• 한국미생물·생명공학회지
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• 제17권5호
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• pp.436-439
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• 1989

고온, 호알칼리성 Bacillus속 K-17 균주에서 $\beta$-xylosidase 유전자를 pBR322를 벡터로 이용하여 클로닝시켰다. p-Nitrophenyl-$\beta$-xylopyranoside를 함유하는 LB 한천배지에서 노란색을 형성하는 대장균 형질전환주에서 재조합 플라스미드 pAX278을 분리하였으며, 본 pAX278은 pBR322와 고온, 호알칼리성 Bacillus K-17 균주 염색체 DNA의 5.0 kb HindIII절편으로 구성되어 있었다. Biotin으로 로식된 pAX278을 probe로 하여 상동성 시험을 하여 본 결과, pAX278에 존재하는 5.0 kb HindIII 절편은 Bacillus K-17 균주의 염색체 DNA HindIII 절편 중에서 5.0 kb 분만 아니라 0.9 kb 절편과도 상동성이 있었다. pAX278의 5.0 kb 절편을 pGR71에 연결시켜 B. subtilis에서도 발현시켰다. pAX278을 가지는 E. coli 균주가 생성하는 $\beta$-xylosidase는 균체외에 존재하였으며 그 효소학적 성질은 Bacillus속 K-17의 $\beta$-xylosidase와 동일하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권3호
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• pp.333-340
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• 2016

호알칼리성 protease를 분비하는 토양에서 분리된 Bacillus sp. DK1122 균주로부터 효소의 생산조건을 검토 후, 효소를 정제하고 특성을 알아보았다. 본 균주의 효소생산 최적 배지조성은 0.5% (w/v) glucose, 0.8% (w/v) yeast extract, 0.5% (w/v) polypeptone, 0.1% (w/v) K₂HPO₄, 0.02% (w/v) MgSO₄· 7H₂O, 1% (w/v) Na₂CO₃, 3% (w/v) NaCl, pH 9.0이었으며, 종배양액 0.5% 접종시 40℃에서 24시간 배양했을 때 효소 생산량이 가장 높았다. Bacillus sp. DK1122가 생산하는 alkaline protease를 70% 포화 ammonium sulfate로 침전시키고, CM-Sepharose column chromatography에 의해 23.9%의 수율에 2.8배의 정제도를 지니는 효소를 얻을 수 있었다. SDS-PAGE를 통해 정제된 protease는 27 kDa의 크기의 단일 subunit으로 확인되었고, 정제된 효소의 최적 pH는 9.0, 최적온도는 60℃였으며, 50℃에서 1시간까지 열에 안정하였고, 60℃에서 10 mM CaCl₂ 첨가 후 3시간까지 90%의 활성을 유지하여 Ca²⁺에 의해 열안정성이 증가하였다. 본 연구를 통해 정제된 호알칼리성 protease는 식품, 세제 및 관련산업에서의 응용성이 매우 높을 것으로 기대된다.

• KSBB Journal
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• 제14권6호
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• pp.718-723
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• 1999

알카리성 염색가공폐수를 처리하기 위햐여 아조염료인 Acid Red 1을 분해하는 호알카리성 균을 자연계에서 분리하였으며, 반응표면분석법인 SAS(statistical analysis system)프로그램을 이용하여 최적배양조건을 조사하였다. 염색공단 폐수처리장에서 배출되는 방류수 및 하천토양을 시료로 하여 알카리성(pH 10.0)배지에 성장하는 균 15종을 순수분리하였다. 그 중 탈색율이 가장 우수한 균주 하나를 선별하여 AR-1로 명명하였다. 탄소원(sucrose, fructose, galactose), 질소원(polypeptone, yeast extract) 및 인산원($K_2HPO_4$)이 분리균의 성장 및 탈색율에 미치는 영향을 조사한 결과, 1.0% fructose, 1.0% polypeptone, 1.0% yeast extract, 0.5% $K_2HPO_4$이 최적의 조건으로 나타났다. 반응표면분석에 의하여 염료의 생분해조건을 최적화하고자 배양온도와 배양시간에 따른 탈색율과 균성장의 특성을 모니터닝하였다. 탈색율은 34.73$^{\circ}C$에서 12.96시간, 균성장은 34.77$^{\circ}C$에서 12.97시간 배양시 각각 최적인 것으로 나타났다. 한편, 균성장과 탈색율을 다같이 만족할 수 있는 최적배양조건은 32.86~36.36$^{\circ}C$, 10.96~15.75시간으로 각각 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제26권3호
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• pp.195-199
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• 1998

Ethylene을 생성하는 호알칼리성 Bacillus sp. AIk-7를 분리 동정하였고, Bacillus sp. AIk-7의 ethylene 생성 경로와 전구 물질을 규명하기 위한 일환으로 이 균주의 intact cell과 cell-free system에서의 다양한 기질의 전환효과를 검토하였다. Intact cell과 cell-free system 모두에서 ethylene 생성을 극대화하기 위한 전환 조건은 3$0^{\circ}C$, pH 10.3으로 조사되었고, 기질 전환 효과를 검토한 결과 methionine(Met)과 1-amlnocyclopropane-1-carboxylic acid(ACC)가 압도적으로 많은 ethylene을 생성하였다. Cell-free system에서 저해제의 영향을 살펴본 결과 EDTA억제 효과로 2가 양이온이 필요함을, AOA 억제효과로 transaminase가 필요함을 알 수 있었다. Azide는 Met에서 ACC로의 단계에선 억제효과가 있었으나, ACC ethylene 전환 단계에선 오히려 활성효과를 보여주었다. 식물에서는 ACC에서 ethylene 과정은 Co$^{2+}$에 의해 저해받는데 반해 Bacillus sp. AIk-7은 Co$^{2+}$에 의해 ACC에서 ethylene과정이 10-70배 활성을 보였다. 이상의 결과를 통해 Bacillus sp. AIk-7에 의한 ethylene 생성 전구체는 Met과 ACC일 가능성이 있다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제16권4호
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• pp.275-281
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• 1988

호알칼리성 Bacillus sp. F204와 Bacillus sp. K 17간에 원형질체 융합에 의한 cellulase와 xylanase를 동시에 생산하는 균주를 개발하기 위하여 두 균주에 500 $\mu\textrm{g}$/ml NTG를 처리한 후 약제내성변이주 인 S20(Km$^r$, Cm$^r$과 G70(Str$^r$)을 분리하였다. 원형질체 형성율은 균체를 대수증식기 중기까지 배양하여 200$\mu\textrm{g}$/m1 Iysozyme으로 37$^{\circ}C$에서 30-45분간 처리하였을 때 약 95%였다. 재생배지에 0.4-0.5M sodium succinate, 0.5% casamino acid, 1.5% polvinylpyrrolidone, 25mM MgC1$_2$및 50mM CaC1$_2$를 첨가하므로 Bacillus sp. F204와 Bacillus sp. K17의 재생율은 각각 24.9%, 26.2%였다. 50mM $Ca^{++}$을 첨가한 30%의 PEG 6,000용액을 45$^{\circ}C$에서 5분간 융합시킴으로써 6.2$\times$$10^{-6}$ 빈도로 융합주를 얻었다. cellulase, xylanase 및 avicelase를 생산하는 융합주는 모균주와 비교하였다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제7권3호
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• pp.212-214
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• 1997

A new isolate, Bacillus sp. ALK-7 can synthesize ethylene from l-aminocyclopropane-l-carboxylic acid (ACC) as well as from methionine. The ACC has only been recognized as a key intermediate found in the metabolic pathway leading to ethylene formation in various plants. The efficiency of ethylene formation from the ACC by Bacillus sp. ALK-7 was about 2 times as high as that from the methionine. The reaction from ACC to ethylene formation was also shown to be mediated by the cell-free extracts of Bacillus sp. ALK-7.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제21권5호
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• pp.453-460
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• 1993

The extracellular bacteriolytic enzyme from alkalophilic Bacillus sp. YJ-451 was endopeptidase which hydrolyzes the peptide bond at the amino group of D-glutamic acid in the peptidoglycan. Protoplast transfomation system of B. subtilis by the lytic enzyme that differs, in mechanisms, from lysozyme which was used to transformation of B. subtilis was investigated. High protoplast yield was obtained from cells cultured in PAB at the late logarithmic growth phase.

• 동아시아식생활학회지
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• 제10권5호
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• pp.439-444
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• 2000

호알칼리성 방선균 Streptomyes sp. B-2를 Glucose Isomerse 생성을 위해 토양에서 분리했다. Glucose Isomerase(G.I)는 high fructose glucose syrup과 fructose의 생산을 위해서 식품 공업에서 아주 중요시되고 있는 효소이다. 호알칼리성 방선균 Streptomyces sp. B-2가 생성하는 glucose isomerase(G.I.)를 정제하였다. G.I.는 (NH$_4$)$_2$So$_4$분획, DEAE-cellulose, Sephadex G-200 chromatography하여 순수 분리 하였다. 순수분리된 G.I.는 electrophoresis에 의해 확인을 했다. SDS-acrylamide gel electrophoresis에 의해 정제된 효소는 single band를 보여주었다.

• 미생물학회지
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• 제47권3호
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• pp.194-199
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• 2011

알칼리성 protease를 생산하는 호알칼리성 균주를 분리하여 Bacillus pseudofirmus HS-54로 동정하였고, HS-54가 생산하는 알칼리성 protease를 ammonium sulfate 침전, DEAE cellulose chromatography, sephadex G-100 gel filtration을 통과시켜 정제하였는데, 정제된 protease의 분자량은 27 kDa이었다. 정제된 효소의 반응최적 pH는 10.0이었고 pH 7.0-11.0에서 비교적 안정하였다. 또한 정제된 효소의 반응최적 온도는 $50^{\circ}C$이었고 $10-55^{\circ}C$에서 안정하였다. 금속이온에 대한 영향은 $Ca^{2+}$와 $Mg^{2+}$ 등에 의해 효소활성이 촉진되었으나, $Hg^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$ 등에 의해서 효소활성이 저해되었다. 본 효소는 PMSF에 의해 강하게 저해를 받는 것으로 보아 serine protease에 속하는 것으로 판단된다.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제14권6호
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• pp.1142-1149
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• 2004

Streptococcus mutans has the capacity of inducing dental caries. Thus, to develop a novel way of preventing dental caries, a cell wall hydrolase-producing strain was isolated and its characteristics were investigated. Among 200 alkalophilic strains isolated from soil, 8 strains exhibited lytic activities against Streptococcus mutans. However, strain YU5215 with the highest cell wall hydrolase activity was selected for further study. Strain YU5215 was identified as a novel strain of Bacillus based on analyzing its 16S rDNA sequence and Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, and thus designated as Bacillus mutanolyticus YU5215. The optimal conditions for the production of the cell wall hydrolase from Bacillus mutanolyticus YU5215 consisted of glucose ($0.8\%$), yeast extract ($1.2\%$), polypeptone ($0.5\%$), $K_{2}HPO_{4}\;(0.1\%$), $MgSO_{4}{\cdot}7H_{2}O$ ($0.02\%$), and $Na_{2}CO_{3}\;(1.0\%$) at pH 10.0. Bacillus mutanolyticus YU5215 was cultured at 30^{circ}C for 72 h to produce the cell wall hydrolase, which was then purified by acetone precipitation and CM-agarose column chromatography. The molecular weight of the lytic enzyme was determined as 22,700 Da by SDS-PAGE. When the cell wall peptidoglycan of Streptococcus mutans was digested with the lytic enzyme, no increase in the reducing sugars was observed, while the free amino acids increased, indicating that the lytic enzyme had an endopeptidase-like property. The amino terminus of the cell wall peptidoglycan digested by the lytic enzyme was determined as a glutamic acid, while the lytic site of the lytic enzyme in the Streptococcus mutans peptidoglycan was identified as the peptide linkage of L-Ala and D-Glu.