A xylanolytic bacterial strain, MX47, was isolated from rotting plant matter in soil. The strain was aerobic and gram positive, and grew between pH 6.0 and 11.0. Cells were susceptible to thiostrepton and chloramphenicol. The major fatty acids (>3%) comprised 64.55% of iso-$C_{15:0}$, 22.76% of anteiso-$C_{15:0}$, and 3.92% of iso-$C_{17:0}$. The G/C content of the DNA was 44.15 mol%. The predominant respiratory quinone was menaquinone 7 (MK-7). Searches for 16S rRNA gene sequence similarity as well as phylogenetic analyses strongly suggested that the strain should be classified to the genus Bacillus. However, its biochemical characteristics, including acid production and enzyme activities, are different from those of other Bacillus strains in the same clade, and therefore, we propose the name Bacillus sp. MX47.
제주도 양식장 배출수 퇴적층에서 단백질 분해 효소를 생산하는 세균을 분리하였으며, 각각 SK-2, 및 SK-125라고 명명하였다. 분리균주 SK-2의 16S rDNA의 염기서열 분석 결과 Baeillus lieheniformis와 Baeillus subtillis의 염기서열과 99%의 상동성을 보였으며, BIOLOG를 이용한 생화학적 분석에서도 Bacillus family와 유사한 특성을 보여 최종적으로 분리균주 SK-2를 Baeillus sp. SK-2으로 명명하였다. 또한 분리균주 SK-125의 16S rDNA의 염기서열 분석 결과 Pseudoal teromonas haloplanktis의 염기서열과 99% 의 상동성을 보였으며, BIOLOG를 이용한 생화학적 분석에서도 Pseudoalteromonas family와 유사한 특성을 보여 최종적으로 분리균주 SK-125를 Pseudoalteromonas sp. SK-125라고 명명하였다. Baeillus sp. SK-2와 Pseudoalteromonas sp. SK-125균주의 온도별 실험에서는 $40^{\circ}C$에서 가장 높은 생육도를 보였으며, 효소활성은 Bacillus sp. SK-2와 Pseudoalteromonas sp. SK-125 두 균주 모두 $30^{\circ}C$에서 가장 높은 활성을 보였다.
A bacterial isolate derived from soil samples near a cattle farm was found to display extracellular phytase activity. Based on 16S rRNA sequence analysis, the strain was named Bacillus sp. T4. The optimum temperature for the phytase activity toward magnesium phytate (Mg-$InsP_6$) was $40^{\circ}C$ without 5 mM $Ca^{2+}$ and $50^{\circ}C$ with 5 mM $Ca^{2+}$. T4 phytase had a characteristic bi-hump two pH optima of 6.0 to 6.5 and 7.4 for Mg-$InsP_6$. The enzyme showed higher specificity for Mg-$InsP_6$ than sodium phytate (Na-$InsP_6$). Its activity was fairly inhibited by EDTA, $Cu^{2+}$, $Mn^{2+}$, $Co^{2+}$, $Ba^{2+}$ and $Zn^{2+}$. T4 phytase may have great potential for use as an eco-friendly feed additive to enhance the nutritive quality of phytate and reduce phosphorus pollution.
Sin, Da Hee;Kim, Deok Hyeon;Kim, Jong In;Lee, Moon-Soon;Chung, Keun-Yook
한국토양비료학회지
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제46권6호
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pp.673-680
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2013
Phosphorus accumulating microorganisms (PAOs) are influenced by various environmental factors and heavy metals. This study was performed to evaluate the effects of the selected heavy metals on the growth and phosphorus removal capacity of Bacillus sp. 3434 BRRJ, Pseudomonas aerunogisa, and Bacillus Subtilis, well known as PAOs. The heavy metals used in this study included Cu, Cd, As, and Zn. The $IC_{50}$ (median inhibition concentration) values of Bacillus sp. 3434 BRRJ for the Cu, Cd, As, and Zn were 8.07 mg $L^{-1}$, 0.18 mg $L^{-1}$, 73.62 mg $L^{-1}$ and 0.25 mg $L^{-1}$, respectively. The $IC_{50}$ values of Pseudomonas aerunogisa for the Cu, Cd, As, and Zn were 4.45 mg $L^{-1}$, 0.16 mg $L^{-1}$, 18.51 mg $L^{-1}$ and 2.34 mg $L^{-1}$, respectively. The $IC_{50}$ values of Bacillus Subtilis for the Cu, Cd, As, and Zn were 3.81 mg $L^{-1}$, 0.18 mg $L^{-1}$, 11.31 mg $L^{-1}$ and 0.47 mg $L^{-1}$, respectively. The phosphorus removal efficiencies of the three bacteria, Bacillus sp. 3434 BRRJ, Pseudomonas aerunogisa, and Bacillus subtilis were 93.12%, 71.81%, and 65.31%, respectively. Based on the results of the three PAOs obtained from the study, it appears that Bacillus sp. 3434BRRJ may have the best results in terms of their growth rate and P removal efficiencies.
혈전 용해효소를 생산하는 미생물을 탐색하기 위하여 장류 및 토양사료로부터 미생물을 분리하여 그 중 fibrin 용해활성이 높고 기질특이성이 우수한 S7-l6 균주를 선발하였다. 선발된 미생물은 Gram 양성의 간균으로 운동성이 있고, catalase 양성이었으며 포자를 형성하는 것으로 관찰되어 BClcilius sp. S7-16으로 명명하였다. $\alpha$cill$\mu$ sp S7-16의 효소생산 조건을 검토한 결과,0.5% (w/v) polypeptone, 0.5% (w/v) yeast extract, 0.3% (w/v) NaCI, 0.l%(w/v) $KH_2P0_4$, 0.3% (w/v) $KH_2P0_4$, 0.01% (w/v) $MgSO_4.7H_20$(pH7.0)의 배지조성하에서 $35^{\circ}C$애서 180 rpm으로 24시간 회전진탕배양하였을 때 fibrin 용해효소 생산이 최대를 보였으며, 이때 casein 용해활성은 나타나지 않았다. Fibrin 용해효소의 효소적 특성을 조사하기 위해 이 조건하에서 얻어진 배양상동액에 20~60% ammomum sulfate 분획침전을 행하여 조효소액을 조제하였으며, 얻어진 조효소액은 pH4~11의 범위에서 안정하였으며, $50^{\circ}C$까지 비교적 활성이 유지되는 열안 정성을 보여주었다. 조효소액의 최적 pH와 온도는 각각 7.5, $40^{\circ}C$부근에서 최적활성을 보였다.
A commercially important alkaline protease, produced by Bacillus sp. RRM1 isolated from the red seaweed Kappaphycus alvarezii (Doty) Doty ex Silva, was first recognized and characterized in the present study. Identification of the isolated bacterium was done using both biochemical characterization as well as 16S rRNA gene sequencing. The bacterial strain, Bacillus sp. RRM1, produced a high level of protease using easily available, inexpensive agricultural residues solid-state fermentation (SSF). Among them, wheat bran was found to be the best substrate. Influences of process parameters such as moistening agents, moisture level, temperature, inoculum concentration, and co-carbon and co-nitrogen sources on the fermentation were also evaluated. Under optimized conditions, maximum protease production (i.e., 2081 U/g) was obtained from wheat bran, which is about 2-fold greater than the initial conditions. The protease enzyme was stable over a temperature range of 30-$60^{\circ}C$ and pH 6-12, with maximum activity at $50^{\circ}C$ and pH 9.0. Whereas the metal ions $Na^+$, $Ca^{2+}$, and $K^+$ enhanced the activity of the enzyme, others such as $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Fe^{2+}$, $Co^{2+}$, and $Zn^{2+}$ had rendered negative effects. The activity of the enzyme was inhibited by EDTA and enhanced by $Cu^{2+}$ ions, thus indicating the nature of the enzyme as a metalloprotease. The enzyme showed extreme stability and activity even in the presence of detergents, surfactants, and organic solvents. Moreover, the present findings opened new vistas in the utilization of wheat bran, a cheap, abundantly available, and effective waste as a substrate for SSF.
미생물에 의한 균체외 단백질의 생산 및 그 분비조건에 관한 기초자료를 얻기 위해 토양으로 부터 단백질 생산균주 11주를 분리하여 그 중 단백질 생산능이 강한 WY-60 균주를 선정하여 동정한 결과, Bacillus sp.으로 확인되었다. WY-60 균주의 단백질생산 최적조건은 fructose 4.0%, polypeptone 1.0%, $NH_4NO_3$ 0.1%, $K_2HPO_4$ 0.1%, $MgSO_4{\cdot}7H_2O$ 0.005%, $CaCO_3$ 1.0%, pH 8.0 및 온도 $30^{\circ}C$이였다. WY-60 균주는 penicillin G와 lincomycin을 첨가시에 단백질 생산을 촉진하였고 그 외의 항생물질의 첨가시는 단백질 생산을 증가하는 효과가 없었다. 배양시간에 따른 단백질 생산은 배양 5일째에 0.214 mg/ml로 최대가 되었다.
전통적인 방법으로 제조한 청국장과 볏짚시료로부터 배양방법과 비배양방법인 DGGE를 이용한 청국장의 발효미생물 군집을 분석하였다. 배양방법에서는 미륵산농원의 볏짚과 청국장 시료에서 P. agglomerans (65%)와 B. subtilis (60%)가 우점미생물로 나타내었고, 흥업토속 청국장의 볏짚과 청국장 시료에서는 B. amyloliquefaciens (57%와 52%)가 우점미생물로 확인하였다. DGGE 분석에서는 미륵산농원의 볏짚과 청국장 시료에서 P. agglomerans (Band intensity 20.6%)와 B. subtilis (Band intensity 25.7%)가 우점미생물로 나타내었고 흥업토속 청국장의 볏짚과 청국장 시료에서는 B. amyloliquefaciens (Band intensity 27.3%, 26.4%)가 우점미생물로 확인하였다. 그 외에도 볏짚에서는 Pantoea sp. Enterococcus durans, Enterobacter sp, P. ananatis, Bacillus sp., Rhodococcus sp. Pseudomonas fulva, Acinetobacter sp., B. licheniformis, B. amyloliquefaciens 등의 미생물을 확인하였고 청국장에서는 B. licheniformis, B. subtilis, Bacillus sp., B. circulans, Acinetobacter sp. 등의 미생물을 확인이 되었으며, 비배양 방법을 이용한 청국장 발효미생물 균총 조사는 배양이 불가능한 미생물을 확인할 수 있었다.
국내 토양 미생물로부터 효과적인 카탈라제 생산 미생물을 이용하기 위하여 전라남도 벌교 토양 시료로부터 카탈라제 생산량이 높은 균주 (BKBChE-1, BKBChE-2, BKBChE-3)를 분리, 생화학 실험과 전자현미경을 통한 균주의 형태 관찰및 16S rDNA 유전자 서열분석 등을 통해 미생물을 동정하여 각각의 균주는 99% 이상의 상동성으로 Bacillaceae bacterium BKBChE-1, Bacillus sp. BKBChE-2, Bacillus flexus BKBChE-3로 명명하였다. 선별된 세 가지 균을 배양하여 얻은 카탈라제 효소의 온도와 pH 변화가 효소 활성에 미치는 영향을 조사하였다. 토양에서 분리한 세 가지 균주가 생산한 카탈라제 효소는 $60^{\circ}C$ 이상의 온도에서도 약 50% 가량의 활성을 유지, pH 7.0 이상의 알칼리 조건에서 pH가 증가함에 따라 활성이 증가하다 감소하는 경향을 보여 pH 13.0의 강한 염기 조건에서 약 20% 가량의 활성을 나타내는 것을 확인하였다. $4^{\circ}C$에서의 장기 저장 안정성 실험에서는 Bacillus flexus BKBChE-3이 생산한 카탈라제를 제외한 나머지 두 가지 미생물이 생산한 카탈라제 활성 실험의 경우 20일이 지난 후에도 40% 이상의 활성이 유지되는 것을 조사하였다. 상기 결과는 세 가지 미생물이 생산한 카탈라제가 생산량의 측면에서 Costa 등 [21]이 바실러스로부터 얻은 카탈라제 활성의 결과와 비교하여 높은 카탈라제 활성을 보일 뿐만 아니라, Yang 등 [9]이 곰팡이로부터 얻은 카탈라제의 pH 실험 결과와 비교하여 보다 높은 알칼리 조건에서도 안정하여 그 활성이 우수함을 확인하였다. 이들 결과를 근거로 고온의 호알칼리 과산화수소 제거 공정에서 분리한 미생물 사용이 가능할 것으로 기대된다.
Phytophthora capsici는 고추에 역병을 일으켜 우리나라뿐만 아니라 전 세계적으로 심각한 피해를 주는 대표적인 식물병원균이다. 최근 환경문제로 화학 농약을 대체하여 유용미생물을 이용한 생물학적 방제가 가장 바람직한 방제 방법으로 대두되고 있다. 본 연구에서는 고추역병에 피해를 보이지 않는 건전한 고추재배지 근권에서 토양시료를 채취하여 토양근권세균을 분리하였다. 총 360여점의 미생물 콜로니를 분리하였으며, 이들 콜로니의 색깔과 모양 등의 형태학적 특징을 기준으로 총 12개의 그룹으로 재분류하였다. 그 중 항균작용을 알아보기 위해 실시한 in vitro 실험에서 고추역병균에 길항효과를 보인 GJ-1, GJ-11, GJ-12 균주를 분리하였으며 길항효과가 없는 균주 2개(GJ-4, GJ-5)를 대조군으로 선발하였다. 선발된 5균주에 대하여 sidero-phore의 활성을 검정한 결과 GJ-1과 GJ-5 두 균주가 CAS 배지에서 orange halo zone을 크게 형성하여 siderophore를 많이 분비하는 균주로 확인되었다. 그리고 토양중의 난용성 인산염을 가용화시켜 식물의 생장촉진효과를 보이는 phosphate solubilization 활성을 검정한 결과 GJ-1, GJ-5, GJ-12 균주가 난용성 인산염에 대한 분해능력을 나타내었다. 따라서 P. capsici에 강한 항균활성을 나타내며 siderophore를 생산하고 인산가용화 능력이 뛰어난 유용미생물 GJ-1을 최종적으로 선발하였다. 최종 선발된 GJ-1균주를 동정하여 Bacillus sp.로 명명하였다. Bacillus sp. GJ-1의 길항작용은 Rhizoctonia solani, Pythium ultimum, Fusarium solani에 대한 식물병원성 진균에서도 좋은 효과를 나타내었다. 따라서 Bacillus sp. GJ-1은 생물학적 방제제로 고추역병균을 포함하여 다른 토양 식물병원성 진균 방제에 이용 가치가 있을 것으로 판단된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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