Astrovirus is frequently associated with diarrhea in children. It can not be readily isolated by cell culture, and an electronmicroscope is usually used for detection of this agent. Recently in 1995 a combined method of reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was designed for easier detection of astrovirus, which is based on the conserved sequence in 3'-end of genomes of the 7 known serotypes of human astrovirus. As of yet there has not been any report of astrovirus data in Korea using the RT-PCR methods. The purpose of this study was to detect astrovirus incidence, severity of symptoms, seasonal variation and co infection rate with rotavirus in Korean children inpatients with diarrhea. Fecal specimens from 61 young children hospitalized with gasteroenteritis Korea from Jan. 1996 through Mar. 1997. They were examined for astroviurs infection by RT-PCR method. Results are as follows:1. Astrovirus was detected at 9.8% (6/61) from fecal specimens of children with severe diarrhea by EIA using monoclonal antibody coated plates. 2. Astorvirus was detected at 29.5% (18/61) from fecal specimens of children with severe diarrhea by RT-PCR. 3. The age of the 18 children affected by astrovirus ranged from 2 monthes to 7 years with mean of 3.0 years. 4. Mean hospital stay of the 18 children was 6.1 days. 5. Five (27.8%) astrovirus RT-PCR positive strains were confirmed in November and in December, respectively out of 18 specimens in total. 6. Astrovirus coinfection with rotavirus type G1 was confirmed in 15/16 specimens (93.8%), and with type G2 was in 1/16 specimens (6.3%).
2016년 3월, 부산 D대학 인근 음식점에서 모임을 한 후, 설사, 구토를 호소하는 환자들이 발생하였다. 역학조사팀은 설사 환자 및 해당 음식점 조리종사자에 대한 분변 검체를 수집하였고 해당 음식점 주방에서 식품용수에 대한 채수도 진행하였다. 인체 검체 42건에서 노로바이러스 16건, 아스트로바이러스 8건이 검출되었으며, 노로바이러스의 경우는 GI, GII genogoup 모두 검출되었으며, GI.3, GI.4, GII.4, GII.13, GII.17, GII.21로 6가지 다양한 유전자형의 분포를 확인하였다. 아스트로바이러스의 경우 Type 5과 Type 2의 유전자형 분포양상을 확인하였다. 또한 노로바이러스와 아스트로바이러스가 복합 감염된 3 케이스도 포함되어 있었다. 노로바이러스는 전세계적으로 GII.4형이 유행하고 있고, 최근에는 GII.17형이 출현하고 급증하는 동향에 따라 본 연구에서도 GII.17형이 가장 우세하였으며, 아스트로바이러스 경우는 국내에서 우세한 유전자형인 Type 1인 것과는 차이가 있는 사례였다. 특히, 부산지역에서 아스트로바이러스가 식중독 발생의 원인이 된 경우는 이번이 첫 사례여서 본 연구를 통하여 부산지역의 식중독 발생에 새로운 발생 양상을 파악하는 매우 특징적 결과를 얻었다.
목 적 : 이 연구는 경기서부지역의 감염성 설사의 원인 바이러스의 역학 및 지역적 유병율에 대한 정보 제공을 위해 실시되었다. 방 법 : 2009년 1월부터 12월까지 가톨릭대학교 부천성모병원에 급성 설사로 입원한 10세 미만 환아를 대상으로 흔한 세균성 병원체가 없는 310개의 대변 검체에서 rotavirus, parechovirus, adenovirus, astrovirus, enterovirus, norovirus의 유무를 PCR과 RT-PCR을 이용하여 확인하였다. 결 과 : parechovirus (16%)가 가장 흔한 것으로 나타났으며, adenovirus (15%), astrovirus (14%), rotavirus (13%), enterovirus (5%)의 순으로 검출되었다. 단일 감염은 55.8%에서, 중복 감염은 3.2%에서 나타났다. 바이러스성 장염은 전체적으로 두 차례의 유행 시기를 보였으며, 84.6%는 2세 이하에서 발생하였다. 결 론 : parechovirus, adenovirus, astrovirus, enterovirus는 기존에 시행 중인 진단방법으로는 과소평가되어 있으나 소아 설사의 중요한 원인이다.
A one-step multiplex reverse transcription PCR (RT-PCR) method comprising six primer sets (for the detection of norovirus GI and GII, hepatitis A virus, rotavirus, and astrovirus) was developed to simultaneously detect four kinds of pathogenic viruses. The size of the PCR products for norovirus GI and GII, hepatitis A virus (VP3/VP1 and P2A regions), rotavirus, and astrovirus were 330, 164, 244, 198, 629, and 449 bp, respectively. The RT-PCR with the six primer sets showed specificity for the pathogenic viruses. The detection limit of the developed multiplex RT-PCR, as evaluated using serially diluted viral RNAs, was comparable to that of one-step single RT-PCR. Moreover, this multiplex RT-PCR was evaluated using food samples such as water, oysters, lettuce, and vegetable product. These food samples were artificially spiked with the four kinds of viruses in diverse combinations, and the spiked viruses in all food samples were detected successfully.
Human astrovirus (HAstV) is a major cause of acute diarrhea among children, resulting in outbreaks of diarrhea and occasionally hospitalization. Improved surveillance and application of sensitive molecular diagnostics have further defined the impact of HAstV infections in children. These studies have shown that HAstV infections are clinically milder (diarrhea, vomiting, fever) than infections with other enteric agents. Among the 8 serotypes of HAstV identified, serotype 1 is the predominant strain worldwide. In addition to serotype 1, the detection rate of HAstV types 2 to 8 has increased by using newly developed assays. HAstV is less common compared with other major gastroenteritis viruses, including norovirus and rotavirus; however, it is a potentially important viral etiological agent with a significant role in acute gastroenteritis. A better understanding of the molecular epidemiology and characteristics of HAstV strains may be valuable to develop specific prevention strategies.
Human Astrovirus (HuAstV), known as a waterborne virus, is a group IV positive-sense single-stranded RNA that belongs to Astroviridae. The first outbreak of HuAstV was reported in England in 1975. HuAstV can exist not only among clinical patients but also in various water environments, such as water for agriculture and vegetables. For diagnosis of HuAstV from water samples, a polymerase chain reaction (PCR) system has been developed. However, the PCR-based diagnostic method has problems in field application, such as reaction time, sensitivity and specificity. For this reason, in this study we developed the loop-mediated isothermal amplification assay (LAMP) system, aimed specifically at HuAstV. Three prepared LAMP primer sets were tested by specificity, non-specificity and sensitivity; one LAMP primer set was selected with optimum reaction temperature. The developed LAMP primer set reaction conditions were confirmed at 62℃, and detection sensitivity was 1 fg/μL. In addition, restriction enzyme HaeIII (GG/CC) was introduced to confirm that the LAMP reaction was positive. As a result, selected LAMP primer set was 100 - 1000 times more specific, rapid, and sensitive than conventional-nested PCR methods. For verification of the developed LAMP assay, twenty samples of cDNA from groundwater samples were tested. We expect that the developed LAMP assay will be used to diagnose HuAstV from various samples.
Human Astrovirus (HuAstV) is an important gastrointestinal pathogen that is frequently reported worldwide. Monitoring of contaminated groundwater has been suggested since HuAstV is transmitted through the fecal-oral route. This study developed a test method based on conventional reverse transcription (RT)-nested polymerase chain reaction (PCR) that involves SL® non-specific reaction inhibitor for unknown non-specific amplification taking place in the groundwater environment. An optimal method for detecting HuAstV in groundwater sample through analysis and comparison against conventionally reported method was also suggested. The developed method enabled the production of nested PCR amplicon of 630 nt, which is a sufficient length for similarity analysis based on sequencing and genotyping. Amplicons suspected to be HuAstV were amplified in two out of the twenty groundwater samples collected in Korea, presenting 99.77% and 99.73% similarity against HuAstV 1 strain lhar/2011/kor (JN887820.1) in sequencing, respectively. These amplicons were identified as HuAstV 1.
목적: 급성 설사로 입원한 소아의 대변 검체에서 rotavirus, adenovirus, astrovirus, calicivirus 및 enterovirus의 바이러스 항원을 검출하고 임상 증상과의 연관성을 알기 위해 본 연구를 시도하였다. 방법: 이화여자대학교 의과대학 목동병원 소아과에 1996년 3월부터 1999년 12월 사이에 입원하였던 소아 74명의 대변을 채취하였는데, 53개는 급성 설사 환자에서 채취하여 이를 설사군으로, 21개는 동일시기에 설사가 없는 타질환으로 입원한 소아에서 무작위로 채취하여 이는 대조군으로 분류하였다. 대변 검체는 영하 $20^{\circ}C$에서 냉동 보관 후 단클론 항체를 이용한 간접 효소 면역측정법으로 바이러스 항원 검출을 하였고 각 바이러스 검출과 임상 증상을 비교하였다. 결과: 바이러스 항원은 설사군에서 46례와 대조군에서 14례 검출되었다. 이 중 enterovirus 47례, rotavirus 26례, adenovirus 16례, astrovirus 11례, 그리고 calicivirus가 11례 검출되었다. 시기적으로 바이러스 항원은 봄(3>5월)에 많이 검출되었다(63%). 하나의 바이러스 항원이 검출된 경우는 설사군 22례, 대조군 6례로 모두 28례이었다. 바이러스 항원이 동시 검출된 경우는 30례이며, Salmonella group B와 enterovirus의 동시 감염 2례 있었다. 여러 항원이 검출된 30례를 세분하면, 두 종류의 바이러스가 검출된 경우가 15례, 세 종류의 바이러스가 검출된 경우가 11례, 네 종류의 바이러스가 검출된 경우가 2례, 다섯 종류의 바이러스가 모두 검출된 경우도 2례 있었다. 대변에서 바이러스 항원이 동시 검출된 다중성이나 종류에 따른 임상 증상의 차이는 없었다. 결론: 본 연구에서는 대변 내 바이러스 항원에 대한 단클론 항체를 이용한 간접 효소 면역측정법으로 검사하였으며, 각 바이러스 항원과 임상 증상과의 연관성은 없었다. 앞으로 더 많은 소아를 대상으로 역전사 중합효소 연쇄반응, 바이러스 배양 검사 등으로 다양하게 검사하여 소아 설사의 바이러스성 원인과 역학이 연구되어야 할 것이다.
Jin, Hye Il;Lee, Yoo Mi;Choi, You Jin;Jeong, Su Jin
Clinical and Experimental Pediatrics
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제59권3호
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pp.120-125
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2016
Purpose: Viral gastroenteritis among children is mainly caused by rotavirus, norovirus, astrovirus, or adenovirus strains. However, changing socioeconomic conditions and a rotavirus vaccination program may be affecting the prevalence of these viral infections. Therefore, we aimed to elucidate the season-specific trends in viral infections for facilitating prophylaxis and surveillance in our region. Methods: We evaluated 345 pediatric patients (203 males, 142 females; age, 1 month to 16 years) who visited the CHA Bundang Medical Center because of gastroenteric symptoms between June 2014 and May 2015. The specimens were simultaneously tested for norovirus, rotavirus, astrovirus, and adenovirus via multiplex reverse transcription polymerase chain reaction. Clinical characteristics of patients were analyzed retrospectively. Results: The most common virus was norovirus, followed by rotavirus, adenovirus, and astrovirus. Of all viral infections, 45.2% occurred mainly between 6 and 24 months of age; in particular, norovirus infection mostly occurred in all age groups except those below 6 months of age, when rotavirus was most prevalent. In addition, seasonal variation was observed, such as norovirus infection from December to February, rotavirus infection from February to April, and adenovirus infection from July to October. Conclusion: Our results showed that the most common cause of acute pediatric viral gastroenteritis had changed from rotavirus to norovirus in our patients, because of effective rotaviral vaccination. We recommend the management of food and personal hygiene in accordance with age or seasons as well as active vaccination for preventing viral gastroenteritis.
목 적: Human astrovirus (HAstV)는 전세계적으로 영아 연령에서 중요한 위장관염의 중요 병원체로 알려지고 있지만 국내에서 HAtV 감염의 유병률에 대한 연구는 드문 편이다. 이에 저자들은 분자 유전학적 방법을 이용하여 위장관염으로 입원한 5세 이하의 소아에서 HAstV의 유병률과 유전형을 알아보기 위하여 본 연구를 시행하였다. 방 법: 2004년 2월부터 2005년 1월까지 12개월간 인제의대 상계백병원 소아과에 급성 위장관염으로 입원한 5세 이하의 소아에게서 수집된 대변 검체 812건을 대상으로 하였다. 대변 검체에 대해서 enzymeimmunoassay(EIA) 또는 RT-PCR을 이용하여 rotavirus, enteric adenovirus와 norovirus 감염여부를 진단하였다. HAstV 특이적인 시발체를 이용하여 RTPCR을 시행한 다음 염기서열 분석을 시행하였다. 결 과: 총 812건의 검체에서 rotavirus 양성률은 16.9% (138/812), norovirus 양성률은 11.5% (94/812), adenovirus 양성률은 4.0% (33/812)였다. HAstV의 유병률은 RT-PCR 방법에 의해 4.0% (33/812)였다. HAstV 양성인 환아의 연령은 생후 12개월 미만 82.0%, 1~2세 미만 6.0%, 2~3세 미만 6.0%, 3~5세 이하가 6.0%였다. HAstV의 월별 분포는 각각 4월 3건, 5월 5건, 6월 4건, 8월 12건, 9월 4건, 10월 2건, 11월 2건, 12월 1건으로 8월에 가장 높은 발생률을 보였다. 염기서열 분석이 가능하였던 HAstV 양성 검체 22건 중에서 유전형-1이 20건, 유전형-8이 2건이었다. 결 론: 2004년 2월부터 2005년 1월까지 12개월간 급성 위장관염으로 입원한 소아에서 HAstV 감염 유병률은 4.0%였으며, 영아기 연령에서 주로 발생하였다. 국내 HAstV 감염의 정확한 역학적 특성을 파악하기 위해서는 장기간에 걸친 추가 연구가 필요할 것으로 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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