본 연구에서는 동물유래 시료들로부터 양돈 사료첨가용 유산균을 개발하기 위하여 enterotoxigenic E. coli, Salmonella Typhimurium, Clostridium perfringens 등 양돈산업에서 심각한 문제를 일으키는 인수공통 병원성 세균들과 Clostridium jejuni, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus와 같은 식중독균을 강하게 저해하는 Bifidobacterium 유산균을 분리하고자 하였다. 이를 위하여 소의 반추위 내용물, 닭 창자 내용물, 돼지 분변 등의 시료들로부터 총 65주의 혐기성미생물을 분리하였다. 이 중에서 항병원세균활성이 가장 높은 4주를 선별하였는데, 이들은 16S rDNA 염기서열 분석방법에 의하여 3주의 B. boum과 1주의 B. thermophilum으로 동정되었다. 특히 B. thermophilum는 분리주들 중에서 가장 높은 돼지 장 상피세포에 대한 부착성을 보였고, 여러 인수공통병원세균들과 식중독균들에 대한 높은 항균력, 산과 담즙내성을 보여 양돈용 생균제 후보균주로서 우수한 특성을 나타내었다.
한국인 유아의 분변에서 분리한 10종의 분리균주를 포함하여 총 16종의 bifidobacteria에 대한 Caco-2 세포에 대한 부착성과 세포 표면 소수성을 측정하였다. 부착성과 세포 표면소수성 모두 균주에 따라 상이한 결과를 나타내었으며 균종에 따른 경향은 관찰되지 않았다. 실험 균주 중에서 B. longum D6, B. longum H4, B. breve Ml, B. thermophilum ATCC 25525, B. suis ATCC 27533, B. animalis subsp. lactis BB12 균주가 세포 표면 소수성이 높게 나타났으며, Caco-2 세포에 대한 부착성은 B. bifidum B3, B. longum D6, B. longum H4, B. thermophilum ATCC 25525, B. suis ATCC 27533, B. animalis subsp. lactis BB12, B. longum 2 등이 우수하였다. 또한 Caco-2세포에 200개 이상이 부착되는 실험 균주는 모두 60% 이상의 세포 표면 소수성을 나타내고 있으므로, 부착성이 우수한 균주 선발 시 분리 균주의 세포 표면 소수성을 측정하여 선발하는 것이 가능하다고 판단되었다.
쥐의 사육실험결과 장내 균총 개선에 유효한 것으로 나타난 사과에 대하여 in vitro 배양실험을 통하여 이들의 유효성을 검증하였다. 사과로부터 분리한 crude pulp (CP), total dietary fiber (TDF), soluble dietary fiber (SDF), insoluble dietary fiber (IDF)와 시약용 사과 펙틴을 구입하여 PYF 액체배지에 첨가한 후 주요 장내 미생물의 표준균주들을 단독배양하여 O.D.와 pH를 측정함으로써 그 이용성을 조사하였다. 또한 이들 배지에 흰쥐의 분변 혼탁액을 종균으로 접종하여 혼합배양한 후 주요 장내 미생물의 균총변화를 조사하였다. 대부분의 장내 세균들이 사과의 IDF 첨가구에서보다 SDF 첨가구에서 더 잘 생육하였으며 특히 Bifidobacterium adolescentis, B. animalis, B. infantis, B. longum, B. thermophilum 등 Bifidus균들은 SDF 첨가구에서 비교적 높은 이용성을 나타냈으나 시약용 펙틴을 첨가한 시험구에서는 실험에 사용된 대부분의 균들이 거의 생육하지 않았다. 그러나 흰쥐의 분변 미생물들을 혼합배양하였을 때 사과의 섬유질 특히 수용성 식이섬유질(SDF)과 펙틴질 첨가구에서 포도당 첨가구에 비하여 Bifidobacterium의 수가 다량 검출되었다.
The present study was undertaken to obtain the basic knowledge on the distribution of intestinal microflora and characterization of Bifidobacterium isolated from the intestine of cattle, pigs, chicken and dogs. Bacteroidaceae and Streptococcus were isolated from the feces of cattle as predominant organisms, and Bifidobacterium was in counts of $8.65{\pm}0.21$ log 10 organisms. Bacteroidaceae, Eubacterium and Peptococcaceae counts on the feces of pigs were particularly high, but Bifidobacterium did not isolated. In hens and dogs, the counts of Bifidobacterium were $7.60{\pm}0.71$ and $8.15{\pm}2.04$ log 10 organism, respectively. Isolated 7 Bifidobacterial strains were identified respectively to B. thermophilum from cattle, B. pullorum and B. animalis from pigs, and B. longum, B. adolescentis and B. pseudolongum from dogs by their carbohydrate fermentation ability.
Park, Jong-Hyun;Han, Nam-Soo;Yoo, Jin-Young;Kwon, Dong-Jin
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제3권4호
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pp.285-291
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1993
Growth responses of some intestinal bacteria such as bifidobacteria and Clostridium perfringens to the extracts of certain foodstuffs were investigated in vitro. Among edible mountain herbs, the extracts of several chui-na-muls (Aster tataricus, Ligularia fischeri and Aster scaber) had an inhibitory activity against C. perfringens on the agar plate and the water extract of Aster scaber worked selectively on it among intestinal bacteria. The water extract showed growth-promoting effect toward bifidobacteria such as B. adolescentis, B. animalis, B. bifidum, B. infantis and B. thermophilum in the broth culture. When the faecal inoculum was incubated in the culture with the extract, the population of C. perfringens decreased, whereas that of bifidobacteria increased by $10^3$ scale.$\beta$-glucuronidase activity in the culture with the water extract of Aster scaber digested with pepsin and pancreatin was lower than that in the control culture.
In this paper, a rapid and reliable gene-targeted species-specific polymerase chain reaction (PCR) technique based on a two-step process was established to identify bifidobacteria in dairy products. The first step was the PCR assay for genus Bifidobacterium with genus specific primers followed by the second step, which identified the species level with species-specific primer mixtures. Ten specific primer pairs, designed from nucleotide sequences of the 16-23S rRNA region, were developed for the Bifidobacterium species including B. angulatum, B. animalis, B. bifidum, B. breve, B. catenulatum, B. infantis, B. longum, B. minimum, B. subtile, and B. thermophilum. This technique was applied to the identification of Bifidobacterium species isolated from 6 probiotic products, and four different Bifidobacterium spp. (B. bifidum, B. longum, B. infantis, and B. breve) were identified. The findings indicated that the 16S-23S rDNA gene-targeted species-specific PCR technique is a simple and reliable method for identification of bifidobacteria in probiotic products. PCR combined with Denaturing Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) for identification of the bifidobacteria was also evaluated and compared with the gene-targeted species-specific technique. Results indicated that for fermented milk products consistency was found for both species-specific PCR and PCR-DGGE in detecting species. However, in some lyophilized products, the bands corresponding to these species were not visualized in the DGGE profile but the specific PCR gave a positive result.
Objectives : The purpose of this study was to investigate the changes in the contents of constituents in Samultang and its fermentations with 10 species of lactic acid bacteria. Methods : Ten strains of lactic acid bacteria, Lactobacillus casei, L. acidophilus, L. casei, L. plantarum, L. amylophilus, L. curvatus, L. delbruekil subsp. lactis, L. casei, B. breve, and B. thermophilum, were used for the fermentation of Samultang. The increased and decreased constituents were identified using HPLC/DAD and various liquid chromatographic techniques, and the structure was elucidated using NMR and MS. These compounds were quantitatively analyzed using an HPLC/DAD system. Results : A remarkably increased component was identified to be nodakenetin and a decreased component was determined to be nodakenin. The fermentation of the ten lactic acid bacteria demonstrated that the decomposable rate of these two compounds in fermented Samultang were different. Samultang fermented by L. plantarum showed the most remarkable changes. Conclusion : Nodakenetin was identified as bioconversion component after fermentation and L. plantarum was discovered the best bacteria to increase the component.
Objective : The purpose of this study was to investigate the changes in the contents of constituents in Socheongryong-tang (CY) and its fermentations (FCY) with 10 species of lactic acid bacteria. Methods : Ten strains of lactic acid bacteria, Lactobacillus casei 127, L. acidophilus 128, L. casei 129, L. plantarum 144, L. amylophilus 161, L. curvatus 166, L. delbruekil subsp. lactis 442, L. casei 693, B. breve 744, and B. thermophilum 748, were used for the fermentation of Socheongryong-tang. The increased and decreased constituents were identified using HPLC/DAD and various liquid chromatographic techniques, and the structure was elucidated using NMR and MS. These compounds were quantitatively analyzed using an HPLC/DAD system. Results : The increased constituents were identified to be liquiritigenin (1) and cinnamyl alcohol (2), and the decreased constituent was determined to be liquiritin (3). Liquiritigenin (1) and cinnamyl alcohol (2) were increased in all of the FCYs, while liquiritin (3) was decreased. The fermentation of the ten lactic acid bacteria demonstrated that the decomposable rate of these three compounds in FCYs were different. Socheongryong-tang fermented by L. plantarum 144 and L. amylophilus 161 showed the most remarkable changes. Conclusions : CY could be increased antibacterial, neuroprotective, or antiinflammatory effect by fermentation with lactic acid bacteria, especially with L. plantarum and L. amylophilus, considering their known biological activities. In addition, it is expected that this study will help to establish quality control parameters for FCY.
Xylanase를 생산하는 내열성 Bacillus pumilus TX703의 chromosomal DNA로부터 xylanase 유전자를 cloning하여 그 염기배열 순서를 결정한 다음 이로부터 유전자 발현에 관련된 구조를 분석하였다. Xylanase 유전자의 cloning을 위해 제한효소 HindIII로 절단한 B. pumilus TX703의 chromosomal DNA와 pUC19을 ligation시켜 E. coli DH5 $\alpha$에 형질전환시킨 후 형질전환체 중에서 xylanase 활성을 나타내는 재조합 plasmid pXES106을 분리하였다. 재조합 plasmid pXES106은 pUC19의 HindIII 부위 내에 2.24 kb의 외래 DNA가 삽입되었고, 이 plasmid DNA를 분리하여 E. coli DH5 $\alpha$에 재형질전환시킨 결과 vector 내에 xylanase 유전자가 cloning되었음을 확인하였다. Cloning된 유전자의 염기배열을 분석한 결과 이 유전자의 총 크기는 2,187 bp였고 이는 409개기 아미노산을 coding 하는 open reading frame 1,227 bp를 포함하고 있었다. 이 염기배열은 ATG개시 codon으로부터 각각 193과 216 base 상류에 TTTAAT의 -10 box와 TCGAAA인 -35 box로 추정되는 염기배열이 존재하였고 -10 box로부터 7 bp하류에 전사개시점인 A가 위치하고 있었다. 또한, 개시 codon으로부터 432 bp 상류에 공통염기배열과 14개의 염기 중 11개의 염기가 일치하는 TGATGGCGTCGGCA의 catabolite responsive element (CRE)가 존재하였다. B. pumilus TX703의 xylanase와 아미노산배열의 유사성이 가장 높은 xylanase는 Hordeum vulgare의 isozyme X-I이었고 본 xylanase는 208번째와 322번째에 glutamic acid 잔기를 가지고 있어 Clostridium thermocellum, Dictyoglomus thermophilum, Thermotoga neapolitana 등에서 밝혀진 바와 같이 glutamic acid 부위가 xylanase의 활성부위라 여겨진다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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