With a broad objective for the development of microbial based fertilizers, a total of 373 strains were isolated from rhizoplane and rhizosphere of pepper, tomato, lettuce, pasture, and grass. The efficacy of the isolates to augument overall plant growth was evaluated. After screening for their plant growth promotion and antagonistic properties in vitro efficient strains were further selected. The most efficient strains was characterized by 16S rRNA gene sequences and biochemical techniques and was designated as Bacillus subtilis S37-2. The strains facilitated plant growth and inhibited the plant phathogenic fungi such as Fusarium oxysporum (KACC 40037, Rhizoctonia solani (KACC 40140), and Sclerotinia sclerotiorum (KACC 40457). Pot based bioassay using lettuce as test plant was conducted by inoculating suspension ($10^5$ to $10^8cells\;mL^{-1}$) of B. subtilis S37-2 to the rhizosphere of lettuce cultivated in soil pots. Compared with non-inoculated pots, marked increase in leaf (42.3%) and root mass (48.7%) was observed in the inoculation group where the 50ml of cell mixture ($8.7{\times}10^8cells\;ml^{-1}$) was applied to the rhizosphere of letuce either once or twice. Antagonistic effects of B. subtilis S37-2 strain on S. sclerotiorum (KACC 40457) were tested. All the tested lettuce plants perished after 9 days in treatment containing only S. sclerotiorum, but only 17% of lettuce was perished in the inoculation plot. B. subtilis grew well in the TSB culture medium. The isolates grew better in yeast extracts than peptone and tryptone as nitrogen source. The growth rate was 2~4 times greater at $37^{\circ}C$ as compared with $30^{\circ}C$ incubation temperature. B. subitlis S37-2 produced $0.1{\mu}g\;ml^{-1}$ of IAA (indole 3-acetic acid) in the TSB medium containing L-tryptophan($20mg\;L^{-1}$) in 24 hours.
An allium rhizobacterium Serratia plymuthica AL-1 was previously selected as a biocontrol agent of allium white rot. The chitinase from S. plymuthica AL-1 produced in medium containing colloidal chitin was purified by ammonium sulfate precipitation (40~70%), affinity adsorption, column chromatography on DEAE-sephadex A-50 and sephadex C-200 gel filtration. The enzyme was purified 10.8-fold with a yield of 7.3% from the starting culture broth. The purified chtinase gave a single band on sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis, it's molecular weight was estimated to be 55 kDa. The optimum pH and temperature of the purified enzyme were pH 5.5 and $55^{\circ}C$, respectively and it is stable up to $50^{\circ}C$ and maintains around 90% of its activity for 60min. The enzyme were activated by $Ca^{2+}$, $Mn^{2+}$ and $Mg^{2+}$ and inhibited by $Cu^{2+}$, SDS, $\rho$-CMB, MIA, respectively. The purified chitinase showed broad spectrum of antifungal activities against plant pathogenic fungi Sclerotium cepivoruin, Alternana alternnta, Colletotrichum glceosporioidrs, Phoma sp., Sclerotinia sclerotiorum, Stemphylium solani, Fusarium oxysporium f. sp. niveum but rarely inhibited Phytophthora capsici and Pythium ultimum.. The purified chitinase from S. plymuthica AL-1 caused swelling, lysis, deceleration and degradation of the hyphal tips of S. sczerotiorum causing allium white rot. It suggest that S. prymuthica AL-1 chitinase play an important part in the bifunctional chitinase / lysozyme activity.
The only compounds with antagonistic activity via AT$_1$receptor, one of two subtypes of angiotensin II (AII) receptor, have been demonstrated to block the vasoconstriction effects of AII and thereby provide therapeutic potential. This initiated the search for compounds with high specific affinity to AT$_1$receptor and their effective screening methods. The radioligand binding assay for the AII receptor is regarded as the primary method for the evaluation of AT$_1$receptor antagonists for their activity. In this paper, we characterized the liver AT$_1$receptor and describe the efficient method of the radioligand binding assay using rat liver as a source of AT$_1$receptor. Equilibrium binding studies with rat adrenal cortex, adrenal medulla, liver and bovine adrenal showed that the specific bindings of [$^3$H] AII were saturable in all tissues and the Scatchard plots of those data were linear, suggesting a single population of binding sites. Hill slopes were very near to the unity in all tissues. Kinetic studies of [$^3$H) AII binding in rat liver homogenates yielded two association rate constants, 4.10$\times$10$^{7}$ M$^{-1}$ min$^{-1}$ and 4.02$\times$10$^{9}$ M$^{-1}$ min$^{-1}$ , with a single dissociation rate constant, 7.07$\times$10$^{-3}$ min-$^{-1}$ , possibly due to the partial dissociation phenomenon. The rank order of inhibition potencies of [$^3$H] AII binding in rat liver was AII>Sarile>Losartan>PD 123177. Rat liver homogenates revealed to have very high density of homogeneous population of the AT$_1$receptor subtype, as the specifically bound [$^3$H] AII was not inhibited by PD 123177, the nonpeptide antagonist of AT$_2$. The results of this study demonstrated that the liver homogenates from rats could be the best receptor preparation for the AT$_1$receptor binding assay and provide an efficient system for the screening of newly synthesized candidate compounds of AT$_1$receptor antagonist.
Bacteriocin-producing lactic acid bacterium having antagonistic activity against Bacillus cereus, was isolated from Kimchi. The selected strain was identified as Lactococcus lactis by the Bergey's manual and 16S rDNA analysis, and named as L. lactis ET45. The bacteriocin was stable in the pH range 3.0-11.0. The bacteriocin was active over a wide temperature range from $40^{\circ}C$ to $121^{\circ}C$. Optimal culture condition for producing bacteriocin was obtained by growing the cells on MRS medium at pH 7.5 and $30^{\circ}C$ for 18 h. Antibacterial activity of the bacteriocin was completely disappeared by proteinase K, and this means that bacteriocin is a proteinous substance. The molecular weight of bacteriocin was estimated to be about 4.5 kDa by tricine sodium dodecyl sulfate polyacryamide gel electrophoresis (TSDS-PAGE).
Kim, Kangmin;Lee, Hwa-Yong;Bae, Wonsil;Cho, Min;Ryu, Hojin
The Korean Journal of Mycology
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v.47
no.4
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pp.417-425
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2019
Biocontrol agents (BCAs) are widely used to protect plants from diverse biotic and abiotic stresses in agricultural and ecological fields. Among the various microbes, many subspecies of the gram-positive genus, Bacillus, have been successfully industrialized as eco-friendly biological pesticides and fertilizers. In the current study, we demonstrated that Bacillus thuringiensis C25 exhibited antagonistic effects on the mycelial growth of Rosellinia necatrix, a fungal phytopathogen. Scanning electron microscopy analysis revealed that B. thuringiensis C25 degraded the cell wall structures of R. necatrix mycelia. In the functional genomic analysis of B. thuringiensis C25, we annotated 5,683 genes and selected the gene sets that potentially encoded fungal cell wall degrading enzymes (CWDEs). The growth inhibition effects on R. necatrix were highly correlated with the transcriptional activity of the mycelial cell wall degrading genes of B. thuringiensis C25. The transcript levels of CWDEs, including CshiA, B, and Glycos_transf_2 genes in B. thuringiensis C25, were enhanced following co-cultivation with R. necatrix. In conclusion, our study suggested that B. thuringiensis C25 could serve as a suitable candidate for controlling R. necatrix and could facilitate elucidating the mechanisms underlying the antifungal activities of BCAs against phytopathogens.
Journal of the Korean Society of Food Science and Nutrition
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v.40
no.10
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pp.1384-1390
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2011
Chrysanthemum indicum L. (Asteraceae) is a common traditional herbal medicine used for the treatment of inflammation, hypertension, and respiratory diseases due to its strong antagonistic function against inflammatory cytokines. In this study, the effects of Chrysanthemum indicum L. extract (CIE) on the function of osteoblastic MC3T3-E1 cells and the production of local factors in osteoblasts were investigated. CIE (100 ${\mu}g/mL$) significantly increased the growth of MC3T3-E1 cells and caused a significant elevation of alkaline phosphatase (ALP) activity, and the deposition of collagen and calcium in the cells (p<0.05). The effect of CIE in increasing cell growth, ALP activity, and collagen content was completely prevented by the presence of 1 ${\mu}M$ tamoxifen, suggesting that CIE's effect might be partly involved in estrogen-related activities. These results indicate that the enhancement of osteoblast functionality by CIE may prevent osteoporosis and inflammatory bone diseases.
A soil bacterium, Bacillus subtilis HJ927, exhibiting strong antagonistic property against pathogenic fungi was isolated from pepper fields infested with Phytophthora capsici. Pepper plants inoculated with P. capsici revealed severe root mortality while plants co-inoculated with B. subtilis HJ927 and P. capsici showed drastically reduced root mortality. Low molecular weight substances released by B. subtilis HJ927 mediated the plant protective effect. The anti-fungal compounds released by B. subtilis HJ927 were identified as 3-methylbutyric acid, 2-methylbutyric acid, and methyl 2-hydroxy, 3-phenylpropanoate by high-performance liquid chromatography and gas chromatography-mass spectrometry. In addition to these compounds, B. subtilis HJ927 also produced ${\beta}$-1,3-glucanase, a hydrolytic enzyme implicated in antifungal activity.
A chitinolytic bacterium having a strong antagonistic activity against various pathogens including Phytophtora capsici was isolated from rhizosphere soil, and identified as Lysobacter enzymogenes (named as LE429) based on 16S rRNA gene sequence analysis. This strain produced a number of substances such as chitinase, ${\beta}-1$, 3-glucanase, lipase, protease, gelatinase and an antibiotic compound. This antibiotic compound was purified by diaion HP-20, sephadex LH-20 column chromatography and HPLC. The purified compound was identified as phenylacetic acid by gas chromatography-electron ionization (GC-EI) and gas chromatography-chemical ionization (GC-CI) mass spectrometry. In field experiment, pepper plants were treated by the strain LE429 culture (CB), neem oil solution (NO), combination (CB+NO) or control (CON). Plant height and number of branches, flowers and pods of pepper plant in CB treatment were generally highest, and followed by CB+NO, CON and NO. The fungal pathogens were strongly inhibited, while several insect pests were discovered in CB treatment. Any insect pests were not found, while all fungal pathogens tested were not suppressed in NO treatment. However, in CB+NO treatment, non incidence of fungal pathogens and insect pests were found. The strain LE429 producing secondary metabolites with neem oil should be a potential agent to control fungal diseases and insect pests.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.7
no.2
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pp.25-34
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1999
The effects of copper on the anaerobic degradation of propionate were studied using anaerobic batch reactors. The apparent inhibitory effects of copper on the anaerobic degradation of propionate could be observed from behaviors of intermediates, ultimate methane yield(UMY) and specific methanogenic activity(SMA) There was little inhibition at the concentration of $2.5mg\;Cu^{2+}/L$. Beyond this concentration, the inhibitory effects increased with increasing dose of coppers. The 50% inhibition of UMY and SMA occurred at copper dosage of 33.8 and $24.1mg\;Cu^{2+}/gVSS$, respectively. The inhibitory effect based on the UMY was gradually reduced with the operation time dueprobably to the acclimation of microorganisms and/or binding of the added copper by ligands(and possibly ion exchange sites)contained on the cell membrane and extracellular polymer matrix whereas it based on the SMA might exclude the this phenomena. Therefore, the methodology for interpretation of inhibition data based on the SMA was more accurated than the UMY. There was no inhibitory effect in batch reactors supplemented with sulfate due to an antagonistic action of the sulfate reducing bacteria. Propionate degradation was initially retarded for copper inhibited samples but it gradually degraded afterward. Based on the mass removal considering take into account the propionate to acetate conversion, propionate degradation may appeal more affected than acetate. This result revealed that the hydrogenotrophic methanogens were the most affected by copper.
Herbicidal activities of newly synthesized experimental compound, KSC-13906 [Erythro N-{(4,6-dimethoxy pyrimidin-2-yl)aminocarbgnyl}-2-(2-fluoro-1- hydroxy-n-propyl)benzenesulfonamide, US Patent 5,461,025], were investigated in greenhouse and field for development as a paddy herbicide. KSC-13906 exihibited excellent weeding effects and selectivity to rice under submerged paddy condition in geenhouse. At the application rate of $2.5{\sim}5$ g ai/ha treated on surface of water, KSC-13906 effectively controlled three annual weeds such as Echinochloa crus-galli var. oryzicola. Scirpus juncoides, and Monochoria vaginalis as well as five perennial weeds such as Cyperus serotinus, Sagittaria pygmaea, Eleocharis kuroguwai, Potamogeton distinctus, and S. trifolia. However, there was no effect on Aneilema keisak and Lindernia procumbens. Especially, KSC-13906 effectively controlled Echinochloa crus-galli var. oryzicola at growth stages ranging from pre-emergence to 3-leaf stage. Antagonistic interaction was found between pyrazosulfuron-ethyl and mefenacet, but not between KSC-13906 ana mefenacet. KSC-13906 had high selectivity to transplanted rice, but caused phytotoxic effect on direct-seeded rice when treated before 3-leaf stage. Herbicidal activity of KSC-13906 on the Echinochloa crus-galli var. oryzicola was 7-folds greater than that of pyrazosulfuron-ethyl in terms of relative dose ratio of the herbicides. These results suggest that KSC-13906 possesses selective herbicidal potency in rice.
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