세계 각국의 민족은 자신의 국토의 삶과 기후 풍토, 지역 특산 산물과 식습관 및 식생활 등에 따라 색다른 전통식품이 만들어 진다. 한국은 오랫동안 농경을 중심으로 먹거리를 해오며 쌀과 함께 곁들일 채소류를 중심으로 조미료가 발달되었고, 염절임 기법을 통해 발효식품을 만들었다. 이러한 발효식품에서 주로 찾아볼 수 있는 종은 Lactobacillus sp.과 Pediococcus sp. 및 Bacillus sp. 등과 같은 유산균을 분리할 수 있었고 다양한 방법으로 동정 되어왔다. 본 연구에서는 시장에서 시판되고 있는 한국전통발효식품을 통해 유산균을 분리 및 동정하였고, 유해세균에 대한 항균능력이 우수한 균주를 선별하였다. 그리고 우수 후보 균주의 인공위액 및 담즙액에 대한 내성과 용혈능 등을 검토하여 최종 균주를 선별하였다. 최종 선별된 유산균은 3종의 prebiotics와 혼합한 synbiotics로서의 항균활성 능력을 평가하였다. 1차 항균 활성에서 C13은 인체 및 어류질병세균에서 가장 넓은 항균 스펙트럼을 보였고, β-haemolysis를 생산하지 않고 인공위액과 담즙액의 내성을 지닌 M1, K1 및 C13을 synbiotics의 2차 항균 활성을 수행하였다. Prebiotics 3종(FOS, GOS, Inulin)과 선별된 균주가 혼합된 synbiotics에서는 이전 보다 항균 활성이 증진 또는 저해됨을 알 수 있었다. 16 rDNA 염기서열 결과, K1과 M1은 Bacillus tequiensis 99.72%, Bacillus subtilis 99.65%, Bacillus inaquosorum 99.72%, Bacillus cabrialesii 99.72%, Bacillus stercoris 99.58%, Bacillus spizizenii 99.58%, Bacillus halotolerans 99.58%, Bacillus mojavensis 99.51%로 분석되었다. 그리고 C13은 Bacillus velezensis 99.71%, Bacillus nematocida 99.36%, Bacillus amyloliquefaciens 99.44%, Bacillus atrophaeus 99.22%, Bacillus nakamurai 99.44%로 분석되었다.
새로운 항진균성 항생물질개발을 목적으로 고추탄저병균인 Colletotrichum gloeosporioides에 대한 항생활성을 가지는 미생물을 토양으로부터 분리하여 동정한 결과, Bacillus sp. CJ-1로 동정하였다. 항생물질의 생산을 위한 배양조건을 검토한 결과, glucose 1.5% (w/v), yeast extract 0.5% (w/v), pH 6.0의 배지를 사용하여 $35^{\circ}C$에서 72시간 진탕 배양하였을 때 항진균활성이 가장 좋았으며, 이때 피검균인 C. gloeosporioides에 대한 배양액의 생육저지환은 약 27.8mm로 최대의 활성을 보여주었다. 피검균인 C. gloeosporioides에 대한 배양액의 생육저지현상을 현미경을 통해 관찰한 결과 배양액 $12.5\;{\mu}L\;mL^{-1}$이상의 농도에서 뚜렷한 생육저해현상을 관찰할 수 있었으며 이는 피검균 포자의 발아억제현상과 연관되어 있을 것으로 추측된다.
Bacillus sp. SD-10이 생산하는 항균물질을 이용하여 버섯의 갈색무늬병균 및 푸른곰팡이병균에 대한 천연물 버섯병해 방제약재 개발을 위한 기초적 연구를 행하였다. Bacillus sp. SD-10은 35∼4$0^{\circ}C$의 배양온도에서 30∼40 hrs 배양하였을 때 가장 높은 항균활성을 나타내었다. 이 배양액을 이용하여 T. virens의 균사 생육저해 및 포자발아 억제 농도를 검토한 결과, 균사생육은 30 ul 이상 처리 시 뚜렷하게 저해되었으며 포자발아는 평판배지에 5%(v/v) 이상 첨가 시 완전하게 억제되었다. Bacillus sp. SD-10의 배양액으로부터 항균물질을 순수분리하여 UPX-1으로 명명하고, UPX-1을 $^1H-$NMR과 $^{13}C$-NMR 스펙트럼으로 구조를 동정한 결과 탄소 6개로 구성된 당 2개가 2당류 구조로 결합되어 있는 화합물임이 밝혀졌다. UPX-1은 T. virens 뿐 아니라 Pse. tolaassi에도 아주 강한 항균효과를 나타내었다.
The nucleotide sequence of the xylanase gene (xynS) from alkali-tolerant Bacillus sp. YA.14 was determined and analyzed. A 639 base pairs open reading frame for xynS gene was observed and encoded for a protein of 213 amino acids with a molecular weight of 23, 339. S1 nuclease mapping showed that the transcription initiation site of the xynS gene did not exist in the cloned DNA. Ribosome binding site sequence with the free energy of -18.8 Kcal/mol was observed 8 base pairs upstream from the initiation codon, ATG. The proposed signal sequence consisted of 28 amino acids, of which 3 were basic amino acid residues and 21 were hydrophobic amino acid residues. When the amino acid sequences of xylanases were compared, Bacillus sp. YA-14 xylanase showed 48% homology with Bacillus sp. YC-335 xylanase and 96% homology with xylanases from B. subtilis and B. circulans.
토양으로부터 분리한 Streptomyces sp. 30여 균주들과 한국전통식품에서 분리한 Bacillus sp. 200여 균주들로부터 ${\alpha}$-glucosidase 의 활성을 저해하고 동시에 DNJ를 생산하는 유용균주를 선발하였다. 실험결과 한국전통식품인 청국장으로부터 ${\alpha}$-glucosidase 저해능이 높고 DNJ 생산능이 우수한 한개의 균주를 선발하였다. 이 균주의 동정을 위하여 API kit에 의한 균의 당 이용능 분석, HPLC와 GC에 의한 균체의 quinone 및 지방산 분석 등과 함께 균의 16S rDNA 염기서열을 분석하였으며 주사전자현미경에 의해 균주의 형태적 특성을 관찰하였다. 그 결과 본 연구를 통해 선발한 균주는 건강기능성식품 개발 등에 적용할 수 있는 GRAS에 속하는 균주임을 확인하여 B. subtilis MORI로 명명하였다.
Using the alkalophillic Bacillus sp. SH-8 and its mutant Bacillus sp. SH-8M capable of growing at the neutral pH, the amino acid compositions of the cell wall and cell membrane were studied at varying cultivation pH's. The pattem of protein electrophoresis was also tested. It was elucidated that the amino acids consisting of the cell wall were alanine, glutamic acid, lysine, aspartic acid, and meso-diaminopimelic acid. There was not any significant difference in the amino acid compositqon betweeo`two straqns regardless of the culture pH. As the results of HPLC ssay, glutamic acid and aspartic aciu accounted for more than 50% in the amqno acid composytqon of the cell wall. By the isolatqon of the crude cell membrane and the SDS-PAGE analysis, it was found that there was a considerable difference qn the protein pattern when the straqns were cultured at the neutral pH. In addition, by the two dimensional gel electrophoresis, it was confirmed that there was a difference in the protein patterns between two strains cultivated at the neutral pH medium but no difference at the alkaline medium.
A microorganism capable of producing high level of extracellular cyclodextrin glucanotransferase(EC 2.4.1.19 ; CGTase) was isolated from Kimchi. 2-O-$\alpha$-D-glucopyranosyl L-ascorbic acid(AA-2G) was synthesized by transglycosylation reaction of CGTase using starch as a donor and L-ascorbic acid as an acceptor. The isolated strain S-6 was identified as Bacillus sp. S-6. The maximal CGTase production was observed in a medium containing 0.5% soluble starch, 1% yeast extract, 1% NaCO3, 0.1% K2HPO4, and 0.02% MgSO4 with initial pH 8.0. The strain was cultured at 37$^{\circ}C$ for 40 hr with reciprocal shaking. Using the culture supernatant as crude enzyme, the optimal pH and temperature of the CGTase activity of this strain were 7.0 and 4$0^{\circ}C$. In the effects of pH and temperature on the stability of the enzyme, the enzyme was stable in the range of pH 6.0~10.0 and up to 45$^{\circ}C$, respectively.
전분의 효율적인 이용을 목적으로 토양으로부터 균체외 플루탄아제효소를 대량분비하는 약알칼리성균주 Bacillus sp. S-1를 분리하였다. 본 균주의 풀루란아제효소 생샨의 최적 pH는 6-10 사이였으며, 조효소의 가용성전분과 플루란에 대한 주요반응 최종산물은 말토트리오스로, 본 효소가 ${\alpha}$-1,6-glycosidic 결합에 특이적임을 알 수 있었다. 본 균주는 지금까지 알려진 알칼리성균주들의 플루란아제 생산성보다 월등히 높은 7.0U/ml를 생산하였으며, 정제효소의 최적 pH와 온도는 각각 8.0-10.0와 50-60$^{\circ}$C로서 알칼리성 및 호열성의 특성을 나타났었다. 또한 정제효소는 pH12에서도 약 10%의 활성을 유지하며, 넓은 pH범위에서도 안정하였다. 이러한 결과들은 본 균주가 플루란아제 생산균주로서의 이용가능한 잠재력을 보유하고 있음을 시사하였다.
가축 사료첨가용 효소생산을 목적으로 xylanase 및 CMCase를 동시에 분비하는 미생물을 분리한 후 가장 생산성이 높은 균주를 선발하였다. 선발된 미생물을 동정한 결과 Bacillus sp.에 속하는 균주로 Bacillus sp. A-7로 명명하였으며, B. licheniformis로 동정되었다. 효소생산을 위한 최적 액상배양조건은 탄소원으로 glucose 2.0%(w/v), 질소원으로 yeast extract 0.3%(w/v), 미네랄은 CaCl$_2$ 0.1% (w/v)인 것으로 나타났다. 저렴한 효소생산을 위한 배지조성을 얻기 위해 가축사료로 이용되는 저가의 원료사료를 이용하여 효소생산성을 파악한 결과 대두박 1.0%(w/v)와 당밀 0.5%(w/v)가 특히 xylanase 생산성이 높은 것으로 나타났다. 특히, 대두박 1.0%(w/v)를 기본배지로 하여 ammonium nitrate 0.3%(w/v) 및$ CaCl_2$ 0.1% 첨가가 적합한 배지조성으로 나타났다.
Antagonistic effect of bacterial strains isolated from phylloplane of strawberry plants grown In greenhouse was tested on Botrytis cinerea Among the promising bacterial strains, Bacillus sp. S1-0210 showed highest inhibition of mycelial growth of B. cinerea and a broad spectrum of antifungal activities against many plant pathogenic fungi in vitro. Bacillus sp. S1-0210 was identified as Bacillus subtilis based on the analysis of 185 rDNA as well as its biochemical characteristics. Application of wettable powder formulation of B. subtiiis S1-0210 significantly reduced the incidence of gray mold on trawberry fruits during storage. Results showed that treatment of B. subtilis S1-0210 decreased the incidence of gray mold by 4.8% whereas the incidence in control was 77.9%, indicating that the formulation of B. subtilis S1-0210 will be practically applied on strawberry fruits as a biocontrol agent of gray mold during storage.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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