바이오센서로 이용되는 산소센서에는 효소고정화막과 함께 반투성막이 필요한데, 이러한 두 층의 막은 취급이 쉽지 않아서 상업화하기가 불리하므로, 이 두 막을 하나의 적층막으로 제조하였다. cellulose triacetate/polycarprolactone(CTA/PCL)막에 1,1'-carbonyl diimidazole(CDI) 방법으로 glucose oxidase, ascorbate oxidase, pyrubate oxidase와 alcohole oxidase 등의 효소를 고정화시킨 다음, 그 위에 polyvinylalcohol을 알데하이드와 산과 혼합하여 적층방법으로 단일막을 제조하였다. 고정화된 이 적층막을 산소전극에 부착하여 glucose, ascorbate, pyrubate, ethanol의 농도에 따른 전류변화를 측정한 결과, 각각 5-10mmol 이내의 기질농도에서 $0.38{\sim}0.83{\mu}A$까지 r=0.995의 선형성을 나타내었다. 한편, 고정화된 적층막의 저장중 안정성은 glucose oxidase는 8주 후에도 56% 이상의 활성을 나타내고 있었으나 나머지 효소들은 효소의 안정성이 낮았다.
좀구멍버섯균(Schizopora paradoxa)은 백색 부후 균으로 망간이 배지에 첨가되지 않으면 MNP와 GOX는 동시에 생성되지 않았으며 고농도의 망간 첨가시 (40ppm)에는 기본적 농도(11.15ppm)에 비해 MNP와 GOX가 모두 높은 활성을 보였다. 그러나 망간농도에 따른 균사생장량에는 별 차이가 없었다. 구리와 veratryl alcohol에 대해서도 같은 실험을 실시하였으나 농도에 따른 MNP와 GOX의 변화가 상관관계를 갖지 않는 것으로 나타났다. MNP와 GOX의 생성조절과 관련하여 cAMP의 영향을 조사한 결과 cAMP생성효소 억제제인 atropine을 농도별로 배양액에 첨가시 정도의 차이는 있었으나 MNP와 GOX생성이 동시에 억제되었다.
A dose, 1g/kg of ethanol produced experimental hyperuricemia in mouse. Ginseng saponins were tested for their ability to alter the hepatic xanthine oxidase activity and the blood level of uric acid in the ethanol-treated mouse. Intraperitoneal injection of ginseng saponin 4mg/kg markedly decreased the xanthine oxidase activity in the ethanol-treated mouse liver. It was also observed that ginseng saponin reduced the blood concentration of uric acid in experimentally induced hyperuricemia by alcohol treatment. In vitro, it was found that a low concentration of ginseng saponin in the reaction mixture incresed the hepatic xanthine oxidase activity, while a high concentration inhibited both enzyme preparations of normal and ethanol treated mice. In contrast with the xanthine oxidase, uricase activity was not influenced by ginseng saponin as well as in vivo. These results suggest there is a possibility that ginseng saponin may have some therapeutic effect on gout and other hyperuricemia syndrome.
주류의 섭취가 산업화학물질의 생체 내 독성유발에 어떠한 영향을 미치는지를 검토하기 위해 흰쥐를 이용하여 15%에탄올을 6주간 섭취시킨 후, cyclohexane(CH)을 2일 간격으로 4회 복강 투여하고 24시간 후 다음과 같은 결과를 얻었다. CH의 투여로 인해 정상군과 비교하여 간 무게와 헐청내 xanthine oxidase활성은 증가되었고, 간 내 glucose-6-phosphatase활성은 감소되었다. 그리고 CH 대사효소인 cytochrome P450 dependent aniline hydroxylase와 alcohol dehydrogenase의 활성은 CH투여 후 유의적으로 증가되었으며, 알코올 전처치 후 CH투여군이 가장 높은 활성을 보였다. 미세구조적으로도 알코올 섭취군과 CH투여군 모두에서 조면소포체로부터 활면소포체로의 전환이 일어났으며, 전 실험군 중 알코올 전처치 후 CH투여군이 가장 높은 전환율을 보였다. 이러한 결과들로 볼 때, 병변을 초래하지 않는 수준의 알코올의 섭취는 CH대사활성을 증대시키는 것으로 판단되었다.
주박 추출물을 열수 및 에탄올로 추출하여 tyrosinase와 xanthine oxidase, ACE, 아질산염 소거능을 실험하였다. 주박 열수 및 에탄올 추출물의 tyrosinase 저해 효과는 85% 이상이었다. 아질산염의 경우에는 pH 4.2과 pH 6.0보다 pH 1.2가 높았으며, pH 1.2에서 열수 및 에탄올 추출물 모두 90% 이상의 소거능을 가지고 있었다. 주박 열수 및 에탄올 추출물의 xanthine oxidase 저해 효과는 매우 낮았고, 효과는 열수와 에탄올에 의해 차이가 없었다. 주박 열수와 에탄올 추출물의 ACE 저해 효과는 각각 약 43~53%와 36~47%를 보였다. 전체적으로 주박의 열수 및 에탄올 추출물은 tyrosinase저해, ACE 저해 그리고 아질산염 소거 효과를 가지고 있었으나, xanthine oxidase 저해 효과는 없는 것으로 나타났다. 따라서 주박은 화장품 원료로 가능성이 있으며, 추가적으로 식품 첨가물로써 사용 가능성이 있을 것으로 사료된다.
Objectives : Oxidative stress seems to play a major role in mechanisms by which ethanol causes liver injury. Previous studies have shown that treatment with Yinjinchunggan-tang (Yinchenqinggan-tang, YJCGT) has protective effects on alcoholic liver disease. The aim of this study was to investigate the protective effects of YJCGT on alcohol-induced oxidative stress. Materials and Methods : In vitro, we evaluated the inhibitory activities of YJCHT on DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl), xanthine oxidase, trypsin, and hyaluronidase. In a cell culture model, we measured cell viability and proliferation, and the activities of superoxide dismutase (SOD), and catalase (CAT) after YJCGT treatment in C34 and E47 cell lines, and HepG2 cells transfected with/ without cytochrome P450IIE1 (CYP2E1) gene. In vivo, we estimated serum level of hepatic biochemical markers, and alcohol concentration in the blood. Results : YJCGT showed significant free radical scavenging activity against DPPH and xanthine oxidase and decreased hyaluronidase activity effectively in vitro. YJCGT also increased cell viability, and proliferation in C34 and in E47 cell lines, and increased activities of superoxide dismutase, and catalase in C34 and in E47 cell lines. YJCGT reduced serum AST, LDH, and total cholesterol level in some of the results, and reduced blood alcohol concentration in vivo, as well. Conclusions : This study suggests that YJCGT has protective effects on oxidative stress by inhibiting alcohol-induced suppression of antioxidant enzyme activities.
The following results were drawn from the experiment conducted to see the effect of ginseng alcohol extract on the mitochondrial oxidation of the rat liver. 1) Mitochondrial oxygen consumption increased in the low concentration and decreased in the high concentration of ginseng alcohol extract. 2) When the mitochondria was destroyed mechanically or was swollen by low concentration of $AgNO_3$, mitochondrial oxygen consumption was inhibited in all concentration of ginseng alcohol extract. 3) Oxygen consumption of intact mitochondria increased in the low concentration but decreased in the high concentration of sodium deoxycholate. 4) Ginseng alcohol extract inhibited cytochrome oxidase activities of liver mitochondria. These results suggest that low concentration of ginseng alcohol extract activates the oxygen consumption of liver mitochondria by increasing the permeability of the mitochondrial membrane and high concentration of the extract inhibit the oxygen consumption by inhibiting the enzyme activity related to respiration.
After pretreatment with ginseng followed by induction of acute intoxication of alcohol, the activities of alcohol dehydrogenase (ADH), microsomal ethanol-oxidizing system (MEOS) and aldehyde dehydrogenase(Ald DH) increased respectively compared to the groups treated with alcohol alone. In case that ginseng was given to rats fed with 5% alcohol instead of water for 60 days, the activities of ADH and MEOS increased compared to the groups treated. On the contrary, the activity of Ald DH in mitochondrial fraction decreased to an extent of about 35% in chronic alcoholism, but after pretreatment of ginseng the activity was restored to the control level. On the other hand, the catalase activity was not significantly affected by either treatment. Ginseng butanol fraction significantly increased the serum isocitrate dehydrogenase activity which is inhibited by alcohol-treated in rat. Alcohol-induced lactate dehydrogenase activity was decreased to control level in liver by ginseng treatment. And the serum level of lactic acid also decreased by ginseng treatment in alcohol-intoxicated rat. Ginseng butanol fraction markedly decreased the xanthine oxidase activity in the ethanol-treated rat liver. It was also observed that ginseng reduced the blood concentration of uric acid on experimentally reduced hyperuricemia by alcohol treatment. Uricase activity was not affected by either treatment. Ginseng butanol fraction decreased the hepatic aniline hydroxylase activity which was induced by alcohol-treated rat. These results suggest that the treatment with ginseng can be promoted the recovery from alcohol intoxication and some therapeutic effect on alcoholinduced metabolic disease.
멥쌀로 탁주를 제조하여 발효과정 중에 변화되는 에탄올 및 포도당의 함량을 동시에 측정할 수 있는 바이오센서를 dual cathode electrode를 이용하여 제작하였다. Alcohol oxidase와 glucose oxidase는 nylon net에 고정화시켜 anode가 한 개이고 cathode가 두 개인 dual cathode electrode에 부착하여 용존산소가 소모되는 변화량을 측정하여 간접적으로 포도당과 에탄올의 농도를 동시에 측정할 수 있도록 하였다. 이 시스템의 최적 조건은 $35^{\circ}C$에서 pH 7.5인 0.1 M 인산 완충용액이었다. 바이오센서를 이용하여 측정한 값을 분광광도법과 gas chromatography를 이용한 값과 비교해 본 결과 유사한 것으로 나타났다. Dual cathode electrode를 이용한 바이오센서로 측정할 경우 다른 분석방법과 같은 복잡한 전처리 과정없이 두 가지 성분을 동시에 측정하는 것이 가능함으로써 신속하게 측정할 수 있었으며, 탁주와 같은 발효식품의 발효 중 변화하는 두 가지 성분을 동시에 측정할 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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