Lilia, Lopez De Leon;Isaura, Caceres;Julie, Bornot;Elodie, Choque;Jose, Raynal;Patricia, Taillandier;Florence, Mathieu
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제29권9호
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pp.1412-1423
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2019
The filamentous fungus Aspergillus tubingensis that belongs to the black Aspergillus section has the capacity to produce high-value metabolites, for instance, naphtho-gamma-pyrones (NGPs). For these fungal secondary metabolites, numerous biological properties of industrial interest have been demonstrated, such as antimicrobial, antioxidant and anti-cancer capacities. It has been observed that production of these secondary metabolites is linked with fungal sporulation. The aim of this research was to apply osmotic and oxidative environmental stresses to trigger the production of NGPs in liquid cultures with CYB (Czapek Dox Broth). In addition, numerous parameters were tested during the experiments, such as pH value, incubation time, container geometry, and static and agitation conditions. Results demonstrate that the produced amount of NGPs can be enhanced by decreasing the water activity ($a_w$) or by adding an oxidative stress factor. In conclusion, this study can contribute to our knowledge regarding A. tubingensis to present an effective method to increase NGP production, which may support the development of current industrial processes.
Ochratoxin A (OTA), a mycotoxin, contaminates agricultural products and poses a serious threat to public health worldwide. Microbiological methods are known to be a promising approach for OTA biodegradation because physical and chemical methods have practical limitations. In the present study, a total of 130 fungal isolates obtained from 65 traditional Korean meju (a fermented starter for fermentation of soybeans) samples were examined for OTA-biodegradation activity using thin-layer chromatography. Two fungal isolates were selected for OTA-biodegradation activity and were identified as Aspergillus tubingensis M036 and M074 through sequence analysis of the beta-tubulin gene. After culturing both A. tubingensis isolates in Soytone-Czapek medium containing OTA (40 ng/ml), OTA-biodegradation activity was analyzed using high-performance liquid chromatography (HPLC). Both A. tubingensis strains degraded OTA by more than 95.0% after 14 days, and the HPLC analysis showed that the OTA biodegradation by the A. tubingensis strains led to the production of ochratoxin α, which is much less toxic than OTA. Moreover, crude enzymes from the cultures of A. tubingensis M036 and M074 led to OTA biodegradation of 97.5% and 91.3% at pH 5, and 80.3% and 75.3% at pH 7, respectively, in a buffer solution containing OTA (40 ng/ml) after 24 h. In addition, the OTA-biodegrading fungi did not exhibit OTA production activity. Our data suggest that A. tubingensis isolates and their enzymes have the potential for practical application to reduce levels of OTA in food and feed.
2018년 경북 김천 지역 포도 하우스 재배 농가에서 포도송이가 무르고 마른 포도 과실이 낙과되는 피해가 발생하였다. 병반 표면에는 검갈색의 곰팡이 포자가 형성된 것을 확인할 수 있었으며, 이병과실에서 병원균을 분리하여 균학적 특징 및 염기서열 분석결과 병원균은 Aspergillus tubingensis로 동정하였다. 이 증상의 원인균을 증명하기 위해 이병과실에서 병원균을 분리하여 병원성 검정을 수행한 결과, 고온으로 갈수록 급격히 병이 진전되고 하우스에서 발생한 병징과 일치하였다. 또한, 포도송이 썩음 병원균에 대하여 화학농약 약제의 선발을 통해 병원균의 확산을 막고 예방을 하고자 단제 7종 균사생장 억제 효과 검정을 실시하였다. Dipenoconazole, tebuconazole, metconazole, iminoctadine, captan 5가지의 약제에서 균사생장 억제 효과가 확인되었다. A. tubingensis에 의한 포도송이썩음병(가칭)은 2018년도부터 국내 샤인머스켓 포도에 처음 발생되고 있음을 보고하고, 효과적으로 포도송이썩음병의 발생을 예방할 수 있는 5종의 약제를 보고한다.
The strain of Aspergillus, 6368A, producing acid protease showing high activity was isolated from soil, as a result of wide research about mold group. This strain was identified as a species of Aspergillus tubingensis by the investigation of morphological characteristics. The change of the enzyme production under the various media and culture condition was also studied. The optimum pH and stability of crude acid protease are 2.5, 2.0~4.5 and the optimum temeprature and thermal inactivation waas shown $50^{\circ}C,\;55^{\circ}C$, respectively. From the result of the study on the effects of metal ions, it was found that $MnCl_2,\;CoCl_2,\;CuCl_2,\;SrCl_2,\;and\;NiCl_2$ slightly increased the enzyme activity, on the other hand $ZnCl_2,\;CaCl_2,\;MgCl_2,\;SLS,\;and\;KMnO_4$ decreased it.
독도에 자생하는 번행초의 뿌리로부터 순수 분리하여 형태적으로 상이한 17개의 내생균류를 선별하였다. 또한 분리된 균류들에 대하여 각각의 염농도와 pH 농도 구배에 따라 생장 시험을 확인하였다. 내생균류에 대해 각각 난장이벼의 유묘에 식물생장활성시험을 진행하였고, 그 결과 YH103 균주가 가장 높은 활성을 나타내었다. 계통분석은 Maximum likelihood 방법을 활용하여 결합된 ITS영역, beta-tubulin 및 calmodulin 유전자 염기서열을 분석하여 분리된 균주의 유연관계를 분석하였다. YH103 균주의 배양여과액을 HPLC와 GC/MS SIM을 이용하여 분석한 결과 식물호르몬인 지베렐린 $GA_4$, $GA_7$, $GA_8$ 및 $GA_{19}$가 확인되었다. 최종적으로 YH103 균주의 형태학적 관찰 및 결합된 유전자 염기서열의 분자적 분석을 통해 GA를 생산하는 새로운 Aspergillus tubingensis로 동정되었다.
Aspergillus luchuensis is known as an industrially important fungal species used for making fermented foods such as awamori and shochu in Japan, makgeolli and Meju in Korea, and Pu-erh tea in China. Nonetheless, this species has not yet been widely studied regarding mating-type genes. In this study, we examined the MAT1-1 and MAT1-2 gene ratio in black koji molds (A. luchuensis, Aspergillus niger, and Aspergillus tubingensis) and in Aspergillus welwitschiae isolated from Meju, a fermented soybean starting material for traditional soy sauce and soybean paste in Korea. The number of strains with the MAT1-1 locus was 2 of 23 (A. luchuensis), 6 of 13 (A. tubingensis), 21 of 28 (A. niger), and 5 of 10 (A. welwitschiae). Fungal species A. tubingensis and A. welwitschiae showed a 1 : 1 ratio of MAT1-1 and MAT1-2 mating-type loci. In contrast, A. luchuensis revealed predominance of MAT1-2 (91.3%) and A. niger of MAT1-1 (75%). We isolated and identified 2 A. luchuensis MAT1-1 strains from Meju, although all strains for making shochu in Japan are of the MAT1-2 type. These strains may be a good resource for breeding of A. luchuensis to be used in the Asian fermented-food industry.
Platycosides, Platycodi radix (Platycodon grandiflorus root) saponins, are used as food supplements and exert diverse pharmacological activities. Deglycosylation of saponins enhances their biological efficacy, and deglycosylated platycosides are produced mainly through enzymatic hydrolysis. However, the types of available deglycosylated platycosides remain limited because of a lack of hydrolyzing enzymes that can act on specific glycosides in glycosylated platycosides. In this study, a crude enzyme from Aspergillus tubingensis converted platycoside E (PE) and polygalacin D3 (PGD3) into deglucose-apiose-xylosylated (deGAX)-platycodin D (PD) and deGAX-polygalacin D (PGD), respectively. The products were identified through LC/MS analysis by specifically hydrolyzing all glucose residues at C-3, and apiose and xylose residues at C-28 of platycoside. The hydrolytic activity of the crude enzyme obtained after the cultivation of the fungus using citrus pectin and corn steep solid as carbon and nitrogen sources, respectively, in culture medium was increased compared with those using other carbon and nitrogen sources. The crude enzyme from A. tubingensis was the most effective in producing deGAX platycoside at pH 5.0 and 60℃. The crude enzyme produced 0.32 mg/ml deGAX-PD and 0.34 mg/ml deGAX-PGD from 1 mg/ml PE and 1 mg/ml PGD3 (at pH 5.0 and 60℃) for 12 and 10 h, with productivities of 32.0 and 42.5 mg/l/h and molar yields of 62.1 and 59.6%, respectively. To the best of our knowledge, this is the first study to produce deGAX platycosides from glycosylated platycosides.
The ginsenoside compound K (C-K) is widely used in traditional medicines, nutritional supplements, and cosmetics owing to its diverse pharmacological activities. Although many studies on C-K production have been conducted, fermentation is reported to produce C-K with low concentration and productivity. In the present study, addition of an inducer and optimization of the carbon and nitrogen sources in the medium were performed using response surface methodology to increase the C-K production via fermentation by Aspergillus tubingensis, a generally recognized as safe fungus. The optimized inducer and carbon and nitrogen sources were 2 g/l rice straw, 10 g/l sucrose, and 10 g/l soy protein concentrate, respectively, and they resulted in a 3.1-fold increase in the concentration and productivity of C-K (0.22 g/l and 1.52 mg/l/h, respectively) compared to those used before optimization without inducer (0.071 g/l and 0.49 mg/l/h, respectively). The feeding methods of American ginseng extract (AGE), including feeding timing, feeding concentration, and feeding frequency, were also optimized. Under the optimized conditions, A. tubingensis produced 3.96 mM (2.47 g/l) C-K at 144 h by feeding two times with 8 g/l AGE at 48 and 60 h, with a productivity of 17.1 mg/l/h. The concentration and productivity of C-K after optimization of feeding methods were 11-fold higher than those before the optimization (0.22 g/l and 1.52 mg/l/h, respectively). Thus, the optimization for the feeding methods of ginseng extract is an efficient strategy to increase C-K production. To our knowledge, this is the highest reported C-K concentration and productivity via fermentation reported so far.
대전광역시 근교의 야산과 들판 등지에서 썩은 나뭇잎, 짚, 흙을 채취하여 각각을 배양한 다음 Congo red test에 의해 cellulase 활성을 보이는 균주를 선별하였다. Genomic DNA를 분리한 후 PCR을 수행하여 DNA sequence를 Gene Bank를 통해 분석한 결과 A. tubingensis로 밝혀졌다. 이것을 배양하여 상등액을 crude enzyme으로 사용하여 온도와 pH를 달리하면서 효소의 활성정도를 측정하였다. 대조균주로 A. oryzae KCTC 6291를 이용하였고, 본 연구를 통하여 분리한 균주인 A. tubingensis가 생산하는 cellulase는 A. oryzae의 cellulase에 비하여 각각 다른 온도와 pH에서 높은 안정성을 보여주었다. A. tubingensis는 각각의 온도에서 활성의 정도가 비슷했으며, 45$^{\circ}C$, 55$^{\circ}C$에서 높은 활성을 나타내고 있지만, 고르게 활성이 나타났다. 또한 pH 12.0에서 가장 높은 활성을 보여 주었고, pH 2.0, 3.0, 4.0에서는 양쪽 모두 거의 활성이 없었으며, 중성, 염기성에 대해서 활성에는 큰 변화가 없었다. 따라서, 분리 동정한 A. tubingensis는 온도와 pH에서 고르게 활성을 나타내므로 생균제로 활용할 수 있는 범위가 클 것으로 여겨진다.
검은 Aspergillus 속균은 동양의 발효산업에서 매우 중요한 곰팡이로서 식품산업에 관련된 검은 Aspergillus를 흑국균이라고 한다. 흑국균은 A. luchuensis, A. niger, A. tubingensis로 구성이 되어 있는데 이 중에서 A. luchuensis는 동양의 발효산업에서 매우 중요한 곰팡이로 알려져 있다. 우리나라 전통 된장과 간장의 주요 원료가 되는 메주에서도 검은 Aspergillus가 흔히 발견되었다. 33균주의 검은 Aspergillus가 2008년부터 2011년 사이에 전국적으로 수집한 98개의 완성메주로부터 분리되었고 추가로, 발효과정에 있는 메주로부터 검은 Aspergillus 21균주를 분리하였다. ${\beta}$-tubulin과 calmodulin 유전자 염기서열 분석을 통하여 이들을 동정한 결과 이들은 A. niger 21균주, A. luchuensis 14균주, A. tubingensis 10균주, A. welwitschiae 9균주로 동정되었다. 이 중 A. luchuensis는 생장이 활발하고 단백질, 지방, 탄수화물 분해력이 높은 것으로 조사되어 이들의 산업적 응용에 대한 추가의 연구가 필요한 것으로 사료된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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