• 제목/요약/키워드: Agarose gel

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Exhausted Medium에 의한 각막상피 세포의 세포고사 유도 (Apoptosis in Human Corneal Epithelial cells induced by Exhausted Medium)

  • 김재민
    • 한국안광학회지
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    • 제5권1호
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    • pp.83-87
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    • 2000
  • 본 연구는 각막상피가 저절로 탈락해 나가는 과정을 이해하기 위해 사람의 각막상피 세포를 배양하여 배지의 영양이 고갈될 때까지 약 7일 정도 배지를 교환하지 않고 계속 배양하여 세포고사를 조사하였다. 영양이 고갈된 배지인 Exhausted Medium을 여과하여 새로운 각막 상피세포에 넣어 2일 정도 배양을 계속하였다. Exhausted Medium에서 배양된 세포를 수확하여 세포고사를 검정하기 위해 Agarose gel electrophoresis로 DNA 단편을 확인하고 세포고사를 초기에 감지할 수 있는 방법인 M30 $CytoDEATH^*$. Fluorescein으로 확인하였다. 또한 Exhausted Medium에 의한 세포고사의 유발 경로를 조사하기 위해 사이토카인에 의한 유도인자 중 가장 많이 알려진 FAS나 FAS Ligand에 의한 유발여부를 soluble FAS and FAS Ligand에 대한 sandwich ELISA로 조사하였다. 그 결과 전형적인 DNA Ladder패턴을 보였으며 M30 $CytoDEATH^*$. Fluorescein에도 선명하게 염색되어 세포고사를 확인할 수 있었다. 또한 soluble FAS and FAS Ligand ELISA Kit로 Exhausted Medium이 FAS와 관련이 있는지를 조사한 결과 거의 무관한 것으로 나타났다. 본 연구의 결과는 영양 부족상태의 배지는 각막상피 세포가 세포고사를 거쳐 소모되는데 FAS and FAS Ligand system과는 무관한 것으로 나타났다.

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자기 공명영상 시스템의 수소원자 공명 주파수법을 이용한 생체 내 열 전달 관찰 (In-Vivo Heat Transfer Measurement using Proton Resonance Frequency Method of Magnetic Resonance Imaging)

  • 조지연;조종운;이현용;신운재;은충기;문치웅
    • 전자공학회논문지SC
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    • 제40권3호
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    • pp.172-180
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    • 2003
  • 본 연구에서는 자기공명영상(MRI)에서 수소 원자핵의 공명주파수(PRF) 방법을 기반으로 인체 종아리 근육 외부의 열원에 의해 근육 내부로 열원이 전달되는 과정을 비침습적으로 관찰하는 방법을 제시한다. 열전달과정을 온도 변화로 측정하였는데 온도 영상의 안정성 및 보정 실험은 phantom을 이용하였고 온도의 변화는 phantom과 인체 모두에서 측정하였다. Phantom 실험은 agarose gel을 중탕하여 약 50℃까지 가열시킨 후 1시간의 냉각과정 동안 매 3분마다 데이터를 획득하였다. 인체 실험에서는 지원자의 종아리(the calf)에 hot pack을 이용하여 열을 전달하였다. Hot pack을 발열시키기 전에 기준 데이터를 1번 획득하고, 발열시킨 후부터 매 2분마다 30분 동안 데이터를 획득하였다. 획득된 영상 데이터는 위상차 영상으로 재구성된 다음 각 ROI에서의 평균 위상차를 관측하였다. 온도를 34.2∼50.2℃의 범위에서 변화시켰을 때 phantom의 위상차는 온도 변화에 대해 선형적으로 변하였다. 이 범위에서 측정된 온도의 해상도는 0.0457 radian/℃(0.0038 ppm/℃)였다. 인체 실험에서는 각 영상에서 hot pack과 가까운 위치의 평균 위상차가 hot pack과 먼 위치의 평균 위상차보다 작은 값을 나타냈다 이를 통해 같은 영상 단면에서도 열원(heat source)과의 거리에 따라서 온도 변화가 다르게 나타나는 것을 관찰할 수 있었다. 본 연구를 통해 PRF방법을 이용하여 MRI에서도 비침습적으로 인체 내부의 열전달과정을 관측하였고 이로서 온열치료 시 MRI가 임상적 이용 가능성이 있음을 확인하였다.

Quantitative Counting of Bifidobacterium spp. in a Sample Mixed with Lactobacillus acidophilus

  • Park, Young-Min;So, Jae-Seong
    • Journal of Microbiology and Biotechnology
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    • 제8권2호
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    • pp.182-184
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    • 1998
  • PCR was used for quantitative counting of Bifidobacterium spp. in a sample mixed with Lactobacillus acidophilus using two primer sets; one set for universal priming and the other set for Bifidobacterium specific priming. DNA products from two independent PCRs with DNA extracted from the mixed sample were found to be easily distinguishable from each other by agarose gel electrophoresis. The concentrations of PCR products correlated with the total number of bacteria and with the number of Bifidobacterium spp. present in the sample.

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Antioxidative Effects of Cichorium intybus Root Extract on LDL (Low Density Lipoprotein) Oxidation

  • Kim, Tae-Woong;Yang, Ki-Sook
    • Archives of Pharmacal Research
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    • 제24권5호
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    • pp.431-436
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    • 2001
  • The water extract of Cichorium intybus (WECI) showed a remarkable antioxidative effect on LDL, and inhibitory effects on the production of thiobarbituric acid reactive substance and the Degradation of fatty acids in LDL. Vitamin 1 and unsaturated fatty acids in LDL were protected by adding WECI from the effects of metal catalyzed LDL oxidation. From the results obtained, we conclude that LDL oxidation is inhibited in vitro by the addition of WECI, and that LDL is protected by WECI from oxidative attack, as shown by agarose gel electrohporesis.

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Codonoposide $1_c$ is a potent inducer of apoptosisin Human Leukemia cell line, HL-60.

  • Lee, Kyung-Won;Lee, Kyung-Tae;Park, Hee-Juhn;Choi, Jong-Won
    • 대한약학회:학술대회논문집
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    • 대한약학회 2003년도 Proceedings of the Convention of the Pharmaceutical Society of Korea Vol.2-2
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    • pp.159.2-159.2
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    • 2003
  • Codonopside lc is an active natural compound isolated from the roots of Codonopsis lanceolata (Campanulaceae), a Korean medicinal herb. In the present study, we investigated the in vitro effect of Codonopside 1c on the proliferation and induction of apoptosis in HL-60 human promyelocytic cells. When HL-60 cells were treated with Codonopside 1c, evidence of apoptotic features, including DNA fragmentation, formation of DNA ladder in agarose gel elecrophoresis and increse of annexin V binding, were obtained. (omitted)

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대장균에 발현된 Serratia marcescens의 Nuclease의 정제와 세포내 분포 (Purification and Cellular Localization of Extracellular Nuclease of Serratia marcescens Expressed in Escherichia coli)

  • 김외연;이훈실;서숙재;조무제;이상열;김재원
    • 미생물학회지
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    • 제32권2호
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    • pp.147-154
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    • 1994
  • Serratia marcescens가 세포외로 분비하는 nuclease의 유전자가 발현된 Escherichia coli JM107을 배양하여 다량의 효소를 정제하였다. Matrex green gel과 heparin agarose gel column chromatography법으로 약 50배 정제한 효소는 분자량이 29KDa였으며, 전기영동 상에서 단일 띠를 보였다. 이 단백질을 이용하여 polyclonal antibody를 만들고, 면역조직화학법으로 세포내의 분포를 조사하였다. Nuclease는 주로 세포막에 존재하였고, 이를 토대로 효소가 세포질에서 합성된 후 세포막으로 빠르게 이동함을 알 수 있었다. 이 결과는 세포의 막분획에서 효소의 활성의 대부분이 회수되며, 면역블럿 방법으로 효소의 대부분이 세포막에서 검출된다는 결과와 일치하였다.

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마름병 병원균 Pseudomonas solanacearum의 병원성 상실요인에 관하여 (Determinant Involved in the Loss of Pathogenicity in Wilt - Inducing Pseudomonas solanacerum)

  • 김을제;윤경란;이영하;이청호;박지창;최광태
    • 한국연초학회지
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    • 제12권1호
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    • pp.9-18
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    • 1990
  • To study the determinants which are involved in the loss of pathogenicity in wilt-inducing Pseudomoms solamcewum, several physlologica I functions were compared in a virulent P. solanacearum strain and an avirulent, spontaneously derived mutant strain. The polyacrylamide gel electrophoresis showed the distinction between two strains in the patterns and the relative intensity of proteins produced intracellularly or extracellularly. Enzyme assays showed that the level of polygalacturonase activity in the culture filtrate of the avirulent mutant was markedly reduced, while carboxymethylcellulase(rondoglucanase) activity in both strains were nearly negligible. These results suggest that the loss of pathogenicity in mutant strain is attributed in part to the reduced production of polygalacturonase. In audit ion, comparative analyses by agarose gel electrophoresis of DNA molecules isolated from both strains show that the pathogenicity genes of p. solanaceerum are not located on plasmid but are on chromosome.

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Megabase-sized DNA isolation and electrophoretic karyotype of fusarium oxysporum schlecht

  • Park, Min-Seon;Min, Byung-Re
    • Journal of Microbiology
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    • 제33권2호
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    • pp.132-135
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    • 1995
  • To investigate the electrophoretic karytype of Fusarium oxysporum, intact chromosomal DNA was separated by pulsed-field gel electrophoresis (PEGE). DNA extraction from nulcei, mycelia and protoplasts were compared with one another and with the quantity and the suitability for PFGE separation in agarose gel. As a result, the most useful extracting method for intact DNA was found to be that from protoplasts. By varying the electrophoretic conditions, 8 chromosomal DNA bounds were resolved. Using the Schizosaccharomyces pombe and Saccharomyces cerevisiae as size standards, the size of Fusarium oxysporum chromosomes was estimated to range from approximately 0.6 Mb TO 6.7 Mb, and total genome size was 26.7 Mb. The suitability of electrophoretic karyotyping as a tool for strain characterization is discussed.

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A Second Thioltransferase of Schizosaccharomyces pombe Contains Glutathione S-transferase Activity

  • Kim, Hong-Gyum;Park, Eun-Hee;Lim, Chang-Jin
    • BMB Reports
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    • 제32권6호
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    • pp.535-540
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    • 1999
  • Two types of the thioltransferase (also called glutaredoxin) have been previously detected in the cytosolic extract of Schizosaccharomyces pombe, a fission yeast. Previously, the one with a smaller molecular mass (14kDa) was purified and characterized. In the present study, the second thioltransferase was purified. The purification procedure included ammonium sulfate fractionation (40-80%), Sephadex G-200 gel filtration, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-50 gel filtration, and glutathione-agarose affinity chromatography. The purified enzyme showed a single band on SDS-PAGE, and its molecular mass was determined to be 23 kDa. It utilizes various compounds as substrates, including 2-hydroxyethyl disulfide. Interestingly, we found that the purified thioltransferase also contains significant glutathione S-transferase activity.

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Xanthomonas sp. YL-37의 Alkaline Protease 유전자의 클로닝 (Cloning of a Alkaline Protease Gene from Xanthomonas sp. YL-37)

  • 이대희;김수경;이승철;윤병대;황용일
    • 한국미생물·생명공학회지
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    • 제23권2호
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    • pp.145-149
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    • 1995
  • For the purpose of developing a new biodegradable detergent, we have isolated a gene encoding wide-range temperature applicable alkaline protease from Xanthomonas sp. YL-37 (Lee et al., 1994, Kor. J. Appl. Microbiol. Biotechnol.). An alkaline protease gene was isolated from the gene bank that was prepared from the chromosomal DNA of Xanthomonas sp. YL-37. From the results of agarose gel electrophoresis and a restriction enzyme mapping, a 2.7 kb DNA fragment containing the alkaline protease gene was inserted in the plasmid pUC9. Extracellular activity of a clone having alkaline protease gene was detected on SDS-polyacrylamide gel with activity staining assay. The molecular weight of alkaline protease was determined to be about 64 kDa from 11% SDS-PAGE analysis. Alkaline protease activity, produced from E. coli which harboring the plasmid, showed no difference at reaction temperature 20, 30 and 40$\circ$C, respectively. This result showed that alkaline protease produced from E. coli harboring the plasmid was apparently the same as that of Xanthomonas sp. YL-37.

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