사람과 동물 유래의 혈장, 세포, 조직 등을 이용하여 생물의약품을 생산하기 위해서는 바이러스 안전성 확보가 필수적이다. 바이러스 안전성 보증을 위해 생물의약품 제조공정은 바이러스 불활화/제거 단계를 포함하여야 한다. 짧은 파장자외선(UVC) 조사는 바이러스 불활화 효과가 매우 높은 것으로 알려졌지만, UVC 조사로 인한 단백질의 변성과 대상 물질에 동일하게 조사를 할 수 있는 기계적 장치 개발의 어려움으로 인해 UVC 조사는 생물의약품 제조 공정에 사용되지 못했다. 최근에 이러한 결점을 해결한 연속 유동 UVC 반응기(UVivatec)가 개발되었다. UVivatec의 바이러스 불활화 효과 및 단백질 회수율을 검증하기 위해 단백질 의약품을 대상으로 적용가능성을 조사하였다. 최적화된 $3,000\;J/m^2$ 조사 공정에서 단백질의 회수율은 98%이상이었다. UVC 조사에 의한 human immunodeficiency virus(HIV), hepatitis A virus(HAV), bovine herpes virus(BHV), bovine viral diarrhea virus(BVDV), porcine parvovirus(PPV), bovine parvovirus(BPV), minute virus of mice(MVM), reovirus type 3(REO), bovine parainfluenza virus type 3(BPIV) 불활화 효과를 평가하였다. HAV, PPV, BPV, MVM, REO와 같은 비외피(nonenvelope) 바이러스는 $3,000\;J/m^2$ 조사량에 의해 검출한계 이하로 완벽하게 불활화되었다. HIV, BVDV, BPIV 같은 외피(envelope) 바이러스도 $3,000\;J/m^2$ 조사량에 의해 검출한계 이하로 완벽하게 불활화되었다. 또한 BHV도 매우 민감하게 불활화되었다. UVC 조사에 의한 각 바이러스들의 로그 감소율은 HIV는 ${\geq}3.89$, HAV는 ${\geq}5.27$, BHV는 5.29, BVDV는 ${\geq}5.96$, PPV는 ${\geq}4.37$, BPV는 ${\geq}3.55$, MVM은 ${\geq}3.51$, REO는 ${\geq}4.20$, BPIV는 ${\geq}4.15$이었다. 이와 같은 결과에서 UVivatec을 이용한 UVC 조사는 바이러스 불활화에 매우 효과적인 방법임을 확인하였다.
The purpose of this study was to survey on infection status of pathogens of diarrhea from Korean indigenous goat. A total of 800 fecal samples was collected from 50 farms from January to October 2015 and was tested by automatic biochemical machine and polymerase chain reaction (PCR). The overall detection ratio of bacterial pathogens was 22.4% and viral pathogens was 16.3%, respectively. The detection ratio of Escherichia coli (E. coli), Salmonella spp., bovine viral diarrhea virus (BVDV), rotavirus and coronavirus were 21.5%, 0.9%, 7.6%, 5.6% and 3.0%, respectively. In the rates of mixed detection, single was 78.2%, double 8.4%, triple 11.6% and quadruple 1.8% in each sample and 38%, 12%, 16%, 20% in each farm, respectively.
Kim, In-Seop;Eo, Ho-Gueon;Chang, Chon-Geun;Lee, Soung-Min
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제10권6호
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pp.858-864
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2000
The purpose of the present study was to examine the efficacy and mechanism of the fraction IV cold ethanol fractionation and pasteurization ($60^{\circ}C$ heat treatment for 10h) steps, involved in the manufacture of albumin from human plasma, in the removal and/or inactivation of blood-born viruses. A variety of experimental model viruses for human pathogenic viruses, including the Bovine viral diarrhoea virus (BVDV), Bovine herpes virus (BHV), Murine encephalomyocarditis virus (EMCV), and Porcine parvovirus (PPV), were selected for this study. Samples from the relevant stages of the production process were spiked with the viruses, and the amount of virus in each fraction was then quantified using a 50% tissue culture infectious dose ($TCID_{50}$). The mechanism of reduction for the enveloped viruses (BHV and BVDV) during fraction IV fractionation was inactivation rather than partitioning, however, it was partitioning in the case of the non-enveloped viruses (EMCV and PPV). The log reduction factors achieved during fraction IV fractionation were ${\geq}6.9$ BHV, $\geq5.2$ for BBDV, 4.9 for EMC, and 4.0 for PPV. Pasteurization was found to be a robust and effective step in inactivating the enveloped viruses as well as EMCV. The log reduction factors achieved during pasteurization were $\geq7.0$ for BHV, $\geq6.1$ for BVDV, $\geq6.3$ for EMCV, and 1.7 for PPV. These results indicate that the production process for albumin has sufficient virus-reducing capacity to achieve a high margin for virus safety.
Detection and distribution of bovine viral diarrhea virus(BVDV) was studied in formalin-fixed, paraffin-embedded tissues from two naturally infected cattle by in situ hybridization with a non-radioactive biotinylated probe. A 600 base pair cDNA probe from BVDV B-25 strain was used for probe. The whole procedure of ISH to diagnose was carried out within 1~2 hours in $Microprobe^{TM}$ capillary action system. The biotin-labelled probe was demonstrated after hybridization under standard conditions by the application of streptoavidin and biotinylated alkaline phosphatase. Alkaline phosphatase was visualized using a fast red TR/naphthol phosphatase and the sections were counterstained with hematoxylin. We have obtained the result of positive reactions in digestive tract(sm1.all intestine and colon) and epidermis of tongue in the state of the intact tissues. The result suggested that in situ hybridization method can be considered as a useful diagnostic technique for detection of specific nucleic acid sequences of BVDV.
송아지 설사병은 국내 축산산업에 큰 피해를 주는 중요한 질병이다. 다양한 감염성 원인체들이 송아지 설사병에 관련될 수가 있기 때문에 효과적인 치료를 위해서는 신속한 감별진단이 필수적이다. 따라서 소설사병 바이러스(BVDV), 소 코로나바이러스(BCoV), A형 소 로타바이러스(BRV), 살모넬라, $K99^+$ 대장균, Cryptosporidium parvum등의 6개의 주요 병원체들을 동시에 검출하는 두 개의 multiplex real-time PCR으로 구성된 PCR 패널을 개발하여 국내 농가에서 전북대학교 동물질병진단센터로 접수된 97개의 설사 분변을 검사하였다. 또한 현미경 검사법을 이용하여 97개의 분변에서 Coccidium 충란을 검사하였다. 개발된 multiplex PCR의 민감도는 BVDV, BCoV와 BRV의 경우는 0.1 $TCID_{50}$, $K99^+$ 대장균은 5 CFU, Salmonella는 0.5 CFU, Cryptosporidium는 50 oocysts로 측정되었다. 또한 multiplex PCR의 증폭효율은 병원체에 따라0.97에서 0.99였다. 국내에서 접수된97개의 분변 중 36개의 분변은 multiplex PCR에 의해 최소 하나의 병원체에 대해 양성으로 판정되었고, 6개의 샘플은 2개의 병원체에 동시에 양성반응을 보였다. 또한 1달 이상 연령의 송아지 분변48개에서는 Coccidium 충란이 발견되었다. 결과적으로, 새로이 개발된 multiplex real-time PCR은 BVDV, BCoV, BRV, $K99^+$ 대장균, Salmonella와 Cryptosporidium과 관련된 송아지 설사병을 신속하고 정확하게 진단할 수 있는 유용한 검사법이 될 수 있을 것으로 기대되며 향후 Coccidium까지 검출할 수 있는 동시 진단법이 개발될 필요가 있을 것으로 생각된다.
Molecular cloning and nucleotide sequencing were undertaken for the RNA genome of gp53 antigenic region in cytopathic Singer strain of bovine viral diarrhea virus. The cloned cDNA was 939 nucleotides in length having a base composition of 31.0% A, 19.6% C, 25.5% G and 24.0% T. The sequence was corresponded to approximately 77.8%(817 bases) of predicted gp53 region and 122 bases after 3'end of gp53 region in the Singer strain when compared with NADL strain of known sequence. A single open reading frame was found in the sequence of 2nd frame and was deduced as encoding 312 amino acids.
Park, Suk-jun;Cho, Ho-seong;A.W.E. Effendy;Kim, Yong-hwan;Park, Nam-yong
한국수의병리학회:학술대회논문집
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한국수의병리학회 2003년도 추계학술대회초록집
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pp.34-34
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2003
Classical swine fever (CSF) is a contagious disease of swine with serious economic losses in pig industry [1]. The disease is caused by CSFV which belongs to the viruses of bovine viral diarrhea (BVDV) and border disease virus (BDV) make up the Pestivirus genus within the family Flaviviridae [2]. Attenuated Korean LOM strains were used in Korea. For these reasons a practical approach for discrimination between vaccine and field strains is needed. Here, we described the deveopment of real-time RT-PCR to discriminate between vaccine strains and Korean field viruses of CSFV. (omitted)
Monoclonal antibodies(MAbs) against field isolates of the bovine rotavirus A strain(G6), V strain(G10) and reference I-801 strain(G8) were produced and characterized. Six MAbs(4C2, 4D9, 5E1, 5E7, 5D5, 3E4) against A strain had neutralizing activity and reacted only with the G6 bovine rotaviruses determined by fluorescence focus neutralization (FFN) test. Otherwise, five neutralizing MAbs(1G2, 2G6, 5E2, 5E12, 5H7) against I-801 strain neutralized the G6 and G8 bovine rotaviruses. Five non-neutralizing MAbs(5F12, 7F12, 5E11, 2A11, 2B12) were VP6-specific and cross-reacted with all bovine and porcine rotaviruses examined by fluorescence antibody(FA) test. None of the MAbs reacted with bovie viral diarrhea virus(BVDV) and bovine coronavirus(BCV) determined by FA and FFN test.
The bovine serum factor influencing the growth of swine testicle (ST) cell and the END effect of hog cholera SN test was studied. Throughout the experimental studies. following results were obtained and summarized. 1. Bovine whole serum of 16(76.2%) and 4(19.0%) samples out of 21 have shown a positive ST cell growth and the END effect, respectively. However, all of 21(100%) and 8(38.1%) samples out of 21 serum supernatant fractions, prepared from the bovine whole serum, have shown positive ST cell growth and END effect, respectively. 2. In the SDS-polyacrylamide gel electrophoretic analysis of the bovine whole serum and the supernatant fractions, ST cell growth inhibiting factor was proved present in globulin fraction and in whole gel plate as a diffusible component. 3. The END ineffective component present in the whole serum and its supernatant fraction was proved to be BVDV neutralizing antibody. 4. The difference of osmolarity, optical density, pH, degree of precipitant formation following heat cold treatment, A/G ratio as we11 as electrophoretic pattern and NDV SN index of the samples were not correlated to the degree of 57 cell growth and to the END effectiveness.
본 연구는 한우 송아지 생산효율 향상을 위한 농가 번식 실태를 조사하였다. 한우 사육 규모별, 지역별로 나누어 45개 농가의 가임암소를 대상으로 조사를 실시하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 한우의 최초 분만월령은 평균 28.7개월령이었다. 수태당 인공수정 횟수는 $1.45{\pm}0.32$회였으며, 분만 후 인공수정 일수는 119.8일이었다. 수태율은 소규모 농가가 $75.2{\pm}16.93%$로 중규모($70.6{\pm}17.46%$) 및 대규모 농가($71.4{\pm}11.03%$)보다 높은 것으로 나타났다. 번식률 상위 농가의 사육 방식을 보면, '발정관찰 보조기구를 사용하는 농가'가 '그렇지 않은 농가'보다 송아지 생산율이 10.42% 높았다. 번식소에 대해 IBR과 BVDV 예방접종을 실시한 농가는 유사산 폐사율이 4.41% 감소한 것으로 나타났다. 또한 농가여건에 따라 방목과 운동을 한 경우, 수태율과 분만율이 각각 3.47%, 18.29% 향상되는 것으로 나타났다. 본 조사 결과를 통해 발정관찰, 예방접종, 방목이 한우농가에서 송아지 생산 효율을 높이는데 중요한 지표로 나타났다. 한우 사육 농가의 번식실태 조사를 통해 농가 현장의 번식률 향상을 위한 연구 자료로 활용이 가능할 것이다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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