Park, Jeong-Eun;Lee, Chang-Moon;Park, Hee-Jung;Kim, Gwang-Yun;Rhee, Joon-Haeng;Lee, Ki-Young
한국생물공학회:학술대회논문집
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한국생물공학회 2005년도 생물공학의 동향(XVI)
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pp.570-573
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2005
분무법을 이용한 alginate microsphere를 제조한 결과 구형을 형성하는 것을 관찰하였고, 이러한 alginate microsphere에서 alginate 농도가 증가할수록 크기는 작아지고, chitosan/alginate microsphere에서 chitosan의 농도가 증가할수록 그 크기가 증가하는 것을 확인하였다. OVA의 방출정도는 alginate microsphere에서 alginate 농도가 증가할수록 잘 이루어지지 않았고, HCl buffer에서보다 PBS buffer에서 방출이 잘되는 것을 확인하였다. Chitosan/alginate microspheres에서는 chitosan의 농도가 증가할수록 방출이 잘되지 않았고, 이는 alginate microsphere에서와 마찬가지로 PBS buffer에서 방출이 잘 이루어지는 것을 확인하였다.
해조류에서 추출한 다양한 생리활성을 갖고 있는 alginate를 유산균 담지체로 하여 유산균을 담지한 결과, 아주 작은 구형의 유산균 미세입자를 제조할 수 있었다. 유산균 미세입자는 위에서는 전혀 분해가 일어나지 않은 상태에서 유산균을 안정하게 담지하고 있다가 대장에서 분해가 됨으로써 유산균의 활성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 제조된 유산균 미세입자는 위에서 유산균의 사멸을 방지하므로서 효과적으로 대장까지 전달시킬 수 있을 것이다. 특히 유산균 미세입자는 유산균의 자체효과 외에 유산균을 담지하기 사용된 alginate와 코팅제로 사용된 키토산의 유용한 생리 활성을 모두 나타낼 수 있는 다기능성 유산균 미세입자로 응용이 가능할 것으로 판단된다.
Two types of alginate gel beads capable of floating in the gastric cavity were prepared. The first, alginate gell bead containing olive oil(Al-Oil), is a hydrogel bead and its buoyancy is attributable to olive oil held in the alginate gel matrix. The model drug, metronidazole(MZ), contained in Al-Oil was released gradually into artificial gastric fluid. The profiles of MZ release from Al-Oil shown initial burst and after 90 min they were about 100%. The second, alginate gel bead containing curdlan microsphere(Al-C), is a gel bead with curdlan-MZ microsphere in the matrix. To sustained release rate of drug, alginate bead were prepared curdlan microsphere containing MZ. Results demonstrated that sustained delivery of MZ over 2h can be easily achieved while the bead remained float. The release properties of prepared alginate beads are applicable not only for sustained release of drugs but also for targeting the gastric mucosa.
Alginate microspheres, containing fluorescein isothiocyanate-bovine serum albumin (FITC-BSA) or green fluorescent protein (GFP) were prepared and used as a model drug to develop the oral vaccine delivery system. The alginate microspheres were coated with poly-L-lysine or chitosan. Two methods, w/o-emulsion and spray, were used to prepare alginate microspheres. To optimize preparation conditions, effects of several factors on the particle size and particle morphology of microsphere, and loading efficiency of model antigen were investigated. In both preparation methods, the particle size and the loading efficiency were enhanced when the concentration of sodium alginate increased. In the w/o-emulsion preparation method, as the concentration of Span 80 was increased from 0.5% to 2%, the particle size was decreased, but the loading efficiency was increased. The higher the emulsification speed was, the smaller the particle size and loading efficiency were. The concentration of calcium chloride did not show any effect on the particle size and loading efficiency. In the spray preparation method, the particle size was increased as the nozzle pressure $(from\;1\;kgf/m^2\;to\;3\;kgf/m^2)$ and spray rate was raised. Increasing calcium chloride concentration (<7%) decreased the particle size, in contrast to no effect of calcium chloride concentration on the w/o-emulsion preparation method. Alginate microspheres prepared by two methods were different in the particle size and loading efficiency, the particle size of microspheres prepared by the spray method was about $2-6\;{\mu}m$, larger than that prepared by the w/o emulsion method $(about\;2{\mu}m)$, and the loading efficiency was also higher with spray method. Furthermore, drying process for the microspheres prepared by the spray was simpler and easier, compared with the w/o emulsion preparation. Therefore, the spray method was chosen to prepare alginate microspheres for further experiments. Release pattern of FITC-BSA in alginate microspheres was evaluated in simulated intestinal fluid and PBS (phosphate buffered saline). Dissolution rate of FITC-BSA from alginate/chitosan microsphere was lower than that from alginate microsphere and alginate/poly-L-lysine microsphere. By confocal laser scanning microscope, it was revealed that alginate/FITC-poly-L-lysine microspheres were present in close apposition epithelium of the Peyer's patches of rabbits following inoculation into lumen of intestine, which proved that microspheres could be taken up by Peyer's patch. In conclusion, it is suggested that alginate microsphere prepared by spray method, showing a particle size of & $10\;{\mu}m$ and a high loading efficiency, can be used as a model drug for the development of oral vaccine delivery system.
스티렌/아크렬 라텍스 폴리머를 폴리에릴렌이민으 로 표면처 리하여 얻은 PEI-microspheres는 그 표면 화학적 특성이 효소의 고정화에 적합하여 배당체의 합성반응에 서 필요로 하는 alginate-enclosed micros spheres biocatalyst를 제조할 수 있었고 라텍스 폴리머 표변에 형성된 폴리에틸렌이민 피막은 효소 부근에 친수성 분위기를 유지하여 높은 효소활성을 나 타내었을 뿐만 아니라, 생성된 배당체가 효소에 접 근하여 가수분해되는 반응을 억제하여 배당체의 수 율과 농도를 크게 증가시 켰으므로 alginate-en closed microspheres에 의한 배당체의 합성반응이 연속생산공정으로 연구개발 될 수 있다.
Miamensis avidus에 대한 alginate Microsphere (Alginate MS) 경구백신의 넙치에 대한 효능을 침지와 주사경로의 공격감염으로 확인하였다. Trial 1에서는 불활화 M. avidus (IMa)와 IMa를 alginate로 코팅한 IMa+Alginate MS 를 사료와 혼합하였으며 총 5일 동안 3.75 × 106 cells/fish의 농도로 먹였다. 경구백신 투여 5주 후 침지로 공격감염했을 때, IMa+Alginate MS 그룹의 상대생존율 (RPS)은 50% (50% 해수 침지감염)와 37.5% (100% 해수 침지감염)였다. IMa 단독투여 그룹은 낮은 생존율을 보였다. Trial 2에서는 항원을 2.38 × 106 cells/fish의 농도로 5일간 나누어 먹였다. 경구백신 투여 2주 후에는 복강주사로 효능을 평가하였고, IMa+Alginate MS 투여구의 상대생존율은 30.8%였으며 IMa 단독투여 그룹은 백신의 투여효과가 전혀 없었다. 경구백신 투여 종료 5주 후 50% 해수에서 침지감염으로 공격감염 한 경우 IMa+Alginate MS 투여구의 상대생존율은 42.9%, IMa 단독투여 그룹의 상대생존율은 14.3%를 기록하였다. 본 연구의 결과는 Alginate로 M. avidus항원을 코팅함으로써 M. avidus항원을 단독으로 투여하는 것보다 넙치에 높은 방어력을 제공할 수 있음을 나타낸다.
In order to design the oral vaccine delivery system, we prepared the alginate micro spheres containing GFP (green fluorescent protein) as a model drug by spray method. To optimize the preparation conditions of microspheres, we investigated the effects of various parameters including nozzle pressure, nozzle opening angle, and concentrations of sodium alginate and calcium chloride. The prepared microspheres were evaluated by measuring their sizes, loading efficiency, and morphology. The particle size of microspheres was affected by the concentration of sodium alginate and calcium chloride, nozzle pressure, and nozzle opening angle. As the concentration of sodium alginate increased, GFP loading efficiency and particles size of microsphere also increased. However, it was observed to be difficult to spray the sodium alginate solution with concentration greater than 1.5% (w/v), due to high viscosity. The pressure over $3\;kgf/cm^2$ didn't affect the size of particles. As a result, the spraying method enabled us to prepare microspheres for oral vaccine delivery system. In this study, microspheres prepared with 1% (w/v) sodium alginate had greater loading efficiency and better spherical shape.
현탁상 효소반응기 (suspended bed enzyme react tor)에서 alginate-enclosed microspheres를 이용 하여 에틸 프룩토시드의 연속생산과 그에 따른 반융 기 모사로부터 조업 조건의 최적화를 검토하고 메탈 프룩토시드의 연속생산 공정에 관한 체계적인 자료 를 제시하여 효소법에 의한 메틸 프룩토시드 연속생 산의 상엽적 실용성을 제고하고자 하였다. 그 결과, 자당농도 $20.291mol/\ell$, 반응온도 $25^{\circ}C$.에서 최척 에 탄올 함량은 30% (v/v), 최적 pH는 4.8, 최적 효소 활성도는 2U/ml로 나타났으며, 연속생산으로 얻을 수 있는 메틸 프룩토시드의 최대 농도는 $28.4g/\ell$이며, 에틸 프룩토시드의 생산성과 놓도를 함께 고려 한 최척 공간 속도는 $0.1hr^{-1}$부근으로 판단되었고, 그때의 생산성은 $2g/\ell-hr$이며, 그 수율은 47.1 %이 였다.
경구투여를 통한 친수성 약물의 방출조절을 위하여 이중층으로 된 고분자 담체를 설계하였다. 생체고분자인 alginate와 chitosan은 각각 극성 흡수성분으로, poly(D,L-lactide)는 소수성 피막으로, 그리고 theophylline과 diclofenac sodium은 모델 약물로 사용하였다. 담체는 지연방출과 이어지는 지속방출을 위하여 외부 껍질은 poly(D,L-lactide)로, 내부중심은 약물과 함께 알지네이트 또는 키토산으로 구성되어진 이중층의 미립구 담체로 성형하였다. 담체와 약물간의 극성 조합으로 인한 담체의 모폴로지와 약물방출 거동을 조사하였다. 담체와 약물 그리고 pH 환경의 상대적 극성이 약물방출 특성에 상당한 영향이 있음을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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