지난 반세기 동안 세균 감염증 치료 또는 성장촉진을 목적으로 가금류에게 광범위하게 항균제를 사용해 왔다. 그러나 항균제 내성의 증가는 사람에게 보편적으로 사용되는 항균제들에 대한 내성을 유도하여 치료를 위한 항균제 선택에 제약을 주어 치료에 어려움을 가중시키고 있다. 본 연구에서는 경상도 지역에서 사육된 닭으로부터 분리된 장내세균을 대상으로 ${\beta}-lactam$, quinolone, 및 aminoglycoside 계열 항균제에 대한 내성유전자의 빈도를 조사하였다. 그리고 항균제 감수성 검사를 시행하여 내성유전자와의 관련성을 알아보았다. 본 연구에서 총 43균주의 장내세균이 40마리의 닭의 맹장으로부터 분리되었으며 디스크확산법을 이용하여 항균제 감수성 검사를 시행하였다. 그리고 중합효소연쇄반응과 염기서열분석을 통해 플라스미드 매개 항균제 내성 유전자를 조사하였다. 총 43균주 중 2균주가 $bla_{CTX-M-14}$ 유전자를 포함하고 있었으며 qnrS 및 aac(6')-Ib-cr 유전자도 각각 2균주와 5균주에서 확인되었다. 총 43균주를 대상으로 항균제 감수성을 조사한 결과 cefepime, ceftazidime, 및 cefaclor를 제외한 모든 항균제에 대해 0.0%부터 23.3%까지의 낮은 감수성률을 보였다. 본 연구에서는 닭으로부터 분리된 대장균에 플라스미드 매개 항균제 내성유전자가 확산되어 있음을 확인하였다. 항균제 내성 유전자의 확산을 막기 위해서는 지속적인 항균제 내성유전자의 조사와 감시가 필요할 것으로 사료된다.
The prevalence and characterization of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants in ciprofloxacin-resistant Escherichia coli isolated from a Korean commercial layer farm were studied. A total of 45 ciprofloxacin-resistant E. coli isolates were recovered and all isolates were multidrug-resistant. Eight isolates have the PMQR genes aac(6')-Ib-cr, qnrS1, and qnrB4, and seven isolates exhibited double amino acid exchange at both gyrA and parC, and have high fluoroquinolone minimum inhibitory concentrations. Five transconjugants demonstrated transferability of PMQR and β-lactamase genes and similar antimicrobial resistance. Because PMQR genes in isolates from commercial layer chickens could enter the food supply and directly affect humans, control of ciprofloxacin resistance is needed.
One hundred and sixty nine Escherichia (E.) coli strains isolated from fecal samples of aquatic birds in Geumho river basin and Dalseong park were tested by agar dilution method to determine their susceptibility patterns to 14 antimicrobial agents. The distribution of tetracycline resistance determinants (tetA, tetB, tetC, tetD and tetE) were also examined by PCR in 76 tetracycline-resistant ($TC^r$) E. coli isolates. The high resistance was observed in tetracycline, cephalothin and ampicillin (45.0~36.7%). Resistance of E. coli isolates derived from Dalseong park to tetracycline, cephalothin, ampicillin and streptomycin (65.7~44.8%) were significantly higher than those isolated from Geumho river basin (31.4~14.7%). About seventy percent (70.4%) of the strains isolated were resistant to one or more drugs tested. Thirty (39.5%) of 76 $TC^r$ E. coli isolates which were resistant to one or more drugs transferred all or a part of their resistance patterns to the recipient strain of E.coli J53 by conjugation. All of $TC^r$ E. coli isolates contained at least one or more of 5 tet genes examined. The most common genes found in these isolates were tetA (60.6%) and followed by tetB (7.9%) and tetC (1.3%). However, tetD and tetE were not found in any of the isolates tested. Twenty one (27.6%) of $TC^r$ E. coli isolates had two determinants, tetA/tetB (20 strains), tetA/tetC (1 strain). And two strains (2.6%) contained three determinants (tetA/tetB/tetC).
세균의 항균제 내성율은 지난 몇십년 동안 지속적으로 상승하였으며 mobile genetic elements를 통한 항균제내성인자들의 전파는 다제내성세균의 출현 및 확산을 가중시켰다. 본연구에서는 임상검체에서 분리된 aminoglycoside에 비감수성 대장균 33주를 대상으로 mobile genetic elements를 통해 전파될 수 있는 aminoglycoside 내성인자를 조사하였다. 16S ribosomal RNA methyltransferases (RMTases)와 aminoglycoside-modifying enzyme (AME)유전자가 PCR과 DNA 염기서열분석을 통해 검출되었다. 그 결과 aac(3')-II 유전자(54.5%)를 포함하고 있는 균주가 제일 많았으며 그 다음으로 aph(3')-Ia 유전자(18.2%)가 많았고 aac(6')-Ib 유전자(15.2%)를 포함하는 균주도 있었다. RMTase 유전자는 본 연구에서는 검출되지 않았다. aac(3')-II 유전자를 포함하고 있는 18균주 중 17균주가 gentamicin에 내성을 보였으며 이중 16균주는 tobramycin에도 내성을 보였다. aac(6')-Ib 유전자를 포함하고 있는 5균주는 모두 tobramycin에 내성을 보였다. 본 연구에서 AME 유전자를 획득하는 것은 사람에서 분리된 대장균이 aminoglycoside에 내성을 나타내는 중요한 기전 중 하나임이 확인되었다. 사람으로부터 분리된 세균을 대상으로 지속적으로 항균제 내성인자를 조사하는 것은 내성세균의 확산을 막는데 필요할 것으로 사료된다.
다제내성(multidrug-resistant, MDR) Acinetobacter baumannii 균주의 출현 및 확산이 전 세계적으로 보고되어 왔는데, 이들 대부분은 생물막 형성능력을 가지고 있다. 생물막 형성은 소독 및 건조에 대해 세균이 저항할 수 있도록 해주는 중요한 병독성 인자이다. 본 연구에서는 생물막을 형성하는 A. baumannii 임상 분리주를 대상으로 항균제 내성 기전에 대한 유전적 기초를 조사하였다. 크리스탈 바이올렛 분석법을 통해 생물막 형성능력을 확인한 결과 46균주가 생물막을 형성하는 것으로 나타났다. 이어서 REP-PCR을 수행하여 서로 다른 클론에 속하는 16 균주를 선택한 후 이 균주들을 대상으로 항균제 내성 인자를 검출하였다. 본 연구에서 분리된 9개 non-MDR (0.96) 균주와 7개의 MDR (1.05) 균주의 평균 생물량은 서로 달랐지만, 이 차이는 유의하지 않았다. 대부분의 생물막 형성 MDR 균주는 다양한 항균제 내성인자 ($bla_{OXA-23}$, armA 및 gyrA 및 parC의 돌연변이)를 가지고 있는 것으로 나타났다. 그러나 대부분의 non-MDR 균주는 항균제 내성인자를 포함하지 않는 것으로 나타났다. 우리의 결과는 A. baumannii 균주의 생물막 형성능력이 항균제 감수성과 상관관계가 적음을 시사한다. 또한 MDR A. baumannii 임상 분리주의 출현은 대개 항균제 내성과 관련된 유전자의 돌연변이나 또는 다양한 항균제 내성인자의 획득에 의한 것으로 사료된다.
본 연구에서는 세균의 항균제 내성기전을 연구하기 위해 일개의 대학병원에서 분리된 Enterobacter cloacae를 대상으로 extended spectrum ${\beta}$-lactamase (ESBL) 및 16S rRNA methyltransferase 유전자를 검출하고 항균제 감수성 양상을 조사하였다. 대상균주 중 총 8 균주가 CTX-M-15형 ESBL을 생성하는 것으로 확인되었으며 이 균주들 중 3 균주는 16S rRNA methyltransferase의 한 종류인 armA 유전자도 동시에 가지고 있는 것으로 나타났다. CTX-M-15형 ESBL 유전자와 armA 유전자를 동시에 가지고 있는 E. cloacae는 3세대 cephalosporin 계열 및 aminoglycoside 계열의 항균제 뿐 만 아니라 fluoroquinolone 계열의 항균제에도 내성을 보였다. 더구나 이러한 항균제 내성 유전자들은 플라스미드를 통해 다른 세균으로 전달 될 수 있어 다제내성 세균의 출현 및 확산을 촉진 할 수 있다. 따라서 E. cloacae를 대상으로 지속적인 항균제 내성 유전자를 모니터링 하는 것은 항균제 내성 확산방지를 위해 중요할 것으로 사료된다.
본 연구에서는 한국의 닭에서 분리된 E. coli 균주들로부터 퀴놀론계 항생제 내성을 나타내는 균주를 분리 동정하고 그 내성 기전과 유병률에 관하여 조사하였다. 또한 multilocus sequence typing (MLST)을 이용하여 E. coli 균주들의 분자생물학적 성상을 분석하였다. 항생제 감수성 테스트에서 63.5% (54/85) 의 E. coli 균주들에서 퀴놀론계 항생제 내성률을 보였다. 또한 퀴놀론계 항생제 내성을 보이는 54개 모두에서 gyrA 유전자의 sense mutations과 parC 유전자의 $57^{th}$, $80^{th}$, or $84^{th}$residues에서 점돌연변이를 관찰할 수 있었다. MLST를 통한 분석에서 E. coli ST는 parE 유전자의 염기치환과 깊은 상관관계를 보이는 것으로 관찰되었다. 이 결과들을 바탕으로 우리가 먹는 가축 및 가금류에 대한 무분별한 항생제 사용은 항생제 내성균의 증가와 유전변이를 초래함을 알 수 있었다. 따라서 식용 동물에 대한 지속적인 감시와 모니터링을 통하여 항생제 내성균의 확산방지를 통제하는 것이 필요할 것으로 사료된다.
Acinetobacter calcoaceticus-baumannii (Acb) complex에 속한 종들은 빈번하게 병원감염 및 기회감염을 일으킨다. 또한 다제내성인 경우가 많아 이 균들의 감염증 치료를 위한 항균제 선택이 매우 제한적이다. 본 연구에서는 ciprofloxacin 내성 Acinetobacter species 53균주를 대상으로 fluoroquinolone 내성기전을 조사했다. 항균제 감수성 양상을 조사하기 위해 디스크확산법이 시행되었다. Fluoroquinolone 내성과 관련된 유전자 및 돌연변이 검출을 위해 PCR과 염기서열분석이 이루어졌다. 본 연구에서 수집된 53균주의 ciprofloxacin 내성 Acinetobacter 중 47균주가 gyrA 유전자의 83번째 serine 아미노산 잔기와 parC 유전자의 80번째 serine 아미노산 잔기가 leucine 잔기로 치환된 sense mutations 가지고 있는 것으로 나타났다. gyrA와 parC 유전자에 sense mutations을 가지고 있는 47균주 중 44균주가 A. baumannii 였고 3균주는 A. pittii였다. 본 연구에서 조사대상이 되었던 Acb complex 균주들 중 plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants를 가지고 있는 균주는 한나도 없었다. 46 균주의 ciprofloxacin 내성 A. baumannii 는 A, B, 또는 F형의 banding pattern을 보였는데 이는 충청지역에 위치한 일개의 병원에 ciprofloxacin 내성 A. baumannii가 수평확산 되어 있음을 의미한다. Fluoroquinolone 내성 Acb complex 균주의 집락화 및 확산을 막기 위해서 다제내성 균주들을 대상으로 항균제 내성인자들을 지속적으로 조사하고 모니터링할 필요가 있을 것으로 사료된다.
This study was aimed to investigate occurrence and the antimicrobial resistance of Escherichia coli isolates obtained from the feces of wild birds in Daegu. In total, 98 E. coli isolates (17.9%) were obtained from 547 fecal samples of wild birds. The E. coli carried by the birds showed a relatively high rate of antimicrobial resistance to tetracycline (27.6%) and ampicillin (21.4%). Drug resistance of the isolates to the others (penicillins, cephems, carbapenems, aminoglycosides, quinolones, sulfonamides and phenicols) resulted in the rates less than 20%, and all isolates were susceptible to imipenem, ciprofloxacin, cefotetan, and amikacin. Approximately, 45% E. coli among the isolates were resistant to one or more drugs tested. The higher rate of tetracycline resistance led us to determine the prevalence of the tet genes (tetA, tetB, tetC, tetD and tetE) in the tetracycline-resistant E. coli isolates by using PCR. All isolates of the tetracycline-resistant E. coli contained at least one or more of these tet genes examined. The most prevalent one was tetA (59.3%), and followed by tetB (7.4%) when tested with the selected 5 tet genes. Except tetA and tetB, however, the remaining tet genes (tetC, tetD, and tetE) tested were not found in this study. Nine isolates among the tetracycline-resistant E. coli contained the two (tetA and tetB) determinants of tetracycline resistance, simultaneously.
The use of antimicrobial agents for additives or therapeutics is strongly associated with a prevalence of antimicrobial resistance in commensal Enterobacteriaceae. We aimed to characterize integrons in Enterobacteriaceae isolates obtained from chicken cecums in Korea. Moreover, the correlation between integron gene cassettes and antimicrobial resistance was also investigated. A total of 90 isolates the belonged to Enterobacteriaceae were recovered from chickens grown at Gyeongsang and Chungcheong provinces in Korea. Antimicrobial susceptibility tests were performed by the disk diffusion method. PCR and DNA sequencing were also performed to characterize the gene cassette arrays of the integrons. Of the 90 Enterobacteriaceae isolates tested, 39 (43.3%) and 10 (11.1%) isolates carried class 1 and 2 integrons, respectively. Whereas the class 2 integron did not contain gene cassettes, the class 1 integrons carried seven different gene cassette arrays. The class 1 integrons harbored genes encoding resistant determinants to aminoglycosides (aadA1, aadA2, and aadA5), trimethoprim (dfrA1, dfrA12, dfrA17, and dfrA32), lincosamides (linF), and erythromycin (ereA). Moreover, the presence of a class 1 integron was significantly related to a high resistance rate of antimicrobial agents, such as spectinomycin and trimethoprim. We confirmed that diverse class 1 integrons were widely distributed in Enterobacteriaceae isolates from chickens and directly contributed to the resistance to diverse antimicrobial agents in Korea.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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