의 구조적 배열에 의하거나 프로모터에 있는 transcription-supressing regions이 교란되어서 일어난 것임을 시사한다. 그러나 왜 전사개기부위가 역삽입의 경우에 과다발현이 되는지 아직은 판단하기 어려우며 앞으로 더욱 연구를 계속하여야 할 과제로 남아있다.

• 농약과학회지
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• 제17권1호
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• pp.27-32
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• 2013

차주머니나방에 의한 포도 잎 피해증상을 2012년 8월 31일 경북 영천시 금호읍에서 국내 최초로 확인하였다. 실내에서 5종 약제[Bacillus thuringiensis var. kurstaki (serotype IIIa, IIIb) WP, chlorantraniliprole 5% GP, methoxyfenozide 21% SC, spinetoram 5% GP, spinosad 10% GP]를 추천농도로 포도 잎 분무처리에 의한 차주머니나방 4령충의 살충율은 spinosad 10% WG와 spinetoram 5% WG에서 각각 65% 및 70%로 높았다. 추천농도 이하에서는 치사율이 감소하였고, 엽 피해면적율은 추천농도의 1/4배 처리에서도 무처리에 비하여 낮았다. 4령 유충에 대해 직접살포법으로 야외에서 효과조사를 한 결과는 spinetoram 5% WG와 spinosad 10% WG 처리의 보정사충율이 각각 63.7, 55.7%였다. 따라서 포도 차주머니나방 방제를 위해 spinetoram과 spinosad의 활용가능성을 나타내었으나, 보다 효과적인 약제선발이 요구되는 바이다.

• 농업과학연구
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• 제38권1호
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• pp.39-44
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• 2011

The changes in major moth populations were monitored by sex pheromone traps in pear orchards at Yuseong-Gu, Daejeon from 2008 to 2010. Among four major moths, Grapholita molesta and Caposina sasakii occurred most frequently. Their occurrences peaked 2 to 3 times during the growing season from May to September. G. molesta was exceptional, occurring until September. For the environmentally-friendly control of these moths, 9 control materials including insect pathogenic bacteria and environmentally-friendly agricultural materials, were examined on the larva of 4 kinds of moth and sprayed on pear leaves in the field. As the generalized results of bioassay, Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and Sophora flavescens extract were shown to have better control effects than any other control material.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제11권6호
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• pp.1093-1098
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• 2001

The gene coding for a Lepidoptera-specific insecticidal crystalline (or control) protein (ICP), recognized as cryIAc, from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-73, was cloned into the vector pBluscript ll SK-, and then transformed in Escherichia coli $DH5{\alpha}$. The clone was named EBtIAc and the chimeric phagemid, as pEBtIAc. Hyperexpression of CryIAc protoxin was observed in the extract of the culture of E. coli harboring pEBtIAc. Crystalline protoxin was purified by differential solubility. It was dissolved in alkaline pH, and exposed to trypsin to be activated. The molecular weights of the pro- and activated toxins on SDS-PAGE were estimated to be ca. 130 kDa and 60 kDa, respectively. The toxicity was tested by force-feeding larvae of gypsi moth (Lymantria diapar) with trypsinized protoxin. Using the batch of biologically active form of the toxin as an immunogen, anti-CryIAc antiserum was raised in a New Zealand white rabbit. Immunoglobulin G was fractionated from the seam by Protein-A sepharose affinity chromatography. Immunoreactivity of the antibody was examined by dot and Westerns blottings. It has been found that the anti- CryIAc antibody recognized the purified toxin at a level below a nanogram in terms of quantity. Using the antibody some of Bt-corns were able to be differentiated from tons of corn kernels which were imported from America as forage crops.