• Journal of Microbiology and Biotechnology
• /
• 제21권10호
• /
• pp.1049-1052
• /
• 2011

In this study, we demonstrated the asymmetric synthesis of L-tert-leucine from trimethylpyruvate using branched-chain aminotransferase (BCAT) from Escherichia coli in the presence of L-glutamate as an amino donor. Since BCAT was severely inhibited by 2-ketoglutarate, in order to overcome this here, we developed a BCAT/aspartate aminotransferase (AspAT) and BCAT/AspAT/pyruvate decarboxylase (PDC) coupling reaction. In the BCAT/AspAT/PDC coupling reaction, 89.2 mM L-tert-leucine (ee>99%) was asymmetrically synthesized from 100 mM trimethylpyruvate.

• Journal of Applied Biological Chemistry
• /
• 제52권3호
• /
• pp.109-115
• /
• 2009

Xoo로 부터 aspartate aminotransferase로 추정되는 유전자를 분리한 다음 발현시켜 생화학 특성을 조사하였다. 분리된 유전자는 His6 pET-21(a) 운반체에 삽입시켰으며 E. coli BL21(DE3)에서 발현시켰다. 재조합된 Asp-AT는 affinity chromatography를 이용하여 분리하였으며 SDS-PAGE분석에서 43kDa의 단일 밴드를 나타내었다. 분리된 효소는 amino donor 로서 L-aspartate에 대하여 효소활성도가 가장 높았고, L-leucine 및 L-cysteine에 대하여서도 상당한 활성도를 나타내었다. 효소의 최적 pH는 약 7.5 근처에서 나타났고 효소의 안정성은 산성조건 보다는 알칼리 조건에서 훨씬 높았다. 최적 온도는 약 $35-40^{\circ}C$로 나타났고 $55^{\circ}C$에서 20분간 열처리한 이후의 잔여 활성도는 약 78%로 나타났다. 여러 중금속 중에서 망간 이온에 의해 효소활성이 촉진되었다.

• 한국식품위생안전성학회지
• /
• 제15권1호
• /
• pp.51-54
• /
• 2000

1. E.coli에서 별도의 expression vector를 사용하지 않고도 Bacillus 균주 유래의 유용효소(D-Amino acid aminotransferase;D-AAT, Aspartate aminotransferase;AspAT, Alanine dehydrogenase;AlaDH 등)의 유전자의 5'-up stream부위의 발현 기구를 검토한 결과 각 유용 효소의 유전자들의 5'-upstream부위에 존재하는 프로모터들이 연속적으로 존재한다는 사실이 유추되었고, E.coli의 SD sequence와 매우 상동성이 높은 서열 또한 존재함을 확인하였다. 2. 유용 효소 유전자의 번역과 관련된 5'-upstream 부위의 분석을 통하여 유용 효소의 유전자들은 E.coli의 ribosomal RNA와 매우 안정한 SD pairing을 형성(D-AAT의 경우: -13.0kcal/mol, AspAT의 경우; -9.5kcal/mol, AlaDH의 경우 -15.8kca1/mol)할 수 있음을 확인하여, 이러한 높은 자유에너지 변화는 E.coli내에서 유용 효소의 번역에 기여함을 예상할 수 있다.

• Ocean and Polar Research
• /
• 제39권2호
• /
• pp.107-114
• /
• 2017

In this study, we investigated the effects of light spectra on physiology stress and DNA damage in juvenile rock bream (Oplegnathus fasciatus) using light-emitting diodes (LEDs; green, 520 nm; red, 630 nm) at two intensities (0.25 and $0.5W/m^2$ ) with application of thermal stress (25 and $30^{\circ}C$). We measured the mRNA expression of heat shock protein 70 (HSP70) and the levels of plasma cortisol, glucose, aspartate aminotransferase (AspAT), and alanine aminotransferase (AlaAT). Additionally, DNA damage was measured using comet assays. Our findings showed that HSP70 mRNA expression and plasma cortisol, glucose, AspAT, and AlaAT levels were significantly higher after exposure to high temperatures and were significantly lower after exposure to green LED light. Thus, although high water temperatures induced stress in juvenile rock bream, green LED light inhibited stress. In particular, green LED light reduced stress and DNA damage to a greater degree than other light sources.

• 한국어류학회지
• /
• 제22권1호
• /
• pp.1-8
• /
• 2010

고수온 환경 ($25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$)에 노출시킨 넙치의 산화 스트레스 정도를 알아보기 위하여 넙치의 간 조직에서 항산화 효소 [superoxide dismutase (SOD)와 catalase(CAT)] mRNA의 발현량 및 그 활성을 측정한 결과, $20^{\circ}C$ 대조구보다 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 보였다. 또한 지질 과산화 지표로 사용되는 lipid peroxidation(LPO)을 측정한 결과, $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 경향을 나타내었다. LPO의 증가는 SOD 및 CAT의 증가와 밀접한 관련이 있으며, 체내의 $H_O_2$ 농도 또한 $25^{\circ}C$와 $30^{\circ}C$ 실험구에서 증가하는 것으로 보아 고수온 환경이 넙치의 산화 스트레스를 유발하고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치의 혈중 alanine aminotransferase (AlaAT)와 aspartate aminotransferase (AspAT) 값을 측정 한 결과, AlaAT와 AspAT 모두 유의적으로 증가하는 경향을 보였다. 또한 면역 지표로 사용되는 lysozyme 활성도가 $20^{\circ}C$ 대조구보다 $30^{\circ}C$ 실험구에서 유의적으로 낮은 값을 나타낸 점으로 보아, 고수온 환경에 노출된 넙치에서는 간 세포의 손상뿐만 아니라 면역력 또한 저해되고 있는 것으로 사료된다. 고수온 환경에 노출시킨 넙치에서 항산화 효소인 SOD와 CAT mRNA 발현량 및 활성이 증가하였을 뿐만 아니라 활성산소와 LPO 값 또한 증가된 점으로 보아, 고수온 환경은 넙치의 체내에서 산화 스트레스를 유발시키는 동시에 면역 기능을 저해시키고 있는 것으로 사료된다.

• 한국식물학회:학술대회논문집
• /
• 한국식물학회 1996년도 식물학심포지움 식물호르몬과 신호전달
• /
• pp.50-63
• /
• 1996

Nitrogen (N) is an important regulator of the expression of genes involved in carbon and N assimilation pathways in plants by selectively altering the levels of proteins and/or mRNAs. These in C4 plants include genes for such as phosphoenolpyruvate carboxylase, carbonic anhydrase, and pyruvate-Pi dikinase. The C4 genes are regulated in mesophyll cells by N availability both transcriptionally and posttranscriptionally through cytokinins and glutamine as signals. The level of both the signals is up-regulated by N availability: cytokinins in roots and glutamine in leaves. The level of glutamine is controlled by the differential expression by N of glutamine synthetase and ferrdoxin-dependent glutamate synthase genes which locate in the mesophyll cells of C4 plants. The results is discussed as molecular mechanism for the greater N use efficiency of the plants as well as N partitioning is the photosynthetic cells.