• 한국잠사곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.36-42
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• 1993

Bacillus thruingiensis subsp. kurstaki HD-1의 내독소단백질 유전자인 CryIA(a)의 N-말단 부분과 B.tk HD-73의 내독소단백질 유전자인 CryIA(c)의 C-말단 부분의 융합에 따른 독성발현 여부에 관하여 조사하였다. 융합생산물인 pSK3, pSK4 및 pSK5의 플라스미드는 각각 4.5kb, 4.8kb 그리고 5.5kb로 구성되어 있다. 형질전환체의 내독소단백질에 대한 Western blotting은 SK4 및 SK5가 77-kDa 그리고 105-kDa에서 B.t k HD-1 항체에 대하여 반응을 나타내었다. 독성검정의 공시충인 배추좀나방 및 담배나방을 사용한 결과 pSK5를 포함하는 형질전환체만이 각각 96% 및 97%의 높은 치사율을 나타냈다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제19권1호
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• pp.25-30
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• 1991

국내농작물의 근부토양으로 분리한 Pseudomonas의 염색체 DNA에 Tn5를 사용하여 Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD73의 독소유전자(cp)를 도입하였다. Tn5의 중심부위에 있는 BamHI위치 (Tn5-cp)와 BglII 위치 (IS5OL-cp)에 각각 독소유 전자를 도입하였으며 두 종류의 Pseudomonas 균주에는 Tn5-cp로써 그리고 다른 세 종류의 Pseudomonase 균주에는 IS5OL-cp로써 transposition하였다. 면역학적 방법과 흰불나방 애벌레에 대한 살충성 검정으로서 독소유전자의 도입과 발현을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제23권3호
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• pp.203-208
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• 1985

Bacillu! thuringiensis var. krustaki 3ab k-3의 감온성치사돌연변이체에 대한 생물학적 성상의 변이성의 차이를 조사하고 유전적 특성을 규명하기 위하여 생화학적 성상검사, 항생제에 대한 감수성 조사, 용혈성 검사, 돌연변이체균주의 특수배지에서의 성장비교, Mouse에 대한 치사효과를 $28^{\circ}C$의 허용온도에서 조사하였다. Urease를 생산하지 못하는 돌연변이체는 ts-U154, ts-U601, ts-U602, ts-U603, ts-U604, t-U788 이었다. ts-U603만이 운동성이 상실되었고, ts-U154는 Salicin과 cellobiose을 분해하지 못했고, ribose를 분해하지 않는 균주는 ts-U603였다. 항생제에 대한 반응은 ampicillin, cephalothin, penicillin에는 모두 저항성을 나타냈으나, ts-U154 균주만이 감수성을 나타냈다. Fructus gardenia배지에서 색소를 생산하지 않은 것은 ts-U21, ts-U74, ts-U131과 ts-U154였다 가장 적은 용혈성을 나타내는 균주는 정상형고 ts-U602였고 가장 많은 용혈성을 나타내는 것은 ts-U603 (1:512 x) 이었다. Mouse 에 대한 치사효과는 전혀 없었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제23권2호
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• pp.167-176
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• 2013

A novel bioactive molecule produced by Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki Bn1 (Bt-Bn1), isolated from a common pest of hazelnut, Balaninus nucum L. (Coleoptera: Curculionidae), was determined, purified, and characterized in this study. The Bt-Bn1 strain was investigated for antibacterial activity with an agar spot assay and well diffusion assay against B. cereus, B. weinhenstephenensis, L. monocytogenes, P. savastanoi, P. syringae, P. lemoignei, and many other B. thuringiensis strains. The production of bioactive molecule was determined at the early logarithmic phase in the growth cycle of strain Bt-Bn1 and its production continued until the beginning of the stationary phase. The mode of action of this molecule displayed bacteriocidal or bacteriolytic effect depending on the concentration. The bioactive molecule was purified 78-fold from the bacteria supernatant with ammonium sulfate precipitation, dialysis, ultrafiltration, gel filtration chromatography, and HPLC, respectively. The molecular mass of this molecule was estimated via SDS-PAGE and confirmed by the ESI-TOFMS as 3,139 Da. The bioactive molecule was also determined to be a heat-stable, pH-stable (range 6-8), and proteinase K sensitive antibacterial peptide, similar to bacteriocins. Based on all characteristics determined in this study, the purified bacteriocin was named as thuricin Bn1 because of the similarities to the previously identified thuricin-like bacteriocin produced by the various B. thuringiensis strains. Plasmid elution studies showed that gene responsible for the production of thuricin Bn1 is located on the chromosome of Bt-Bn1. Therefore, it is a novel bacteriocin and the first recorded one produced by an insect originated bacterium. It has potential usage for the control of many different pathogenic and spoilage bacteria in the food industry, agriculture, and various other areas.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권2호
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• pp.159-165
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• 1997

We collected 3,237 plant samples, mainly leaves of various trees, from many provinces in Korea and a total of 1,925 Bacillus thuringiensis isolates were obtained and characterized. The isolates were characterized in terms of crystal morphology, PAGE pattern of the toxin proteins, plasmids pattern, biochemical characteristics, and bioassay. The microscopic observation showed that 49.1% of the isolates have bipyramidal shape crystals, 7.1% of spherical shape crystals, 1.4% of rhomboidal shape crystals, and others have small or amorphous inclusions. The insecticidal activities of the spore-crystal mixtures of isolates were tested against Plutella xylostella, Bombyx mori, Culex pipiens, and Agelastica coerulea. Bioassay showed that 51.3% of the isolates were shown to be active; lepidopteran-specific (44.8%), dipteran-specific(4.9%) and coleopteran-specific (1.6%). The remainder(48.8%) did not show any activity against the insects we tested. Interestingly though, some of these non-active isolates were shown to have bipyramidal crystals. By serotyping 22 isolates of our collection, we found that there are various kind of subspecies such as aizawai, amagiens, canadensis, darmstadiensis, galleriae, finitimus, kurstaki, morrisoni and neoleonensis, and three isolates have been classified into a new serotype, H49, and one of them, the type strain, named subsp. muju. From this study it was found that phylloplane is a good source for the isolation of Bacillius thuringiensis, and Bacillus thuringiensis is distributed widely in Korea.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권5호
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• pp.348-351
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• 1988

Bacillus thuringiensis, 19 serovars가 $\alpha$-amylase를 생산하는지를 검색했다. 각 균주를 soluble starch가 포함된 배지에서 배양하여 iodine 용액으로 확인한 결과 B. thuringiensis serovar thuringiensis alesti, kurstaki, sotto, kenya, entomocidus, morrisoni, tolworthi, toumanoffi, thompsoni, pakistani, israelensis와 indiana는 아밀라제를 생산하였으며, 이중에서 serovar. thuringiensis가 생산을 제일 많이 했고, serovar. alesti와 tollworthi는 제일 낮았다. B. thuringiensis var, israelensis가 생산하는 $\alpha$-아밀라제의 활성은 pH6.7~7.2와 55~$65^{\circ}C$에서 제일 높았고, 효소생산은 LB배지보다 기본배지 (1.0% bacto-peptone, 0. 3% beef-extract, 0.3% yeast-extract, 0.5% NaCl, 0.3% $K_2$HPO$_4$와 0.1% KH$_2$PO$_4$, 0.2% Soluble Starch에 금속이온인 0.012% CaCl$_2$.2$H_2O$$_2$, 0.005% MnCl$_2$, 0.03% MgCl$_2$.7$H_2O$을 첨가한 배지에서 제일 높았다. 배양후 4시간 됐을 때에 $\alpha$-amylase 생산이 제일 높았다. Starch 배지에서는 0.6units/$m\ell$, glucose 배지에서는 0.43units/$m\ell$씩 생산되었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제31권1호
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• pp.37-44
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• 1989

Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki, aizawai, dendrolimus, finitimus 그리고 israelensis의 결정성독소의 특성을 구명하기 위하여 이들 균주들이 생산하는 결정성독소들을 alkali용액, SDS용액, 누에소화액 그리고 부분정제된 누에소화액 protease에 용해시켜 전기영동을 실시 이들 독소의 저분자화 현상을 조사하였으며 또한 amino산 조성과 면역학적 특성을 조사하여 아래와 같은 결과를 얻었다. 1. Alkali 용액과 1% SDS-1% $\beta$-mercaptoethanol에 결정성독소들을 용해시킨 결과 subsp. kurstaki, dendrolimus, finitimus 그리고 aizawai로부터는 분자량 1.3$\times$105과 6.5$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났고 subsp. israelensis에서는 분자량 4$\times$104과 1.4$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났다. 2. 누에소화액에 의한 결정성독소의 분해상은 alkali용액이나 SDS-mercaptoethanol 처리때와 같은 pattern을 보여 주었다. 3. 부분정제된 누에소화액 protease로 결정성독소를 용해시켰을 경우 subsp. kurstaki, aizawai, finitimus에서는 분자량 1.3$\times$105의 subunit는 용해되어 거의 나타나지 않았고 6.0-6.4$\times$104의 subunit가 주 band로 나타났으며 subsp. dendrolimus에서는 분해 정도가 약하게 나타났고 subsp. israelensis에서는 alkali나 SDS 처리때와 비슷한 전기영동상을 나타냄으로써 누에소화액 protease에 의하여 용해되지 않았음을 보여 주었다. 4. 결정성독소의 amino산 조성은 subsp. israelensis에서는 aspartic산이 14.5%로 가장 많은 비율을 차지하였고 그외 4개의 subsp.에서는 glutamic산이 13.9-14.6%로 가장 많았다. 5. 결정성독소의 면역학적 특성을 보면 subsp. israelensis의 항체는 그것의 항원과만 반응하고 그외 4개의 subsp.의 항체는 각각의 항원과 그리고 서로 다른 항원과 교호하여 반응하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권6호
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• pp.685-691
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• 1998

Baculovirus Hyphantrin. cunea nuclear polyhedrosis virus (HcNPV) insecticide containing the insecticidal protein (ICP) gene from Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD1 was constructed using a lacZ-HcNPV system. The ICP ($\delta$-endotoxin) gene was placed under the control of the polyhedrin gene promoter of the HcNPV. A polyhedrin-negative virus was derived and named ICP-HcNPV insecticide. Then, the insertion of the ICP gene in the ICP-HcNPV genome was confirmed by Southern hybridization analysis. Polyacrylamide gel electrophoresis (PAGE) analysis of the Spodoptera frugiperda cell extracts infected with the ICP-HcNPV showed that the ICP was expressed in the insect cells as 130 kDa at 5 days post-infection. The ICP produced in the cells was present in aggregates. When extracts from the cells infected with the ICP-HcNPV were fed to 20 Bombyx mori larvae, the following mortality rate was seen; 8 larvae at 1 h, 10 larvae at 3 h, and 20 larvae at 12 h. These data indicate that the B. thuringiensis ICP gene was expressed by the baculovirus insecticide in insect cells and there was a high insecticidal activity. The biological activities of the recombinant virus ICP-HcNPV were assessed in conventional bioassay tests by feeding virus particles and ICP to the insect larvae. The initial baculovirus insecticide ICP-HcNPV was developed in our laboratory and the significance of the genetically engineered virus insecticides is discussed.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제38권2호
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• pp.154-159
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• 1996

전국 토양, 앙장 농가, 저곡 창고, 시설 원예 단지, 과수원, 산, 밭 등에서 분리한 토양과 먼지 등의 시료로부터 거세미나방속 해충에 강한 독성을 보이는 7개 균주를 분류하였다. 이들을 각각 STB-1에서 STB-7까지 명명하였으며 모두 약 130kDA의 내독소 단백질을 형성하였다. 편모항원성 검정 결과 STB-1, STB-2는 B. thuringiensis subsp. kurstaki와 STB-3, STB-4, STB-5는 subsp. kenyae와 반응하였으며 STB-6, STB-7은 기존의 편모항체와 반응하지 않았다. PCR로 유전자형을 분석한 결과 STB-1은 B. thuringiensis subsp. kurastaki에서는 보고되지 않은 cryIE 유전자를 가지고 있으며 STB-5는 subsp. kenyae와는 다른 유전자형을 보였다. 기존의 편모항체와 반응을 보이지 않은 STB-6와 STB-7은 cryIA(a), cryIA(b), cryIC, cryII를 가지고 있었다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제4권4호
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• pp.322-326
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• 1994

Bacillus thuringiensis strain BT-14 was isolated from alfalfa dust in Korea. The strain BT-14 produced one bipyramidal crystal and one spore in the cell. The biochemical characteristics of the strain BT-14 were similar to those of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki HD-l. Examination of its antibiotic resistance revealed that while the strain BT-14 was less resistant than BTK HD-l to ampicillin, gentamycin, neomycin and tobramycin, it was more resistant to amikacin than BTK HD-l. The $\delta$-endotoxin crystal of strain BT-14 consisted of a single protein with a high molecular weight of ca 135 KD on a 10% SDS-PACE. The strain BT-14 contained at least nine different plasmids with sizes of 2.9, 5.3, 5.8, 6.2, 9.4, 15.1, 18.1, 23.1 and 79 Kb. In insect bioassay, the isolated strain BT-14 showed lethality of 67% against Plutella xylostella larvae at dilution of 5$\times$$l0^{-4}$ (5$\times$l0 to 3$\times$$l0^2$ spores/ml), which is, almost equivalent to that of BTK HD-l.