밤(생율(生栗))으로 부터 peroxidase를 $(NH_4)_2SO_4$에 의한 염석 및 DEAE-cellulose column chromatography, sephadex G-100 column chromatography, HPLC방법으로 정제하였으며 정제도는 조효소에 비하여 65.3배였고, HPLC로 측정한 밤 peroxidase 분자량은 35,000으로 추정되었다. sephadexG-100 column chromatography 후 얻은 밤 peroxidase의 작용최적 pH는 5.0이었고, 작용최적 온도는 $50^{\circ}C$이었으며 $80^{\circ}C$에서 1.73분 열처리할 때 90%의 효소가 불활성화되었다. 본 효소는 OPDA 및 PPDA와 같은 방향족 amine류에 높은 활성을 나타내었다. OPDA와 $H_2O_2$에 대한 Km치는 각각 2.6mM과 10mM이었고, 저해작용은 L-ascorbic acid 와 sodium L-ascobate가 가장 컸으며, $Ca^{++}$과 $Ba^{++}$은 1mM과 5mM에서 현저히 효소활성을 증가시켰다.
난소를 절제한 female rat에 Vit C. Vit E, Vit C와 Vit E를 복합적으로 투여했을 때 rat의 간 조직 의 손상 정도 및 항산화 효소 활성을 관찰하기 위해 체중 150$\pm$10g이 되는 female rat에 100mg/kg 함 량의 각 실험 물질들을 이틀에 한 번 두달 간 복강내로 투여한 뒤 간 조직 중 과산화지질량 및 항상화 효소인 SOD, catalase, 총 glutathion 량 및 Glutathion peroxidase의 활성도를 측정함으로써 항산화계의 변화 및 생리 활성 변화를 살펴 보았다. 1. 간, 신장 조직 중의 과산화지질 함량은 노화군(Ovx)이 정상 군(Sham)에 비해 각각 1.78배, 1.61배 증가하였다. 그리고 각 비타민 투여군은 난소를 절제한 군에 비해 과산화질함량이 현저히 감소하였다. 2. 혈청 중 총 cholesterol 량은 노화군(Ovx)이 정상군(Sham)에 비 해 2.57배 높게 나타났다. 각 비타민 투여군은 노화군에 비해 수치가 현저히 감소하였는데, Ovx+Vit C 군의 경우는 94%정도의 억제율을 보였다. HDL-cholesterol은 노화군(Ovx)이 정상군(Sham)에 비해 36.7% 감소하였다. 각 비타민 투여로 HDL-cholesterol 함량이 좋은 수준으로 증가되었고, Ovx+Vit Erns은 노화군보다 2.52배 높게 나타났다. 동맥경화지수도 Ovx+Vit E 군이 아주 낮게 나타났다. 3. 간 조직 중 SOD 활성도는 노화군(Ovx)이 정상군(Sham)보다 5.3배 높게 나타났고, 각 비타민 투여로 free radical 생성이 억제되어 항산화효소인 SOD 활성도를 감소시켰다. 간 조직 중 catalase 활성도는 노화군 (Ovx)이 정상군(Sham)보다 1.58배 정도 높게 나타났는데, 각 비타민 투여로 catalase 활성도가 낮아졌 고, Ovx+Vit E 군은 탁월한 감소 효과를 보였다. 4. 간 조직 중 총 glutathion의 활성도는 정상군 (Sham)이 노화군(Ovx)에 비해 1.22배 정도 높게 나타났고, 각 비타민 투여군 중 Ovx+Vit Erns의 경우 간 조직 중 총 glutathionfid이 가장 높게 나타났다. 간조직 중 reduced-glutathion (GSH)함량과 총 glutathion 량에 대한 oxidized-glutathion (GSSG)의 비율, 또한 Ovx+Vit E 군의 수치가 가장 높게 나 타났다. Vit E가 항산화에 좋은 효과가 있음을 알 수 있었다. 그러나, GPx의 활성 수치는 그 다지 유의 한 변화를 나타내지는 않았다.
본 연구에서는 우유 또는 난백분말로 만든 젖산균 발효식품에 동결건조보호제(FDP) 5종을 첨가하고, 젖산균의 생육과 산생성 및 젖산균발효식품의 기호성에 미치는 영향을 조사하여 다음과 같은 결과를 얻었다. (1) 본 실험에서 사용된 FDP는 우유 또는 난백분말로 만든 젖산균발효식품에 들어있는 Lactobacillus acidophilus를 동결(freezing)에 의한 손상으로부터는 보호효과를 나타내지 않았으나, FDP 가운데 일부는 동결건조(freeze drying)에 의한 손상으로부터 보호효과를 나타냈으며, 이러한 효과는 기질(우유 또는 난백분말 시료)과 FDP의 농도에 따라 차이가 있었다. (2) 우유 시료에 첨가된 Tween 80과 ascorbate는 각각 0.2%와 1%가 적정농도이며, 난백분말에 첨가된 raffinose와 ascorbate는 각각 3%와 1%가 적정농도이었다. (3) L. casei의 경우 난백분말시료에서 raffinose와 ascorbate가 FDP의 효과를 나타냈으며, L. delbrueckii의 경우 난백 분말시료에서 raffinose만이 FDP의 효과를 나타냈다. (4) FDP첨가시료 가운데 MSG 첨가시료는 MSG의 맛을 나타냈으며, ascorbate 첨가시료는 우유시료보다 다소 산미가 높았으나 난백분말시료의 경우에는 산미에 차이가 없었다. Tween 80 첨가시료는 우유시료나 난백분말시료 보다 조직감이 우수하였다. (5) 이상의 결과로 판단하여 본 실험에서 사용된 FDP 가운데 일부는 젖산균의 종류에 따라 다르지만 젖산균발효식품의 동결건조제품의 제조시 산업적인 이용도 가능할 것으로 기대된다.
본 논문에서 벼 ascorbate peroxidase (OsAPx1) 유전자의 발현 분석을 Northern과 Western 분석을 통하여 유묘 에서는 뿌리, 정단분열조직(shoot apical meristem, SAM), 잎 보다는 잎집에서 더 많이 발현되는 것을 확인하였다. 성숙된 조직에서는 OsAPx1 유전자가 잎을 제외하고는 뿌리, 줄기, 꽃에서 강하게 발현되었다. 또한 이 OsAPx1 유전자는 벼 곰팡이 병원균인 벼 도열병 및 세균성 병원균인 흰빛잎마름병에도 반응하였고 특히 흥미있게도 OsAPx1 유전자는 식물호르몬에 대해서 서로 다르게 발현 양상을 보였다. 이 유전자는 자스몬산(JA)에 대해서는 강한 발현 을 보였지만 반대로 살리실산(SA) 및 ABA와 같이 처리된 세포에서는 강한 발현 억제를 보였다. 이는 이 유전자가 JA에는 반응하지만 SA와 ABA하고는 서로 길항작용을 하는 것으로 보인다. 근연관계분석을 통하여 OsAPx1유전 자가 애기장대의 AtAPx1 와 거의 유사하여 AtAPx1 결손 라인을 가지고 표현형 조사를 실시하였다. 그 결과, 외부에서 H2O2를 처리하였을 때에 O2- 와 H2O2의 축적이 wild type과 비교하여 AtAPx1 결손 라인에서는 현저히 높았다. 따라서 본 연구를, 통하여 OsAPx1 유전자는 벼에서 산화 환원 균형 유지를 통하여 다양한 세포 분화발달 및 병원균 방어에도 관여하며 이 유전자의 발현은 JA의 신호전달에 의해서 매개되는 것으로 예상이 된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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