이 연구는 환자로부터 분리하여 무균 배양된 10개의 질트리코모나스 분리주에 대하여 병원성 여부를 판정하고 단백분해효소 관련 여부를 알아보고자 시도된 것이다. 질트리코모나스 분리주들은 마우스 피내 접종 실험을 통한 병원성 판정에서 약병원성 주, 중등도 병원성 주 및 강 병원성 주 등 3개 그룹으로 나눌 수 있었으며 중성 단백분해효소 및 산성 단백분해효소 활성도는 질트리코모나스 추출물 및 그 배양액에서 약 병원성 주에 비해 강 병원성 주의 활성도가 높게 나타나 피하농양 크기에 따른 병원성과 상기 단백분해효소의 비활성도(specific activi쇼) 사이에 상관관계가 있었음을 알 수 있었다(p < 0.05) 질트리코모나스 단백분해효소는 gelatin을 기질로 하는 SDS-PAGE 전기영동에서 RF치를 달리하는 5가지 분획대가 나타났으며 그 분획양상은 각 분리주 의 병원성에 따라 일정한 양상을 나타내었다. 그리고 여러가지 단백분해효소 억제제를 전기 영동 효소액에 처리했을 경우 antlpaln과 leupeptin 처리군에서는 분획이 전혀 나타나지 않았으며 EUTA 처리군에서는 대조군에 비해 그 활성이 약화된 분획이 관찰되었고, PMSF 처리군에서의 분획들은 대조군과 그 활성의 차이를 볼 수 없어 이들 단백 분해효소는 cystelne 단백분해효소로 추정되었다. 조직 세포에 대한 질트리코모나스 추출물의 세포독성은 병원성에 따라 차이가 있었고 추출물의 단백질 농도 $12.0{\;}\mu\textrm{g}/100{\mu}\ell$ 이상에서 세포 독성에 따른 병원성 구분이 용이하였다. 그리고 질트리코모나스 추출물에 단백분해효소 억제제를 처리한 결과 대조군에 비하여 세포 독성이 낮게 나타났으며, 특히 antipain 처리군에서는 조직 세포에 대한 세포 독성이 현저하게 낮았다. 이상의 결과로 보아 cysteine계로 추정되는 질트리코모나스의 단백분해효소는 특이한 전기영동 활성 분획상을 나타내었는 바 이들은 모두 충체의 병원성 및 세포 독성과 밀접한 관련이 있었다.
한국산 겨우살이를 이용한 암예방 기능성 식품의 개발을 위한 기초연구로써, 한국산 겨우살이가 Balb 3T3 cell line으로부터 얻어진 비종양성 A3l 세포와 종양성 MSV 세포에 미치는 세포독성 효과를 조사하였다. 겨우살이 생즙은 $ID_{50}$ 치가 $3.94\;{\mu}g/mL$로 강한 세포독성을 나타낸 반면, 열처리즙은 $30\;{\mu}g/mL$까지 세포독성을 나타내지 않았다. 한편, 낮은 농도의 열처리즙은 비종양성 A3l 세포의 증식을 촉진시키면서 종양성 MSV 세포의 증식을 억제시키는 효과를 나타내었다. 또한 galactose, lactose, glucose, mannose, fructose, sucrose 및 starch 등과 같은 탄수화물이 겨우살이의 세포독성에 미치는 영향을 조사한 결과, 생즙과 탄수화물의 처리는 큰 변화를 주지 못하였으나, 열처리즙과 lactose, galactose, glucose 및 fructose등과 같은 당을 함께 처리하였을 때 A3l 세포의 증식촉진, MSV 세포의 증식억제효과는 더욱 증가됨을 알 수 있었다. 이러한 결과에서 알 수 있듯이, 한국산 겨우살이가 당의 첨가나 첨가 없이 가열처리공정에 의해서 암 예방 기능성 식품의 재료로써 이용될 수 있음을 암시해준다. 그리고 발효에 의한 한국산 겨우살이의 세포독성 변화를 조사하기 위하여, 겨우살이 생즙과 열처리즙을 각각 Lactobacillus plantarum을 접종하여 발효시켰다. 생즙발효가 1, 3, 5, 7일간 진행되는 동안 종양성 MSV 세포의 세포독성에는 변화가 없었으나 비종양성 A3l 세포에서는 점차적인 증식촉진효과를 나타내었다. 그러나 열처리즙 발효의 경우에는 발효초기에 열처리즙 고유의 A3l 세포 증식촉진효과가 발효가 진행됨에 따라 그 효과가 점차 감소됨을 나타내었다.
Background and Objective : Allergic rhinitis is a IgE-mediated hypersensitive reaction at nasal mucosa. In oriental medicine, Bangpungtongsung-San is clinically widely used for the treatment of the allergic rhinitis. The objective of this study is to investigate the effects of Bangpungtongsung-San on allergic rhinitis experimentally. Material and Methods : BALB/c mouse were divided into there groups: intact, control, experimental groups. Control and experimental group were induced allergic rhinitis by Ovalbumin as· the method of Levin and Vaz. Experimental group was orally administered the Bangpungtongsung-San for 28days. Total IgE, Interleukin-4, Interleukin-5 and $Interferon-{\gamma}$ were measured at three groups. The statistical significance was examined by Independent Samples T test. Results : 1. The experimental group shows increase of $IFN-{\gamma}$ by 17% compared with control group but there was no statistical significance. 2. The experimental group shows increase of IL-4 and IL-5 compared with control group but there was no statistical significance. 3. The experimental group shows increase of Total IgE and diminution of OVA-specific IgE by 32% compared with control group but there was no statistical significance. Conclusion : The effect of Bangpungtongsung-San on allergic rhinitis is not immunological but seems to be anti-imflammatory and anti-stress effect.
The object of this study was to observe anticancer and related immunomodulatory and anticachexic effects of Insamyangyoung-tang aqueous extracts (ISYYTe) on non-small cell lung carcinoma (squamous epithelial carcinoma), NCI-H520, xenograft Balb/c nu-nu nude mice. Changes on the tumor volume and weights, lymphatic organ(spleen and popliteal lymph node), serum interferon (IFN)-${\gamma}$ levels, splenocytes and peritoneal macrophage activities (NK cell activity), splenic tumor necrosis factor (TNF)-${\alpha}$, interleukin (IL)-$1{\beta}$ and IL-10 contents, splenic T-lymphocyte subsets (CD3+, CD4+ and CD8+) and TNF-${\alpha}+$ cells were observed with tumor mass and lymphatic organ histopathology to detect anticancer and immunomodulatory effects. In addition, changes on the body weights, epididymal fat weights and serum IL-6 levels were also detected with the thicknesses of deposited cervical brown adipose tissue and their mean diameters to monitor the tumor-related anticachexic effects. The results obtained in this study suggest that over 50 mg/kg of ISYYTe showed favorable anticancer effects on the NCI-H520 cell xenograft with immunomodulatory and anticachexic effects. However, detail mechanism studies should be conducted in future with the screening of the biological active compounds in this herb.
The HIV-1 p24(202-221) sequence ETINNEEEWDRVHPV HAGP contains a B-cell epitope with the earliest immune response and the highest antibody titer against anti-mouse sera obtained by immunization with p24 antigens. A novel mouse monoclonal antibody (mAb) was generated against the immunodominant B-cell epitope of the HIV-1 p24 capsid protein, p24(202-221). BALB/c mice were immunized with the four branched multiple antigenic peptide (MAP) containing the HIV-1p24(202-221) sequence, and antibody-secreting hybridoma were produced by fusion of mouse splenocytes with P3X63Ag8.653, mouse myeloma cells. One clone which produced the antigen-specific mAb named KI-24 (Isotype IgG1, light chain: ${\kappa}$) was identified. mAb KI-24 was highly specific for both the p24(202-221) and p24 proteins when analyzed by ELISA and Western blotting. Since p24(202-221) also contains a cytotoxic T-lymphocyte epitope, this specfic peptide epitope and the monoclonal antibody with specific reactivity against the p24 protein and p24(202-221) can be used in peptide vaccine development and p24 antigen detection from HIV patients.
In order to evaluate the protective effect of Kamicheungkantang(KCKT) on hepatic damage induced by $CCl_4$, the study was done. The blood chemistry and histological study were done following oral administration with materials. The results were obtained as follows. 1. KCKT extracts didn't show cytotoxicity against BALB/C mouse lung fibroblast cell. 2. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum alanine aminotransferase(ALT) was significantly decreased in KCKT treated group as compared with control group. 3. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum aspartate aminotransferase (AST) was significantly decreased in KCKT treated group as compared with control group. 4. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum alkaline phosphatase(ALP) was significantly decreased in KCKT treated group as compared with control group. 5. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum lactate dehydrogenase(LDH> was insignificantly decreased in KCKT but insignificantly as compared with control group. 6. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum cholestorol was significantly decreased in KCKT treated group as compared with control group. 7. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum triglyceride was insignificantly decreased in KCKT treated groups as compared with data of control. 8. In the hepatotoxicity with $CCl_4$, serum total bilirubin, direct bilirubin, ${\gamma}$-GTP were not changed in KCKT treated groups as compared with data of control. 9. In histopathological changes, fatty changes, vacuole, nucleotic changes and fibrosis were observed in control group and degree of changes was increased over time. Whereas no differences were observed in KCKT treated group These results suggested that KCKT extracts might be usefully applied for treatment of hapatic disease and also it was necessary to do more studies about its mechanisms.
Objectives : Asthma is a chronic inflammatory disorder of the airways by many cells such as mast cells, Th2 lymphocytes and eosinophile. The present study was aimed to evaluate the effects of Salviae miltiorrhizae (SM) on T cell cytokine production, mast cells. and eosinophils, Methods : We screened 13 herbs to find compounds with potential to control Th cytokine production. using concanavalin A (con A)-activated splenocyte cultures. Con A-activated $IFN-\gamma$ and IL-4 levels in supernatants of splenocyte cultures. Bone marrow derived mast cells (BMMC) were incubated with SM and then the expressions of membrane proteins of BMMC were analyzed by fluorescence activated cell sorter (FACS). BALB/c mice sensitized to ovalbumin (OVA) were challenged with aerosolized OVA for 6 weeks. During the last weeks some mice were treated with SM. Then eosinophils in bronchoalveolar lavage fluid (BALf) were counted and pathologic changes of lung tissue were observed with hematoxylin-eosin stain. Results : SM increased $IFN-\gamma$ level on splenocyte culture significantly. but had no significant effects on expressions of ICAM-1, CD62L, integrin $a_4$. c-kit, IL-3 receptors. CD11a, or IgE receptors of BMMC. SM treatment significantly inhibited eosinophil infiltrates in BALf and peribronchial lung inflammation. Conculusions : The present data suggested that SM may have an effect on Th cytokine secretion and eosinophils associated with asthma responses. Therefore SM might be of therapeutic value in treating asthma.
Background: Inactivated vaccines are limited in preventing foot-and-mouth disease (FMD) due to safety problems. Recombinant virus-like particles (VLPs) are an excellent candidate for a novel vaccine for preventing FMD, given that VLPs have similar immunogenicity as natural viruses and are replication- and infection-incompetent. Objectives: The 3C protease and P1 polyprotein of type O FMD virus (FDMV) was expressed in yeast Hansenula polymorpha to generate self-resembling VLPs, and the potential of recombinant VLPs as an FMD vaccine was evaluated. Methods: BALB/c mice were immunized with recombinant purified VLPs using CpG oligodeoxynucleotide and aluminum hydroxide gel as an adjuvant. Cytokines and lymphocytes from serum and spleen were analyzed by enzyme-linked immunosorbent assay, enzyme-linked immunospot assay, and flow cytometry. Results: The VLPs of FMD were purified successfully from yeast protein with a diameter of approximately 25 nm. The immunization of mice showed that animals produced high levels of FMDV antibodies and a higher level of antibodies for a longer time. In addition, higher levels of interferon-γ and CD4+ T cells were observed in mice immunized with VLPs. Conclusions: The expression of VLPs of FMD in H. polymorpha provides a novel strategy for the generation of the FMDV vaccine.
The water extract of Dohongsamul-Tang(DHSMT) has been traditionally used to stroke and brain injuries in Oriental Medicine. The present study was designed to investigate the effects of DHSMT on the gene expression profile of cerebral infarction by cDNA microarray in photothrombotic ischemia mouse model. Photothrombotic ischemia was induced in stereotactically held male BALB/c mice using rose bengal and cold light. MRI was performed 24 hours after inducing photothrombosis using 1.5 T MRI and 47 mm surface coil to obtain T2-weighted, and contrast-enhanced images. After MRI test, animal was sacrificed and the brain sections were stained for hematoxylin and eosin and immunohistochemistry. MRI and histological analysis revealed that lesion of thrombotic ischemia was well induced in the cortex with the evidence of biological courses of infarction. The target area of thrombotic infarction was 1 mm anterior to bregma and 3 mm lateral to midline with 2 mm in diameter, which were decreased by administration of DHSMT. To assess gene expression pattern of cerebral infarction, mRNA was isolated and reacted with microarray chip(Agilant's DNA Microarray 44K). Scatter and MA plot analysis were performed to clustering of each functional genes. M value [M=log2(R/G), A={log2(R ${\times}$ G)}/2] was between -0.5 and +0.5 with 40% difference. After pretreatment with DHSMT, the expression levels of mRNA of many genes involved in various signaling pathway such as apoptosis, cell cycle, cell proliferation, response to oxidative stress, immune response, angiogenesis, and inflammatory cytokine were markedly inhibited in photothrombotic ischemia lesion compared to the control group. These results suggest that DHSMT prevent ischemic death of brain on photothrombotic ischemia model of mice through modulation of gene expression at the transcriptional level.
본 연구에서는 전침자극이 면역계의 THl/TH2 분화평형에 미치는 영향과 opioid system 과의 관계를 알아보고자 DNP-KLH의 자극을 통해 IgE 매개 알러지 반응모델을 구축하고 족삼리(足三里).에 전침자극을 가한 후 TH1/TH2 분화평형 및 opioid receptor antagonist인 naloxone에 의 한 반전여부를 확인하기 위해 total IgE, antigen-specific IgE, IFN-${\gamma}$ 및 IL-4 mRNA 발현량을 측정하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. 전침자극은 DNP-KLH로 인해 과도하게 생산 된 혈청 total IgE 및 antigen-specific IgE를 감소시킴으로서 알러지 반응에 대한 유의한 억제능을 발휘하였으며, naloxone 투여로 전침 의 효과가 상쇠된 것으로 미루어 opioid system이 전침에 의한 항알러지 효과에 중요한 역할을 하는 것으로 추정된다. 2. 또한 전침자극은 DNP-KLH로 인한 TH2 cytokine의 편향상태에 대하여 TH1/TH2 평형조절능을 가진다는 것을 확인하였으며, naloxone으로 반전되지 않는 것으로 미루어 전침이 미치는 보조 T cell 분화에 대한 효과 는 opioid system에 의존하지 않는 것으로 추정된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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