The nucleotide sequences of spike (S) glycoprotein containing antigenic sites A and D of TGEV isolated in Korea were determined and compared with published sequences for TGEVs. The TGEV 133 and DAE5 strains had 97.40% nucleotide sequence similarity. The overall nucleotide sequence similarity of the 133 and DAE5 strains compared with other TGEV strains was between 96.86% and 99.15%. The similarity of the predicted amino acid sequence of the 133 and DAE5 strains was 94.93%. The TGEV 133 and DAE5 strains had 94.93-98.61% amino acid similarity with published sequences of other TGEV strains. The sequences of amino acid codons in the antigenic sites A and D were identical among all the viruses although there were several nucleotide changes in region containing antigenic sites A and D of Korean TGEV isolates. By phylogenetic analysis of the sequences, two Korean isolates 133 and DAE5 seemed to be derived from different lineages. These studies showed that a distinct difference in genome exists among TGEV field strains isolated in Korea.
The VP2 full gene of Korean infectious bursal disease virus(IBDV) strain, SH/92, three attenuated vaccine strains, Bur706, Bursine-2 and CEV/AC strains, were amplified by reverse transcriptase-polymerase chain reaction and sequenced and compared with published VP2 gene sequences of IBDVs. The VP2 nucleotide sequence similarity between SH/92 and three vaccine stains was 95.6~96.5% whereas the nucleic acid similarity among three vaccine strains was 97.5~98.5%. The amino acid sequence similarity of VP2 of SH/92 compared with three vaccine strains was between 94.4 and 97.6% while the amino acid similarity among three vaccine strains was between 97.4 and 98.4%. The amino acid similarity between SH/92 and classical virulent strain, 52/70 and STC strain was 96.4 and 96.5%, respectively. The serine-rich heptapeptide was conserved in CEVAC and Bursine-2 as well as SH/92 but not in Bur706. The phylogenetic tree developed from amino acid sequences showed that SH/92 was categorized with vv IBDVs(HK46, OKYM, KKI, UPM94/273, SH95) in one branch while three vaccine strains were catagorized with STC strain in the other branch.
단백질의 아미노산 조성은 생물정보학의 여러 문제를 해결하기 위한 기초적인 정보로 자주 활용된다. 본 논문에서는 아미노산간의 진화적인 연관성을 정의한 BLOSUM 행렬에서 유도한 유사도 함수를 사용하여 아미노산 조성을 결정한다. 이러한 방법은 생물학적인 연관성이 있는 단백질 서열일수록 비슷한 아미노산 조성을 갖도록 한다. 또한 단백질의 구조와 기능에 중요한 역할을 하는 위치-특이적인 아미노산의 분포를 추정하기 위해서 레이더나 음성 신호의 스펙트럼 분석에 사용되는 개념인 시간-종속 분석, 시간 해상도와 주파수 해상도의 개념을 적용하였다. 제안한 방법을 단백질의 세포내 위치예측에 적용하여 기존의 아미노산 조성 추정 방법을 사용하는 것보다 크게 향상된 성능을 보임을 확인하였다.
The ${\beta}$-lactamase inhibitory protein (BLIP) produced by Streptomyces exfoliatus SMF19 was purified(33 kDa) and the N-terminal amino acid sequence was determined as NH2-ATSVVAWGGNND. Genomic DNA library of S. exfoliatus SMF19 was constructed in pWE15 and recombinants harbouring the corresponding gene were selected by colony hybridization to the mixture of 36-mer oligonucleotide designed from the N-terminal amino acid sequence. The corresponding gene (bliX) was isolated on a 4-kb ApaI fragment of S. exfoliatus SMF19 chromosomal DNA and then sequenced. The bliX consisting of 1, 119bp encoded a mature protein with a deduced amino acid sequence of 342 residues and also encoded a 40-amino-acid signal sequence. No significant sequence similarity to bliX was found by pairwise comparison using various protein and nucleotide sequences.
Sperminogen was purified from the acid extracts of boar spermatozoa and partial peptide sequence of the 34-36 kd sperminogen was determined. Acid extracts of boar spermatozoa was gel-filtered through Sephadex G-75, and the 34-36 kd sperminogen was purified by preparative SDS-PAGE. The sperminogen bands were sliced out, and 34-36 kd sperminogen were eluted from the gel fragments and was subjected to peptide sequencing. Since the amino termini were blocked for Edman degradation method, internal amino acid sequences of the eluted 34-36 kd sperminogen were obtained from CNBr-digested peptides of sperminogen. Among several bands resolved on tricine SDS-PAGE, 14, 22 and 26 kd peptides were subjected to peptide sequencing. The ana1yzed amino acid sequences of the 26 and 22 kd peptides showed high homologies with that of the zona pellucida binding protein, Sp38, and the analyzed amino acid sequence of the 14 kd peptide showed neither sequence homology nor similarity with any known proteins.
본 연구에서는 이 전 연구에서 단일 탄소원과 질소원 및 에너지원으로 aniline을 이용하는 Delftia sp. JK-2에서 분리, 정제된 바 있는 C2,3O의 N-말단 아미노산과 DNA 서열을 분석하였다. Aniline에서 배양한 Delftia sp. JK-2에서 분리된 약 35kDa의 C2,3O의 N-말단 아미노산 서열을 분석 한 결과 $^1MGVMRIGHASLKVMDMDAAVRHYENV^{26}$로 Pseudomonas sp. AW-2와 Comamonas sp. JS765의 C2,3O와 일치하는 것으로 나타났다. 위에서 확인된 아미노산 서열을 바탕으로 제작된 primer와 JK-2의 total genomic DNA를 기질로 사용하여 PCR을 수행한 결과 약 950 bp의 유전자 증폭산물을 획득하였다. 이 증폭산물 중 정확히 확인된 890 bp의 염기서열을 분석한 결과 Delftia JK-2의 C2,3O유전자 염기서열은 Pseudomonas su. AW-2의 C2,3O와 일치하였으며 Comamonas sp. Js765의 C2,3O와 $97\%$의 높은 상동성을 나타내었다.
We have isolated and characterized a new insect chicken type (c-type) lysozyme gene from the common cutworm, Spodoptera litura. The full-length cDNA of Spodoptera lysozyme is cloned by rapid amplification of cDNA ends PCR (RACE-PCR). The isolated cDNA consists of 1039 bp including the coding region for a 142-amino acid residue polypeptide, which included a signal peptide of 21-amino acid residue and a mature protein of 121-amino acid residue. The predicted molecular weight of mature lysozyme and its theoretical isoelectric point from amino acid composition is 13964.8 Da and 9.05, respectively. The deduced amino acid sequence of Spodoptera lysozyme gene shows the highest similarity (96.7%) to Spodoptera exigua lysozyme among other lepidopteran species. Amino acid sequence comparison with other the c-type lysozymes, Spodoptera lysozyme has the completely conserved $Glu^{32}$ and $Asp^{50}$ of the active site and eight Cys residues are completely conserved in the same position as that of other lepidopteran lysozymes.
A ura5 gene encoding Orotate Phosphoribosyl Transferase (OPRTase) of Metarhizium anisopliae was cloned by PCR methods and sequenced. The sequenced ura 5 gene encodes a polypeptide of 234 amino acid residues. This deduced amino acid sequence showed high similarity to other fungi OPRTase and there was no intron sequence between ATG starting codon and TGA ending codon.
단백질의 세포내 위치와 단백질의 기능은 연관성이 크므로, 단백질의 세포내 위치 예측을 통해서 그 기능에 대한 정보를 얻을 수 있다. 예측 정확도를 높이기 위해서 아미노산 서열 정보이외의 외부 정보들을 효과적으로 이용하려는 연구가 활발하다. 본 논문에서는 아미노산 서열 유사성, 단백질 프로파일, 유전자 온톨로지, 모티프, 문헌 정보에 내재된 세포내 위치 예측 능력을 비교한다. 단백질간의 서열 유사성이 80% 이하인 PLOC 자료를 사용한 실험에서는 서열 유사성과 유전자 온톨로지를 이용하는 방법이 효과적이며, 94.8%의 예측정확도를 얻었다. 단백질 서열간의 유사성이 30% 이하로서 단백질간의 서열 유사성이 작은 BaCelLo IDS 자료는 유전자 온톨로지를 사용하는 것이 효과적이었고, 동물은 93.2%, 곰팡이는 86.6%의 예측정확도로 크게 향상된 성능을 얻었다.
Kim, Hyun-Jin;Yang, Ji-Young;Lee, Hyeon-Gye;Cha, Jae-Ho
Journal of Microbiology and Biotechnology
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제11권4호
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pp.693-699
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2001
An intracellular levansucrase gene, lscR from Rahnella aquatilis ATCC 15552, was cloned and its nucleotide sequence was determined. Nucleotide sequence analysis of this gene revealed a 1,238 bp open reading frame coding for a protein of 415 amino acids. The levansucrase was expressed by using a T7 promoter in Escherichia coli BL21 (DE3) and the enzyme activity was detected in the cytoplasmic fraction. The optimum pH and temperature of this enzyme for levan formation was pH 6 and $30^{\circ}C$, respectively. The deduced amino acid sequence of the lscR gene showed a high sequence similarity (59-89%) with Gram-negative levansucrses, while the level of similarity with Gram-positive enzymes was less than 42%. Multiple alignments of levansucrase sequences reported from Gram-negative and Gram-positive bacteria revealed seven conserved regions. A comparison of the catalytic properties and deduced amino acid sequence of lscR with those of other bacterial levansucrases strongly suggest that Gram-negative and Gram-positive levansucrases have an overall different structure, but they have a similar structure at the active site.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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