• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권2호
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• pp.126-130
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• 1988

토양에서 분리한 알카리 내성 Bacillus sp. YA-14 의 promoter를 Bacillus promoter probe vector인 pPL703을 이용하여 Bacillus subtilis내에 cloning 하였다. 얻어진 형질전환체 중 promoter 활성이 가장 높은 균주의 CAT 비활성은 8.07로 expression vector인 pPL708의 CAT 비활성보다 2.5배 이상 높았으며 대수 증식기가 끝난 이후에 그 활성이 급격하게 증가하였다. 재조합 plasmid내의 삽입 DNA 단편은 그 크기가 2.8kb이고 제한효소 BamHI, Sal I 인식부위가 각각 한군데 존재하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제18권4호
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• pp.429-432
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• 1990

알카리 내성 Bacillus sp. YA-14의 chromosomal DNA로 부터 유래된 promoter를 subcloning하여 그 생화학적 특성과 포자형성과의 관계를 조사하였다. 알카리내성 Bacillus sp.와 B.subtilis에서 promoter의 활성은 포자가 형성되기 시작하는 단계에서 증가하기 시작했다. 또한 배지내 glucose가 1.0(w/v) 첨가시 promoter 활성이 억제되었다. 5가지의 spoO 유전자 중에서 3가지 유전자 (spoOB, spoOH, spoOJ) 산물이 promoter 활성에 필요하다.

• 미생물학회지
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• 제50권4호
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• pp.381-383
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• 2014

미생물 기원의 ${\alpha}$-glucosidase 저해제를 탐색하는 과정에서 토양에서 분리한 균주인 Bacillus sp. SKU31-1 배양액에서 강력한 저해제 compound K을 일련의 크로마토그래피 방법에 의해 분리 정제하였고 $^1H$ NMR, $^{13}C$ NMR, $^1H-^1H$ COSY spectra 분석과 문헌조사를 통해 5-amino-1-hydroxymethyl-1,2,3,4-cyclohexanetetrol로 동정되었다. Compound K의 ${\alpha}$-glucosidase 저해 활성은 $IC_{50}$값이 maltose 기질에서는 $1.9{\mu}M$이고, sucrose 기질 사용시 4.9 mM이었다. Lineweaver Burk plot에 의해 $K_i$값이 0.15 mM 로 강력한 경쟁적 저해제 임이 밝혀졌다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제1권4호
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• pp.251-255
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• 1991

A 16 kilobase (kb) HindIII fragment of alkalophilic Bacillus sp. YC-335 containing a gene for xylanase synthesis was inserted at the HindIII site of pBR322 and cloned in Escherichia coli HB101. After subcloning of recombinant plasmid pYS52, the 1.5 kb fragment was found to code for xylanase activity, and the hybrid plasmid was named pYS55. The DNA insert of the plasmid was subjected to restriction enzyme mapping, which showed that pYS55 had single site for PuvII and SstI in the 1.5 kb insert fragment. Southern hybridization analysis revealed that the cloned gene was hybridized with chromosomal DNA from alkalophilic Bacillus sp. YC-335. About 64% of the enzyme activity was observed in the extracellular and periplasmic space of E. coli HB10l carrying pYS55.

• 한국식품과학회지
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• 제26권1호
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• pp.6-11
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• 1994

토양에서 분리한 Bacillus sp. I-5의 cyclodextrin glucanotransferase(CGTase)는 ${\beta}-$ 및 ${\gamma}-cyclodextrin(CD)$를 주로 생성하는 효소로서 최적 반응조건은 pH 8.0, $50^{\circ}C$에서 최적 반응이었다. 생성되는 CD의 조성비는 buffer 용액에 따라 영향을 받았으며 sodium acetate의 농도를 200mM로 하였을 때 ${\gamma}-CD$의 생성은 35% 가량 증가하였다. 기질인 가용성 전분의 DE value에 따라 CD의 생성이 달라져 $3.5{\sim}6.0$범위의 DE value의 전분을 기질로 사용하였을 때 CD이 가장 많이 생성되었다. CD을 연속적으로 생산하기 위하여 CGTase를 가역적으로 용해-침전되는 담체인 hydroxypropyl methylcellulose acetate succinate에 고정화하였고 고정화된 CGTase는 pH 7.5에서 물에 용해되고 pH 6.0에서 쉽게 침전되는 특성을 나타내었다. CD의 연속적 생산은 고정화된 CGTase에 의한 CD의 생산, 반응하지 않은 기질을 glucose로 분해, glucose를 알코올로 발효시키는 단계로 하는 효소반응기를 개발하여 최종적으로 CD 혼합액과 에탄올이 생성되도록 하였다. 10%의 가용성 전분으로부터 생산된 전체 CD의 양은 3.65g이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.436-439
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• 1989

고온, 호알칼리성 Bacillus속 K-17 균주에서 $\beta$-xylosidase 유전자를 pBR322를 벡터로 이용하여 클로닝시켰다. p-Nitrophenyl-$\beta$-xylopyranoside를 함유하는 LB 한천배지에서 노란색을 형성하는 대장균 형질전환주에서 재조합 플라스미드 pAX278을 분리하였으며, 본 pAX278은 pBR322와 고온, 호알칼리성 Bacillus K-17 균주 염색체 DNA의 5.0 kb HindIII절편으로 구성되어 있었다. Biotin으로 로식된 pAX278을 probe로 하여 상동성 시험을 하여 본 결과, pAX278에 존재하는 5.0 kb HindIII 절편은 Bacillus K-17 균주의 염색체 DNA HindIII 절편 중에서 5.0 kb 분만 아니라 0.9 kb 절편과도 상동성이 있었다. pAX278의 5.0 kb 절편을 pGR71에 연결시켜 B. subtilis에서도 발현시켰다. pAX278을 가지는 E. coli 균주가 생성하는 $\beta$-xylosidase는 균체외에 존재하였으며 그 효소학적 성질은 Bacillus속 K-17의 $\beta$-xylosidase와 동일하였다.

• 환경생물
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• 제28권2호
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• pp.95-100
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• 2010

우리나라 토양으로부터 분리된 (주와 김 2009) poly (butylene succinate-co-butylene adipate; PBSA) 분해균 Burkholderia cepacia PBSA-7, Bacillus licheniformis PBSA-8 및 Burkholderia sp. PBSA-9에서 PBSA 분해효소를 암호화하는 유전자를 분석하였다. PCR을 수행하여 B.cepacia PBSA-7과 Burkholderia sp. PBSA-9는 약 1.5 Kb, B. licheniformis PBSA-8은 약 600 bp의 lipase 유전자(lip A) 절편을 가지는 것을 확인하였다. 세 균주 모두에서 유전자의 염기서열 내 lipase box인 Gly-X1-Ser-X2-Gly와 Ala-X1-Ser-X2-Gly가 존재하였다. B. cepacia PBSA-7의 PBSA 분해효소 유전자는 family I-1 lipases와 36~40%, family I-2 lipases와는 82~92%의 높은 유전적 상동성을 보였다. 또한 B. licheniformis PBSA-8의 PBSA 분해효소 유전자는 subfamily 1-4 lipases와 64~65%의 유전적 상동성을 나타내었으나, subfamily 1-5에 속하는 lipase들과는 거의 유전적 상동성이 없는 것으로 나타났다. Burkholderia sp. PBSA-9의 PBSA 분해효소 유전자도 family I-1 lipases와 35~37%, family I-2 lipases와는 83~94%로 높은 유전적 상동성을 보여 B. cepacia PBSA-7의 PBSA 분해효소 유전자와 유사한 결과를 보였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제15권3호
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• pp.537-543
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• 2005

Subtilisin (EC 3.4.21.14) is the major extracellular alkaline serine protease of Bacillus species. Previously, we found that subtilisins did not migrate in the electrophoretic field in the Laemmili buffer system due to their high pI values (over 8.8); however, it formed a 'binding mode' at the top of the separating gel [5]. Utilizing this characteristic, four subtilisins from Bacillus sp. strains (e.g., B. subtilis 168, B. subtilis KCTC 1021, B. amyloliquefaciens KCTC 3002, and Bacillus sp. DJ-1 and DJ-4) were easily and quickly identified by an over-running electrophoretic technique with a miniscale culture supernatant (less than 20 ml) without any column chromatographic steps. Two subtilisins (DJ-l and a recombinant version) from Bacillus sp. DJ-l were characterized, and the enzymatic properties were determined by SDS-fibrin zymography and densitometric analysis. Based on this observation, the recombinant pro-subtilisin DJ-l showed the same 'binding mode,' similar to native subtilisin DJ-l. On the other hand, mature subtilisin DJ -1 without pro-peptide showed no enzymatic activity.

• 한국식품영양학회지
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• 제1권2호
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• pp.68-75
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• 1988

A strain of alkalophilic Bacillus sp. YS-309 has been isolated from domestic soil. It belongs to genus Bacillus from its morphological and biochemical characteristics. The strain grows better in the alkaline media rather than in the neutral media. The optimum pH and temperature for growth were observed at 8.5 and 4$0^{\circ}C$, respectively. Glucose, lactose and maltose were appeared as good carbon source but soluble starch and fructose were utilized uneffectively for growth. Concentrations of lactose had affected both the cellular growth and the enzyme productions. The maximum growth and the highest enzyme productions were obtained at 0.5%(w/e) of lactose added in the media. B-Galactosidase from Bacillus sp. YS-309 was produced inducibly into the cell and total enzyme activities per ml were gradually decreased when the concentration of glucose increased.

• 한국식품과학회지
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• 제23권1호
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• pp.31-36
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• 1991

고온, 알칼리성 Bacillus sp. F204의 CMCase 유전자를 pUC19의 HindIII부위에 연결하여 전이된 E.coli 형질전환체 중 2개의 재조합 플라스미드 즉, pBC191과 pBC192를 선발하였는데, 이들은4.6 Kb와 5.8 Kb HindIII 절편을 각각 함유하고 있었다. pBC191의 4.6 Kb HindIII 절편을 BamHI, EcoRI, KpnI, PvuII 부위가 각각 1개씩 존재하였다. Dioxigenin-labeled deoxyuridin-triphosphate에 4.6 Kb 절편을 표식한 것을 probe로 하여 상동성을 검정한 결과 모균주와 강한상동성이 없었고, 면역학적 실험에서도 Bacillus sp. F204 유래임이 인정되었다. pBC191의 4.6 Kb 절편을 E.coli의 발현 벡타인 pKK223-3과 Bacillus vector인 pGR71에 연결시켜 구축한 pKC231과 pGC711은 각각 pBC191에 비하여 효소활성이 3.2배와 2.8배정도 증가되었으며, 그리고 E.coli에서는 대부분 세포내와 periplasmic 분획에서 검출되었다. 기질 특이성을 조사한 결과에 의하면 pBC191과 pBC192는 CMCase gene을 코딩하고 있는 것으로 나타났다.