• Journal of Acupuncture Research
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• v.25 no.2
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• pp.75-89
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• 2008

목적 : 후박(厚朴)(Magnolia obovata)에서 추출한 낮은 농도의 obovatol 약침액의 RAW264.7 세포에서 LPS로 유발된 염증, $TNF-{\alpha}$로 유발된 human colon carcinoma SW620 및 HCT116 세포의 세포증식에 대한 영향과 그 기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : RAW264.7 세포에서 LPS로 염증을 유발하고 낮은 농도의 obovatol 약침액을 처리한 후 cell viability, NO 생성량, iNOS와 COX-2의 발현, $NF-{\kappa}B$활성, 전사능력을 관찰하기 위해 WST-1 assay, NO determination assay, western blot analysis, EMSA, luciferase activity assay를 시행하였고, HCT116, SW620 세포에 $TNF-{\alpha}$로 증식을 유도하고 낮은 농도의 obovatol 약침액을 처리한 후 cell growth, apoptosis 및 apoptosis와 연관된 $NF-{\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 WST-1, Cell morphogy test, DAPI staining and TUNEL assay, EMSA, luciferase activity assay를 시행하였다. 결과 : 1. RAW264.7 세포에서 낮은 농도의 obovatol 약침액 처리는 $NF-{\kappa}B$의 활성 및 전사능력을 낮추고 iNOS와 COX-2의 발현과 NO 생성을 감소시켜 LPS로 유발된 염증을 억제하였다. 2. HCT116, SW620 세포에서 낮은 농도의 obovatol 약침액 처리는 $NF-{\kappa}B$의 활성을 낮추어 세포자멸사를 촉진함으로써 $TNF-{\alpha}$로 유발된 암세포의 성장을 억제하였다. 결론 : 이상의 결과는 낮은 농도의 obovatol 약침액이 항염 및 인간 전립선암세포주인 SW620, HCT116에 대한 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이며, 향후 이를 바탕으로 한 생체 연구에서의 긍정적인 결과는 obovatol 약침액이 만성염증성 질환 및 대장암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 초석이 될 것으로 기대된다.

• Journal of Pharmacopuncture
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• v.13 no.1
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• pp.15-35
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• 2010

연구목적 : 이 연구는 봉약침의 봉독이 NF-${\kappa}B$ 활성억제와 안드로겐 수용체 조절 단백질 및 세포자멸사 조절 단백질의 발현을 통하여 세포자멸사를 유도하고, 전립선 암세포를 이식한 쥐에서의 세포자멸사 유도 효과를 확인함으로써, 봉약침의 봉독이 생체 내에서도 세포자멸사를 유도하여 전립선암에 효과를 나타냄을 확인하고자 하였다. 실험방법 : 세포자멸사의 관찰에는 DAPI, TUNEL staining assay를 시행하였으며, 세포자멸사 조절 단백질의 변동 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고, 세포자멸사와 연관된 NF-${\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA를 시행하였다. 결과 : 1. DAPI, TUNEL staining assay 결과 봉독 및 melittin을 처리한 LNCaP 세포 모두에서 세포자멸사 유도율이 유의한 증가를 나타내었다. 2. LNCaP 세포에 봉독이나 melittin을 처리한 결과, 안드로겐 수용체 조절 단백질 중 p-Akt, COX-2, calpain은 봉독과 melittin 모두에서 유의한 감소를 나타내었고, Akt는 melittin에서 유의한 감소를 나타냈으며, 봉독에서 증가하는 경향을 보였고, MMP-9은 증가하였다. 3. 생체 내에서의 봉독의 항암효과를 확인하기 위해 전립선암세포가 이식된 쥐에 봉독을 처리한 후 암세포의 부피와 무게, 쥐의 체중을 측정한 결과, 봉독을 처리한 군에서 암 세포 부피비율 및 무게는 감소하였고, 쥐의 체중은 증가하였다. 4. 전립선암세포가 이식된 쥐에 봉독을 처리한 결과, NF-${\kappa}B$ 활성에서 유의한 감소를 나타내었다. 5. 전립선암세포가 이식된 쥐에 봉독을 처리한 결과, 세포자멸사 조절 단백질 중 Bax/Bcl-2, p53, caspase-3, caspase-9, calpain은 유의한 증가를, COX-2는 유의한 감소를 나타냈으며, MMP-9는 증가를 나타내었다. 결론 : 이상의 결과는 봉독이 시험관 내에서 뿐만 아니라 생체 내에서도 NF-${\kappa}B$의 활성을 억제하고 안드로겐 수용체 조절 단백질 및 세포자멸사 조절 단백질의 조절을 통하여 인간 전립선암 세포주인 LNCaP의 세포자멸사를 유도함으로써 전립선암 세포 증식억제 효과 및 호르몬 비의존적인 전립선암으로의 전이를 지연시키는 경향이 있을 것으로 사료되고, 봉독이 전립선암의 예방과 치료에 효과적으로 활용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Development and Reproduction
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• v.16 no.2
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• pp.129-135
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• 2012

Previously, we identified that the overexpression of IEX-1 induces apoptosis in ovarian cancer cells. Herein we report a new binding partner of IEX-1, CATHEPSIN B, as a lysosomal enzyme which contributes to the various apoptotic signaling in tumor cells. To investigate how IEX-1 regulates cellular survival and death event, we performed yeast two-hybrid screening of rat ovarian cDNA library using IEX-1 as the bait and found CATHEPSIN B. In the present study, CATHEPSIN B and IEX-1 proteins were overexpressed in 293T cells and their specific association was determined by immunoprecipitation and immunoblot analysis. In addition, the endogenous interaction between CATHEPSIN B and IEX-1 was confirmed in HeLa cells. The current finding of lysosomal CATHEPSIN B as the IEX-1-binding partner implies that IEX-1 may involve in lysosome-mediated apoptotic signaling pathways.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.24 no.2
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• pp.1-14
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• 2007

목적 : 이 연구는 Vipera lebetina turanica의 사독약침파(蛇毒藥鍼波)(Snake venom toxin, SVT)이 in vitro에서 $NF-{\kappa}B$의 활성억제와 apoptosis 관련 단백질의 발현 조절을 통하여 세포자멸사(Apoptosis)를 유도하는지 in vivo에서 또한 전립선 암세포주인 PC-3 세포의 성장을 억제하는지 살펴보고자 하였다. 방법 : SVT를 처리한 후 PC-3의 성장억제를 관찰하기 위해 WST-1 assay, CCK-8 assay를 시행하였고，Apoptosis evaluation에는 DAPI, TUNEL staining assay를 시행하였으며，Apoptosis regulatory proteins의 변화 관찰에는 western blot analysis를 시행하였고，apoptosis와 연관된 $NF-{\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 EMSA시행하였으며，SVT의 핵내이동을 관찰하기 위해 Immunofluorescence Staining, Confocal immunocytochemistry를 시행하였으며，전립암세포의 종양형성에는 흉선을 제거한 쥐에 Tumorigenecity study를 시행하였다. 결과 : PC-3 세포에 SVT를 처리한 후，전립선 암세포의 성장，Apoptosis의 유발，Apoptosis관련 단백질의 발현，$NF-{\kappa}B$의 활성，SVT의 PC-3세포 핵내 이동여부 및 흉선제거 후 PC-3 세포를 이식한 쥐의 종양형성과정에 미치는 영향을 관찰하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. PC-3 세포에서 SVT를 처리한 후 세포성장이 억제되고，세포자멸사가 유도되며，조절인자인 p53, caspase-3, -9는 증가되었고，Bcl-2는 감소되었다. 2. PC-3 세포에서 SVT를 처리한 후 $NF-{\kappa}B$의 활성이 유의하게 감소되었다. 3. DAPI로 염색된 상태에서 SVT가 PC-3 세포의 핵내로 이통되는 것이 관찰되었다. 4. 흉선제거 후 전립선 암세포주를 이식한 쥐에서 SVT를 피내로 주입한 결과 전립선암의 크기와 무게가 유의하게 감소하였다. 결론 : 이상의 결과는 SVT가 $NF-{\kappa}B$의 활성 억제를 통하여 인간 전립선암세포주인 PC-3의 세포자멸사를 유발함으로써 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이며，이를 재확인한 생체 연구에서의 긍정적인 결과는 향후 SVT의 전립선암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 초석이 될 것으로 기대된다.

• Tuberculosis and Respiratory Diseases
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• v.48 no.2
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• pp.166-179
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• 2000

Background: The main reason for the failure of anti-cancer chemotherapy is the build up of resistance by cancer cells to apoptosis. The activation of NF-${\kappa}B$ in many cancer cell lines is reported to be underlying mechanism behind the build up of resistance of cancer cells to apoptosis. However, this relationship varied depending on the cells used in the experiments. In this study, the role of NF-${\kappa}B$ activation in the TNF-$\alpha$-induced apoptosis in lung cancer cell line was evaluated. Methods: NCI-H157 cells were used in all experiments. Cells were exposed to a high dose of TNF-$\alpha$(20 ng/ml) for 24 or 48 hours with or without blocking NF-${\kappa}B$ activation. TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}B$ was inhibited either by overexpression of $I{\kappa}B{\alpha}$-super repressor($I{\kappa}B{\alpha}$-SR) or by pre-treatment with proteasome inhibitor. Cell viability and apoptosis were evaluated with MTT assay and Western blot analysis for PARP fragment, respectively. Results: Cell viability of NCI-H157 cells was not affected by TNF-$\alpha$ treatment alone; however, combined treatment with TNF-$\alpha$ and cycloheximide reduced cell viability significantly, indicating that resistance to TNF-$\alpha$ is mediated by the new proteins synthesized after TNF-$\alpha$ stimulation. To evaluate the role of NF-${\kappa}B$ in the transcription of anti-apoptotic proteins. delete NF-${\kappa}B$ activation was inhibited before TNF-$\alpha$ stimulation. as described above. $AD5I{\kappa}B{\alpha}$-SR-transduction inhibited TNF-$\alpha$-induced nuclear translocation of p65. TNF-$\alpha$-induced cell death and apoptosis increased after inhibition of TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}$ by methods. Conclusion: These results suggest that TNF-$\alpha$-induced activation of NF-${\kappa}B$ may be closely related to the acquisition of the resistance to TNF-$\alpha$-induced apoptosis in lung cancer cells. Therefore. blocking of NF-${\kappa}B$ pathway can be a useful therapeutic modality in the treatment of lung cancer.

• Korean Journal of Plant Tissue Culture
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• v.21 no.1
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• pp.59-63
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• 1994

Chromosome variation in callus cells initiated from different cytogenetic type plane of Scilla scilloides Complex was analysed Considerable variation in both chromosome number and struchure was found in type AA, while no autosomal variation was detected in type BB callus cells. In allotetraploid AABB, two hypoploid cells were fount while a hypoploid cell and three hyperploid cells were found in eutetraploid cells of BBBB. Autosomes in callus cells derived from the plant with B-chromosomes were more stable than those from the plant without B-chromosome. We doubt that B-chromosomes have a selective function for the autosomes in culture of S. scilloides Complex.

• Korean Journal of Clinical Laboratory Science
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• v.50 no.4
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• pp.462-469
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• 2018

HSP90 regulates various proteins involved in differentiation and cell survival. Levels of HSP90 tend to increase during development of squamous cell carcinoma in the head and neck including the mouth. Thus, many studies have been conducted to treat these cancers through suppression of HSP90. This study investigated the effect of two HSP90 inhibitors, geldanamycin and 17-AAG, on the proliferation, apoptosis, and invasion of human oral squamous cell carcinoma cells. Cell survival and cell cycle analyses, as well as western blot analysis, were performed with oral cancer cell lines, YD-10B and YD-38. After treatment with HSP90 inhibitors, cell proliferation was significantly inhibited. When YD-10B and YD-38 cells were treated with various concentrations of geldanamycin and 17-AAG (0, 0.1, 0.3, 1 and $10{\mu}M$) for 24 hr, the growth of YD-10B cells was markedly reduced compared to that of YD-38 cells. Thereafter, the cells were subjected to flow cytometry, which revealed G2 arrest. These results demonstrated that geldanamycin induced G2 arrest and inhibited cell proliferation through the $p-GSK-3{\beta}$ pathway in YD-10B and YD-38 cells, thus inhibiting cell survival. HSP90 inhibitors are therefore expected to have a therapeutic effect on various cancer cell lines.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.24 no.2
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• pp.15-29
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• 2007

목적 : 후박(厚朴)(Magnolia Obovata)에서 추출한 낮은 농도의 Obovatol 약침액의 RAW264.7 세포에서 LPS로 유발된 염증，$TNF-{\alpha}$로 유발된 human Prostate carcinoma PC-3 및 LNCap 세포의 세포증식에 대한 영향과 그 기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : RAW264.7 세포에서 LPS로 염증을 유발하고 낮은 농도의 Obovatol 약침액을 처리한 후 cell viability, NO 생성량，iNOS와 COX-2의 발현, $NF-{\kappa}B$활성，전사능력을 관찰하기 위해 MTT assay, NO determination assay, western blot analysis, EMSA, luciferase activity assay를 시행하였고，LNCap, PC-3 세포에 $TNF-{\alpha}$로 증식을 유도하고 낮은 농도의 Obovatol 약침액을 처리한 후 cell growth, apoptosis 및 apoptosis와 연관된 $NF-{\kappa}B$의 활성 변화를 관찰하기 위해 WST-1, Cell morphogy test, DAPI staining and TUNEL assay, EMSA, luciferase activity assay를 시행하였다. 결과 : 1. RAW264.7 세포에서 낮은 농도의 Obovatol 약침액 처리는 $NF-{\kappa}B$의 활성 및 전사능력을 낮추고 iNOS와 COX-2의 발현과 NO 생성을 감소시켜 LPS로 유발된 염증을 억제하였다. 2. LNCap, PC-3 세포에서 낮은 농도의 Obovatol 약침액 처리는 $NF-{\kappa}B$의 활성을 낮추어 세포자별사를 촉진함으로써 $TNF-{\alpha}$로 유발된 암세포의 성장을 억제하였다. 결론 : 이상의 결과는 낮은 농도의 Obovatol 약침액이 항염 및 인간 전립선암세포주인 PC-3, LNCap에 대한 증식억제 효과가 있음을 입증한 것이며，향후 이를 바탕으로한 생체 연구에서의 긍정적인 결과는 Obovatol 약침액이 만성염증성 질환 및 전립선암의 예방과 치료에 대한 효과적인 치료제 개발에 초석이 될 것으로 기대된다.

• Journal of Acupuncture Research
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• v.23 no.3
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• pp.91-102
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• 2006

목적 : 이 연구에서는 FBS에 의하여 유도되는 혈관 평활근 세포 증식에 대한 봉약침액과 Melittin의 세포 고사효과의 영향 및 작용 기전을 살펴보고자 하였다. 방법 : $I{\kappa}Ba$, p-$I{\kappa}Ba$, p-ERK1/2, p-Akt, p53, Bcl-2, Bax 및 active caspase-3는 Western blotting을, $NF-{\kappa}B$는 EMSA와 immunofluorescence staining을 이용하여 측정하였다. 결과 : 1. Melittin은 $NF-{\kappa}B$ 활성에 대하여 $I{\kappa}Ba$의 인산화를 유의하게 익제하고 $I{\kappa}Ba$를 증가시켰으며, $NF-{\kappa}B$의 DNA 결합과 $NF-{\kappa}B$ p50의 핵 내 유입을 유의하게 감소시켰다. 2. Melittin은 $NF-{\kappa}B$ 활성을 증가시키는 물질인 Akt의 인산화를 유의하게 억제하였고, ERK1/2의 인산화도 억제하였다. 3. Melittin은 세포사멸 전구 단백질인 p53, Bax 및 caspase-3의 발현을 유의하게 증가시켰고, 세포사멸억제 단백질인 Bcl-2의 발현은 감소시켰다. 결론 : 이상의 결과는 $NF-{\kappa}B$ 와 Akt 활성을 억제함으로써 혈관평활근세포 증식을 억제하는 효과가 있음을 입증한 것이며, 향후 안전성 연구를 바탕으로 혈관성형술 후 재발성협착증과 동맥경화증의 치료제로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

• Journal of Life Science
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• v.17 no.8 s.88
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• pp.1129-1134
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• 2007

In the previous our study, a cDNA that encodes protein disulfide isomerase from Bombyx mori (bPDI)was isolated and characterized. bPDI has an open reading frame of 494 amino acids contained two PDI-typical thioredoxin active site of WCGHCK and ER (endoplasmic reticulum) retention signal of the KDEL motif at its C-terminal. Recent studies have demonstrated that misfolded proteins are accumulated in many diseases including Alzheimer’s, goiter, emphysema, and prion infections. bPDI was over-expressed or knock-downed in Sf9 cells to study the relationship between bPDI expression and protections against protein misfolding. bPDI gene was cloned in insect expression vector pIZT/V5-His for over-expression and bPDI double-stranded RNA (dsRNA) was generated for knock-down. Over-expression of bPDI significantly improved survival rate, but bPDI dsRNA transfection significantly reduced survival rate after 48 hours exposure. In mock-transfected or wild-type cells had no significant effect. The results support the view that bPDI is one of the important intracellular components for cell protect mechanism, especially, against ER stress such as protein misfolding.