식용 및 약용으로 이용되고 있는 우엉 지하부의 혈전 관련 활성과 항산화 활성을 평가하고자, 우엉의 ethanol 추출물 및 이의 순차적 유기용매 분획물을 조제하여 혈액응고 저해 활성, 혈소판 응집저해 활성, 인간 적혈구 용혈활성 및 in-vitro 항산화 활성을 평가하였다. 먼저 우엉 추출 수율은 10.94%로 다른 식용 및 약용식물보다 높았으며, ethanol 추출물의 경우 total polyphenol 함량은 5.01 mg/g으로 낮았으나, 694.53 mg/g의 높은 총당 함량을 나타내었다. 순차적 유기용매 분획의 경우, n-hexane, ethylacetate(EA), n-butanol 분획 수율은 각각 1.62, 0.42 및 5.98%로 나타났으며, 물 잔류물은 85.38%였다. 우엉 시료들의 혈액응고 저해활성을 TT, PT, aPTT를 측정한 결과, ethanol 추출물에서는 유의적인 활성이 나타나지 않았으나, EA 분획에서 강력한 TT, PT, aPTT 연장효과를 확인하였으며, 농도 의존적 혈액응고 저해활성을 확인하였다. 한편 물 잔류물에서는 내인성 혈액응고인자 활성화에 의한 aPTT 감소효과를 확인하여 혈전생성 촉진효과가 있음을 확인하였다. 혈소판 응집저해 활성평가의 경우, 우엉 ethanol 추출물 및 분획물들은 임상에서 사용하는 항혈소판제인 아스피린보다 강력한 저해효과를 나타내었으며, 특히 EA 분획은 정제되지 않은 상태에서도 아스피린의 2배 이상의 강력한 혈소판 응집저해능을 나타내었다. 또한 항산화 활성 평가 결과, EA 분획물은 DPPH 음이온, ABTS 양이온, nitrite에 대해 우수한 소거능 및 환원력을 나타내었다. 또한 우엉 추출물과 분획물들은 0.5 mg/mL 농도까지 인간 적혈구에 대한 특이한 용혈활성을 나타내지 않았다. 상기 결과들은, 우엉 EA 분획물이 천연물 유래의 안전한 항혈전제로 개발 가능함을 제시하고 있다.
In order to clarify the anti-thrombosis activity of rhubarb, we investigated the effect of stilbene derivatives from rhizomes of Rheum undulatun on cyclooxygenase activity. Stilbene derivatives (desoxyrhapontigenin, rhapontigenin, piceatannol) exhibited the inhibitory effects on COX-1, and desoxyrhapontigenin showed inhibitory effect on COX-2. These inhibitory effect may partially contributed to anti-thrombosis activity of rhubarb.
Animal models are important tools in thrombosis research and preclinical drug development. In recent studies, ferric chloride ($FeCl_3$) has been widely used to induce arterial thrombosis in a variety of species. The purpose of this study was to find an optimal concentration of $FeCl_3$ and validate this model suited better for thrombosis research. A small piece of filter paper, soaked in $FeCl_3$ solution (10, 20 or 35%, v/v, in distilled water) was topically applied on the carotid artery of SD rats to measure the time to occlusion (TTO) and thrombus weight (TW) to ascertain 35%, as an optimal $FeCl_3$ concentration ($8.63{\pm}0.92min$; p =0.000, $0.79{\pm}0.03mg/mm$; p =0.000, respectively). To validate this experimental model, Ginkgo biloba special extract EGb761 (5, 10 or 30 mg/kg) as a reference agent administered by peritoneal route for 1h prior to the induction of thrombosis, showed significantly delayed TTO in a dose dependent manner ($18.50{\pm}2.17$, $29.17{\pm}1.83$, and $38.00{\pm}1.79min$, respectively) and significantly reduced TW and repaired collagen fibre in the injured vessel compare to vehicle group. Our results provide a simple, reproducible and well controlled in vivo screening system to induce thrombosis in rats by the topical application of 35% $FeCl_3$ to assess the efficacy of the new anti-thrombotic agents.
케나프(Hibiscus cannabinus L.)는 척박한 건조 토양이나 습한 습지에서도 빠른 성장을 나타내어 섬유용, 제지용, 사료용, 식품용 및 환경 정화용 식물로 각광받고 있다. 국내에서는 전량 수입되어 온 케나프 종자를 대체하기 위해 국내 채종가능한 장대 품종이 최근 개발되어 재배되고 있으나 외국산 종자와 장대 종자의 생리활성 비교 평가는 이루어진 바 없다. 본 연구에서는 8종의 외국산 케나프 품종과 신품종 장대의 종자를 대상으로 에탄올 추출물을 제조하고 이들의 항혈전 활성, 항산화 활성 및 항당뇨 활성을 평가하였다. 케나프 종자 추출물의 총 폴리페놀 및 총 플라보노이드 함량을 분석한 결과, 장대 종자 추출물이 각각 14.4 mg/g 및 5.3 mg/g을 나타내어 외국산 품종의 종자 추출물보다 월등히 높은 함량을 보였다. 항혈전 활성평가를 위한 트롬빈 저해활성 측정에서는 IT 181215 및 IT 207877 종자 추출물에서 용매 대조구보다 1.92배 및 1.88배 증가된 thrombin time을 보였으며, 프로트롬빈 저해활성 평가에서는 홍마 종자 추출물을 제외한 모든 추출물에서 유사한 1.36~1.56배 증가된 prothrombin time을 보였다. 혈액응고인자 저해활성 평가에서는 IT 207886 종자 추출물에서 가장 강력한 3.04배 증가된 aPTT를 보였다. 장대 종자 추출물은 각각 1.46배, 1.38배, 2.37배 증가된 TT, PT, aPTT를 우수한 항혈전 활성을 보였다. 장대 종자 추출물은 ABTS 양이온 및 nitrite 소거능의 RC50값이 0.48 및 0.27 mg/ml으로 외국산 종자 추출물보다 우수한 항산화 활성을 보였다. 또한, α-glucosidase 저해활성 측정에서 장대 및 IT 181215 종자 추출물은 0.5 mg/ml 농도에서 10.3~10.6%의 저해활성을 보여 다른 품종의 종자 추출물보다 우수하였다. 본 연구결과는 케나프 품종별 종자 추출물의 항혈전, 항산화 및 항당뇨 활성에 대한 최초 보고이며, 케나프 신품종 장대 종자를 이용한 고부가가치 생물소재 개발이 가능할 것으로 기대된다.
식용 및 약용으로 이용되고 있는 함초를 이용한 고부가가치 제품개발을 위해, 동결건조, 열풍건조, 음건한 함초의 ethanol추출물을 조제하여 건조방법에 따른 성분 변화, 항산화 및 항혈전 활성 변화를 평가하였다. 동결건조, 열풍건조 및 음건 시료의 ethanol 추출효율은 각각 14.4, 13.2, 11.9%를 나타내어 동결건조시 수율이 음건에 비해 1.2배 높았다. 성분 분석결과, 동결건조 시료의 total polyphenol 함량은 4.6 mg/g으로 열풍건조 및 음건 시료보다 높았으며, total flavonoid 함량은 건조방법과 무관하게 4.2-4.4 mg/g을 나타내었다. 반면 총당 함량은 동결건조에서 가장 높게 나타났으며, 음건 시료는 동결건조 시료에 비해 53% 수준을 나타내었다. 환원당의 경우 열풍건조시료에서 가장 높게 나타났으며, 음건시료에 비해 3.3배 높게 나타났다. 항산화 활성 평가결과, 동결건조, 열풍건조 시료에서는 유사한 항산화 활성이 나타났으나, 음건 시료의 경우 환원력과 nitrite 소거능은 유의적으로 감소되었다. 항응고 활성의 경우, 모든 건조 시료에서 농도 의존적인 우수한 항응고 활성을 나타내었으며, 특히 열풍건조 시료에서 강력한 TT 및 aPTT 연장 활성을 나타내었다. 인간 혈소판에 대한 응집저해 활성과 적혈구 용혈활성은 건조방법에 따른 유의적인 변화는 나타나지 않았다. 본 연구결과는 함초의 유용 기능성 유지를 위해 열풍건조 및 동결건조가 필요하며, 특히 함초의 항혈전 활성을 이용하는 기능성 식품을 제조하고자 하는 경우 열풍건조를 이용하는 것이 경제적이면서 효과적임을 제시하고 있다.
Objectives: Formulas for treatment of yin or yang deficiency conditions have been commonly used in traditional Korean medicine. The aim of this study is to examine the possible inhibitory effects of yin- or yang-tonifying formulas on in vivo anti-platelet activity and in vivo anti-thrombotic activity. Methods: We tested the effects of 26 types of yin- or yang-tonifying formulas on platelet aggregation induced by collagen in human whole blood using the impedance method of aggregometry and accessed a biomarker of platelet activation using thromboxane $B_2$ immunoassay. We also tested the anti-thrombotic effects of effective candidates on experimental models of thrombosis in mice. Results: 3 types of yin-tonifying formulas and 3 types of yin-yang-tonifying formulas were selected to be the most effective candidates (p<0.01). Also, through in vivo study, the antithrombotic activities of Igyeong-tang, Gamisipjeondaebo-tang, and Gamisoyo-san-treated groups, with recovery rate of 60, 50, and 45.45%, respectively, were observed to be higher than those of the control group (saline, 36.8%) in mouse acute thrombosis. Conclusion: These results show that yin-tonifying formulas are more effective in anti-platelet and anti-thrombotic activity than yang-tonifying formulas.
Purpose: This study was performed to evaluate anti-thrombotic effect of Jogantanggagambang extract (JGTG). Methods: Blood flow rate through the regular volume of glass tube after the blood was diluted five times with ACD solution. Antithrombotic effect was calculated as a percentage of the experimental animal figure protected from the paralysis of hind legs or death of the mouse that was caused from the administration of platelet aggregation regent. Results: 1. JGTG inhibited the platelet aggregation induced by ADP, epinephrine, collagen and arachidonic acid as compared with the control group. 2. JGTG inhibited pulmonary embolism induced by collagen and epinephrine (inhibitory rate is 37.5%). 3. JGTG increased platelet number and fibrinogen amount significantly and also JGTG shortened PT and APTT significantly as compared with the control group in thrombus model induced by dextran. 4. JGTG increased blood flow rate significantly as compared with the control group in vivo. Conclusion: These results suggest that JGTG can be used for treating various female diseases caused by thrombosis.
Purpose: This study was performed to evaluate anti-thrombotic effect of Cheongyeoljohyeoltangkamibang extract (CYJHT). Methods: Blood flow rate through the regular volume of glass tube after the blood was diluted five times with ACD soulution. Antithrombotic effect was calculated as a percentage of the experimental animal figure protected from the paralysis of hind legs or death of the mouse that is caused from the administration of platelet aggregation regent. Results: 1. CYJHT inhibited the platelet aggregation induced by ADP, epinephrine, collagen and arachidonic acid as compared with the control group. 2. CYJHT inhibited pulmonary embolism induced by collagen and epinephrine (inhibitory rate is 50%). 3. CYJHT increased platelet number and fibrinogen amount significantly and also CYJHT shortened PT and APTT significantly as compared with the control group in thrombus model induced by dextran. 4. CYJHT increased blood flow rate insignificantly as compared with the control group in vivo. Conclusion: These results suggest that CYJHT can be useful in treating various female diseases caused by thrombosis, such as menstrual pain, menstrual disorder and so on.
각각의 나라는 민족의 공감성과 문화성이 깃든 고유의 술을 가지고 있으며, 우리나라에는 고유의 전통주 막걸리(탁주)가 있다. 본 연구에서는 주박을 이용한 고부가가치 향장소재 개발을 목표로, 상업적 시설에서 대량생산된 우국생 주박의 ethanol 및 열수 추출물로부터 n-hexane, ethylacetate, butanol을 이용한 순차적 유기용매 분획물과 물 잔류물을 조제한 후, 이들의 혈액응고 저해활성, 혈소판 응집저해 활성 및 인간 적혈구 용혈활성 및 항산화 활성을 평가하였다. 우국생 주박의 수분함량은 80.3%, pH 3.94, brix 13.0 및 알코올 함량은 약 1.8%이었으며, ethanol 추출의 경우 추출효율은 6.62%로 열수 추출의 2.1%보다 3.15배 높은 수율을 나타내었다. 총폴리페놀 및 총플라보노이드 함량 분석결과 주박 ethanol 추출물의 ethylacetate 분획물에서 가장 높은 함량을 나타내었으며, 특히 폴리페놀 함량은 매우 높게 나타났다(128 mg/g). 혈액응고 저해활성을 평가한 결과, ethanol 추출물의 ethylacetate 분획물에서는 5 mg/ml 농도에서 TT, PT, aPTT 모두 15배 이상의 연장된 응고시간을 나타내어 매우 강력한 thrombin, prothrombin 및 coagulation factor 저해활성을 나타내었다. 혈소판 응집저해능 평가에서는 ethanol 추출물의 butanol 분획 및 물 잔류물에서 항혈전제로 사용되고 있는 aspirin 보다 우수한 응집저해능을 확인하였다. 상기 10종 시료들은 0.5 mg/ml 농도까지 적혈구 용혈활성이 나타나지 않았으며, 양호한 radical 소거능을 나타내었다. 본 연구결과는 사료 및 비료로 활용되고 있는 우국생 주박의 활성분획물을 이용하는 경우 고부가가치 항혈전제 개발이 가능함을 제시하고 있다.
누룩은 전 세계적으로도 독특한 우리만의 발효제로, 전분 당화 및 발효미생물의 접종원으로 이용된다. Rhizopus oryzae KSD-815로 제조된 개량누룩(R4로 명명)은 발효제 특성 이외에 암세포 생육억제, 항비만 활성 등이 알려져 있다. 본 연구에서는 R4 누룩의 열수 및 ethanol 추출물과 이들의 순차적 유기용매 분획물을 조제하여 항혈전 활성을 평가한 결과, ethylacetate 분획에서 우수한 항응고 활성을 확인하였으며, 열수 추출물의 ethylacetate 및 butanol 분획은 인간 적혈구 용혈활성을 나타내지 않으면서 혈소판 응집저해 활성을 나타내었다. 본 연구결과는 R4 누룩이 항응고 및 혈소판 응집저해 개발의 유용자원으로 이용 가능함을 제시하고 있다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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