The study has been carried out to acquire some basic informations about Bacillus thuringiensis for developing the microbial pesticide. Pathogenicity tests on three of B.thuringiensis var. aizawai, kurstaki, and dendrolimus were determined in two species of insects, H. cunea and B. moris. The pathogencity in varieties of B. thuringiensis against H. cunea and B. mori was depended on instar age of tested larvae. Bacillus thuringiensis var. dendrolimus, kurstaki, aizawai are arranged in order of pathogenicity against H. cunea and B. mori. In result Bacillus thuringiensis var. kurstaki was shown the most stable toxicity with respect to each instar of tested larvae.
A cloned delta-endotoxin gene from Bacillus thuringiensis var. kurstaki NRD 6 was mutated at N-terminal toxic portion of the protoxin by site-directed mutagenesis. A Stu 1 restriction site was created in protoxin region of the mutant B.t.kurstaki NRD 6-Stu 1 which changed A to C in 177 region of the protoxin(silent mutation). Antigenic property of crystalline inclusion (delta-endotoxin) of the mutant was no difference to intact strain by the western blot analysis and its toxidity threshold value was also showed 0.015~0.030ng against Choristoneura femiferana-1 insect, similar with 0.01~0.024ng of parent strain, but stronger than that of B.t.kurstaki NRD 5 (500~1000ng) and B.t.kurstaki NRD 4(none toxic).
The prolein components of each crystal toxin of Bacillus thuringiensis kurstaki and alzawai were separated by SDS-PAGE. The major clqistal proteins from both shins were composed of paiypeptides having molecular weights of 130 kd and 64 kd. Digestive mixture of both. toxins with t~ypsin and gut juices shared 62 kd polypeptide which may be major actwe toxh. However, aizawal produced much less amount of 62 kd polypeptide than kurstaki did. On ingestion with Bt &-endotoxin, larvae of Hyphantria cunea developed 45 kd stress protein in the several tissues including fat body, which was induced by heat and cold shock.
Ultrastructural changes of tissues caused by Bacillus thuringiensis var. kurstaki $\delta$-endotoxin intoxication of Hyphantria cunea were observed by transmission electron microscopy. Bt $\delta$-endotoxin crystals induced the disruption of microvilli, vacuolation of cytoplasm, changes in the cisternae of the endoplasmic reticulum, disappearance of basal striations, loss of ribosomes, and changes in the configurations of mitochondria in the columnar cell of midgut. The fat body cells also showed spherical endoplasmic reticulum and distorted mitochondria, and then the cells were destroyed.
The toxic effect of Bacillus thuringiensis var, kurstaki $\delta$-endotoxin was determined in the midgut, fat body and Malpighian lobules from larvae of Hyphantria cunea using the au-toradiography and Western blot methods. Bt $\delta$-endotoxin crystals inhibited protein synthesis and elongation factor-2 activity of all tissues tested.
The flagella antigenic variation of nine Bacillus thuringiensis serovar kurstaki temperature-sensitive mutants grown at the permissive temperature (3$0^{\circ}C$) was detected by a serological agglutination between H-antigen and antiserum. The flagella antigens were injected to rabbits to prepared their antisera, and then their homologous and heterologous titers of the antisera were measured. The homologous titers were ranged from 1:6,400 to 1:12,800, but the heterologous titers were very low. The H-antigen of the wild type strain was not agglutinated to 4 heterologous antisera, ts-U23 not to 7, ts-U3l not 5, ts-U32 not to 4, ts-U33 not to 7, ts-U7l not to 4, ts-U73 not to 6, ts-U74 not to 6, ts-U91 not to 4 and ts-U603 not to 4 antisera.
Dissolution and degradation of the parasporal crystal proteins produced from B. thuringiensis var. kurstaki, B. thuringiensis var. dendrolimus and B. thuringiensis var. aizawai were investigated. SDS-polyacrylamide gel electrophoresis analysis showed that the crystals contained major protein with molecular weight of approximately 134 kDa for B. thuringiensis var. aizawai 143 kDa for B. thuringiensis var. kurstaki and 149 kDa for B. thuringiensis var. dendrolimus, respectively. Crystals of three other strains were incubated alkali solutions at various pH or gut juice of Silkwarm Bombyx mori, Fall webworm Hyphantria cunea, and Common Cabbage worm Pieris rapae. When crystals of these strains were solubilized by alkali solutions, no major differences among strains B. thuringiensis could be detected. Among the strains studied, crystal protins (130-66 kDa) consist of protease resistant polypeptides in the 45-66 kDa size range when treated with gut juice of three insect species.
Park, Hyun-Woo;Pino, Brent C.;Kozervanich-Chong, Switzerlyna;Hafkenscheid, Erika A.;Oliverio, Ryan M.;Federici, Brian A.;Bideshi, Dennis K.
Journal of Microbiology and Biotechnology
/
v.23
no.1
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pp.88-91
/
2013
The Cyt1Aa protein of Bacillus thuringiensis subsp. israelensis is known to synergize mosquitocidal proteins of B. thuringiensis and Bacillus sphaericus strains. Cyt1Aa is highly lipophilic, and after binding in vivo to the midgut microvillar membrane serves as a "receptor" for mosquitocidal Cry proteins, which subsequently form cation channels that kill mosquito larvae. Here we report that Cyt1Aa can serve a similar function for lepidopteran-specific Cry proteins of B. thuringiensis in certain mosquito larvae. Engineering Cyt1Aa into the HD-1 isolate of B. thuringiensis subsp. kurstaki enhanced toxicity against $4^{th}$ instars of Aedes aegypti, but not against $4^{th}$ instars of Culex quinquefasciatus.
The compositions of the four madia and their pHs for delta endotoxin production by B. thuringiensis serovar kurstaki 3a3b were examined. In the M-4 media out of the 4 media at pH8, the production of the endotoxin and spore formation were maximal. The mean generation times of the bacterium were 53.4 minutes in the M-1 media, 98 in the M-2, 132 in the M-3, and 127.5 in the M-4. The proper pHs of the media for the endotoxin production appeared to be pH 7 to 8. In the M-4 media, the lag time lasted about 5 hours.
For the environmental friendly management of diamondback moth, Plutella xylostella (L.), Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki ($30{\times}10^8\;cfu/mg$) and neem oil (0.5% azadirachtin) were used as green control agencies with mixed and alternative treatments on the chinese cabbage. When Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki was applied to 1st and 2nd larva of P. xylostella with recommended concentration, their mortalities were reached to 100% by 2 days after treatment. In case of azadirachtin, its effect of mortality was continued for 7 days, and reached to 100% mortality. $LC_{50}$ values of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin against 1st, 2nd, 3rd and 4th larva of P. xylostella were $2.8{\times}10^4$, $3.1{\times}10^4$, $3.4{\times}10^4$ and $1.5{\times}10^5\;cfu/ml$, and 2.7, 3.9, 4.7 and 7.1 ppm, respectively. The number of laid eggs of P. xylostella was reduced to 57.5 at 25 ppm of azadirachtin compared with control treatment. The hatch ratio was not significantly different with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment in comparison with control treatment. However, when azadirachtin was applied, their hatch ratio were reduced to 25.8 and 45.4% at 25 and 50 ppm, respectively. On the other hand, emergence rate of eggs was not different with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment, but 45.4% was shown in azadirachtin treatment with 50 ppm in comparison with control. When the mixture with Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin was applied to adults of P. xylostella, their mortality was higher than Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki treatment only. These results are supposed that the mixture of Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki and azadirachtin might be used as green control agents for reducing the demage of diamondback moth in the Chinse cabbage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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