• 한국미생물·생명공학회지
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• 제25권2호
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• pp.151-158
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• 1997

For the production of potent chitinolytic enzyme from bacteria, screening was carried out. Of 100 samples from soil, fresh water and sea water collected from the Kyung-gi area, 7 strains of chitinolytic bacteria were isolated. Among them, Aeromonas hydrophila 5-3K showed the highest chitinolytic activity. Culture conditions of Aeromonas hydrophila for the production of chitinolytic enzyme were inverstigated and lytic enzyme was fractionated by the use of ammonium sulfate and Sephadex G-100. Maximum production of chitinolytic enzyme was obtained at pH 7.0 and 30$\circ$C with chitin concentration between 0.2% and 1.0%. Conditions for the enzyme production were optimized including fermentor cultivation. The chitinolytic system of Aeromonas hydrophila 5-3K was composed of two enzymes, chitinase and chitobiase.

• Applied Biological Chemistry
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• 제44권4호
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• pp.251-256
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• 2001

난용성 인산염을 가용화 시킬 수 있는 경제적이고 효율적인 생물비료를 개발하기 위하여 난용성 인산염 가용화능이 우수한 미생물을 염류 집적 및 인산과다처리 재배지로부터 분리하였다. 이 분리균주의 생리 생화학적인 특성을 조사한 결과 Aeromonas hydrophila DA57로 동정되었다. Aeromonas hydrophila DA57은 hydroxyapatite, tri-calcium phosphate 와 같은 난용성 인산염을 모두 가용화한다. 난용성 인산염의 분해능이 최대가 되는 배양 온도와 배양초기 pH는 각각 $30^{\circ}C$와 5.0이었으며, 탄소원으로 glucose를 3% 첨가시 가용화능이 높았다. 배양 pH가 감소함에 따라 가용화된 유리인산의 함량이 증가하였고 gluconic acid의 생성이 확인되었다. 따라서 난용성 인산염의 분해가 우수한 새로운 Aeromonas hydrophila DA57를 분리하였고, 이는 하나의 생물비료원으로 활용이 가능하리라고 사료된다.

• 한국식물병리학회지
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• 제11권3호
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• pp.258-264
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• 1995

Production and some properties of chitinolytic enzymes were investigated by 80% ammonium sulfate precipitates (crude enzymes) from culture supernatant of antagonistic bacteria, Chromobacterium violaceum strain C-61 and strain C-72, Aeromonas hydrophila, Aeromonas caviae, and Serratia marcescens. The maximum production of chitinase was obtained from the 3-day culture at 28$^{\circ}C$ in C. violaceum stains, the 6-day culture in S. marcescens, and the 2-day culture in A. hydrophila and A. caviae. In the optimum culture periods, chitinase activity of C. violaceum strains C-61 was 1.5, 5.5, 12.0 and 11.3 times higher than those of strain C-72, S. marcescens, A. hydrophila and A. caviae, respectively. However, N,N'-diacetylchitobiase activity was 3.2 times higher in S. marcescens than in C. violaceum strain C-61, and that of Aeromonas spp.was very low. On gels containing glycol chitin, chitinase of C. violaceum strains showed four isoforms of 54-, 52-, 50- and 37-kDa, whereas there were four isoforms of 58-, 52-, 48- and 38-kDa in S. arcescens, three isoforms of 70-, 58- and 54-kDa in A. hydrophila and six isoforms of 90-, 79-, 71-, 63-, 58- and 38-kDa in A. caviae. The chitinase of C. violaceum strain C-61 was most active at pH 7.0 and at 5$0^{\circ}C$ and was stable in ranges of pH 5.0~10.0 for 2 hours and of 0~5$0^{\circ}C$ for 30 min.

• Journal of Life Science
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• 제11권2호
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• pp.63-69
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• 2001

bacterium having high abilities to solubilize in-organic phosphate was isolated from cultivated soils. The strain was identified as Aeromonas hydrophila DA33, based on the physiological and biochemical properties. The optimum temperature and initial pH to solubilize insoluble phosphate in sucrose minimal medium were 3$0^{\circ}C$ and pH 5.0, respectively. In these conditions, phosphate-solubilizing activities of the strain against two types of insoluble phosphate were quantitatively determined. When glucose was used for carborn source, the strain had a marked mineral phospahte solubilizing activity. Inorganic phospahte solubilization was directly related to the pH drop by the strain. Analysis of the culture medium confirmed the production of gluconic acid as the main organic acid released by Aeromonas hydrophila DA33.

• 한국어병학회지
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• 제1권1호
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• pp.5-30
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• 1988

잉어과(科) 어류(魚類)인 잉어, 이스라엘잉어, 붕어와 뱀장어 틸라피아에서 발생되는 세균성질병(細菌性疾病)에 대하여 그 병인(病因)을 밝혔고, 감염과 발병과정을 해명함과 동시에 진단상(診斷上)기준이 되는 특징을 명백(明白)히 하여 효과적인 예방과 치료대책을 강구한 종합적인 연구 결과(結果)이다. 전국각지(全國各地)에서 발생되는 잉어, 이스라엘잉어, 붕어, 뱀장어 및 틸라피아 등 450마리의 병어(病魚)에 대하여 외부증상(外部症狀), 해부학적 소견, 병리조직학적 소견, 병원균분리 동정 등으로 세균성질병진단(診斷)의 기준이 되는 특징을 명백(明白)히 하였다. 이들 세균성질병은 체표(體表)나 지느러미에 충혈(充血)이나 출혈(出血)이 심하고, 간장(肝臟) 비장(脾臟) 신장(腎臟)에 울혈이 일어나고 장관에 염증(炎症)이 일어나며, 각조직(各組織)에 출혈성염증(出血性炎症)이 관찰된다. 증상(症狀)이 심한 것은 각조직(各組織)의 괴사(壞死) 및 궤양(潰瘍)이 형성된다. 이상과 같은 병어(病魚)를 세균학적(細菌學的)으로 조사(調査)한 결과(結果) Aeromonas hydrophila와 Edwardsiella tarda균이 순수 분리 동정되었다. 특히 주기적으로 조사(調査)한 222마리의 병든 뱀장어에서 177병원균주(病原菌株)를 분리하였는데 Aeromonas hydrophila가 29.94% Edwardsiella tarda가 48.58%, Flexibacter columnnaris 21.47% 였다. 이중 Flexibacter columnnaris는 아가미가 부식된 뱀장어의 아가미에서 분리되었다. 이들 분리(分離) 균주중(菌株中훌) Aeromonas hydrophila와 Edwardsiella tarda를 실험어류에 접종한 결과(結果)같은 병(病)이 발생되었고, 발병된 실험어류에서 접종한 병원균이 분리되었다. 광주, 부산 등지에서 수집한 병든 뱀장어로부터 분리되어 Aeromonas hydrophila병으로 진단된 뱀장어는 지느러미와 체표(體表)에 출혈(出血)이 일어나 부어올랐으며, 장(腸)과 위(胃)에도 염증(炎症)이 일어나고 있었다. 장(陽)의 내용물은 병원균이 혼합(混合)된 점액물질(粘液物質)로서 장염(腸炎)을 유발시키고 있었다. 분리된 A. hydrophila의 5균주(菌株)를 비단잉어와 붕어에 접종한 결과(結果), 3-4일만에 발병되어 죽었으며 죽은 실험어는 모두 A. hydrophila병의 특징을 나타냈다. 병든 뱀장어에서 Edwardsilla tarda균이 분리되어 Edward병으로 진단된 병어는 체표(體表)에 농양(膿瘍)이 형성(形成)되며 농(膿)과 같이 다수의 빈식세포(貧食細胞)가 집결(集結)되어 있었다. 증상이 진행됨에 따라 조직(組織)이 융해되어 농양(膿瘍)이 대형화(大形化)되었다. 내장(內臟)에 있어서도 크고 작은 농양(膿瘍)이 보였는데 특히 위장(胃腸)에는 흰 결절(結節)이 다수 나타났다. 병리조직학상으로는 진행중인 크고 작은 육아종(肉芽腫)이 다수 관찰 되었으나, 장염은 관찰되지 않았다. 병든 뱀장어중 아가미가 부식되고 Flexibacter columnaris가 분리되어 Columnaris병으로 진단된 뱀장어는 체색(體色)이 약간 희게 보일뿐 다른 외부증상(外部症狀)인 출혈(出血)과 충혈(充血)은 전혀 나타나지 않았다. 해부하여 보아도 아가미가 약간 부식되어 있었으나 각 내장은 정상적(正常的)이었으며 부패취(腐敗臭)가 전혀 나지 않았다. 이들 세균성 질병을 치료하기 위해서는 20ppm의 chloramphenicol 또는 kanamycin에 1시간 약욕시키거나, 하루에 chloramphenicol 75mg을 1kg에 해당되는 병어에 5~7일간 투여하여야 한다. 포르말린 처리한 Aeromonas hydrophila항원을 잉어에 주사한 결과 3주에서 6주사이에 높은 응집가를 나타냈으며, 비록 응집가(凝集價)는 감소되었지만 18주까지 지속되었다. 포르말린 처리한 Edwardsiella tarda항원을 틸라피아에 주사한 결과 높은 응집가(凝集價)가 나타났으나, 포르말린 처리한 Edwardsiella tarda균을 현탁시킨 용액에 침지(浸漬)시킨 틸라피아는 응집가(凝集價)를 나타내지 않았다.

• 한국어병학회지
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• 제5권2호
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• pp.77-85
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• 1992

본 연구는 비단잉어의 Aeromonas hydrophila에 대한 면역 반응 기구를 알기 위하여 균체항원 FKC와 HKC를 복강내에 주사하여 수온 차이별로 항체의 형성 과정과 방어력의 변화 정도를 조사하였다. 그리고 Hydrocortisone, Oxytetracycline, Chloramphenicol 및 Ascrobic acid를 항원 투여한 어체에 추가로 복강주사하여 이들 약물이 비단잉어의 면역 형성능에 미치는 영향을 조사 하고자 하였다. 수온 조건별로 살펴보면 $24^{\circ}C$ 실험구에서 FKC는 4주째, HKC는 3주째 가장 높은 응집 항체가를 나타내었고 면역 처리후 4주 및 8주째 공격 실험에서 상대 생존율은 FKC가 75~100%인 반면에 HKC는 50~60%로 나타나 $24^{\circ}C$ FKC 투여구가 비단잉어의 면역 반응에 효과가 있는 것으로 나타났다. FKC를 투석한 후 상기 약물을 추가로 복강주사한 결과 3주째의 응집 항체가가 4~32로서 대조구의 128보다 낮았으며 또한, 4주 및 8주째 공격 실험 결과에서도 상대 생존율이 25~50%로 나타나 대조구의 75%보다 낮았으므로 비단잉어의 면역 반응에서 이들 약물은 투여 방법에 따라 면역 형성능의 저하 작용이 있는 것으로 나타났다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권2호
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• pp.130-139
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• 2016

지렁이의 장내로부터 분리한 미생물 중에서 지질을 가수분해하는 활성이 높은 미생물을 선발하였으며, 동정하여 Aeromonas hydrophila PL43으로 명명하였다. A. hydrophila PL43이 생산하는 지질분해 효소의 정제는 황산암모늄 침전, DEAE-sepharose FF 이온교환 크로마토그래피, Sepharose S-300HR 겔 크로마토그래피 단계로 수행하였으며 최종적으로 정제한 지질분해 효소는 p-nitrophenyl butyrate (pNPB)를 기질로 사용했을 때, 84.5배로 정제되었고 효소 활성의 회수율은 3.7%이었다. p-nitrophenyl palmitate (pNPP)를 기질로 사용했을 때에는 56.6배로 정제되었고 효소 활성의 회수율은 2.5%이었다. SDS-PAGE를 수행한 결과, A. hydrophila PL43이 생산하는 지질분해효소의 분자량은 약 74 kDa으로 추정되었다. 지질분해 효소의 pH에 대한 영향은 pNPB와 pNPP 기질에서 pH 8.0에서 최대활성이 보였고 pH 7.0−10.0에서 안정하였다. pNPB를 기질로 사용한 경우에는 50℃에서 pNPP를 기질로 사용한 경우는 60℃에서 최대 활성을 나타냈으며, 정제한 지질분해 효소는 20−60℃에서 안정성을 나타내었다. 정제한 지질분해효소는 금속이온 Co²⁺, Cu²⁺, Fe²⁺에 의해서 효소활성이 억제되었으며, EDTA의 metal chelating에 의해 활성이 회복되었다. Inhibitor에 의한 저해는 효소 활성부위의 serine 잔기와 결합하여 효소 활성을 억제하는 PMSF에서 가장 우수하였으며 효소 활성부위의 aspatyl 잔기에 결합하여 효소활성을 억제하는 pepstatin A는 농도가 높아짐에 따라 효소활성을 저해하였다. 따라서 정제한 지질분해 효소는 활성부위에 serine 잔기와 aspartyl 잔기가 있는 것으로 사료되었다. 정제한 지질분해 효소의 K_m 값과 V_max 값은 pNPB를 기질로 사용 했을 때 K_m 값과 V_max 값은 1.07 mM과 7.27 mM/min이고, 기질이 pNPP일 때 K_m 값과 V_max 값은 1.43 mM 과 2.72 mM/min이었다.

• 한국미생물생명공학회:학술대회논문집
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• 한국미생물생명공학회 1986년도 추계학술대회
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• pp.522.3-523
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• 1986

A Screening test was carried out for chitin-decomposing bacteria. In 100 samples from soil, fesh water and sea water, 7 strains of Chitinolytic bacteria were isolated. 5-3K which exhibited the highest chitinase activity was identified as Aeromonas hydrophila and cultural conditions from maximum chitinase production were determined. Optimum Chitinase production was obtained at pH 7, 33eC and with chitin concentration greater tham 0.2% Under optimal conditions, high yields of Chitinase were obtained in 16-30 hours. Chitinase was purified by ammonium sulfate precipitation and sephadex G-100 gel-filtration from the culture filtrgte.

• 한국어병학회지
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• 제30권2호
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• pp.89-96
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• 2017

현재 국내에 유통되고 있는 담수관상어의 대부분은 수입에 의존하므로 외래 병원체 및 항생제 내성균의 유입 가능성이 크다. 본 연구에서는 담수에 상재하는 균으로 인수공통 감염이 가능하며 어류에 조건성병원균으로 작용하는 Aeromonas hydrophila를 다양한 수입 담수관상어로부터 분리하여 특성을 분석하고자 하였다. 수입 후 1일 이내의 관상어를 수족관으로부터 수집하여 0.5% NaCl을 포함하는 TSA 배지에 간, 신장, 비장을 도말하여 세균을 분리하였다. 세균의 형태, 생화학적 특성 및 starch- ampicillin agar (SA)에서의 clear zone 형성 유무에 근거하여 분리 균의 약 70%인 226 균주가 Aeromonas spp.로 확인되어 이들의 분리 빈도가 매우 높음을 알 수 있었다. 이들 중 9균주를 선택하여 16S rRNA gene의 sequence를 분석한 결과 모두 A. hydrophila로 동정되었으며 API 20E test에서 대부분의 분리 균주는 amygdalin, D-melibiose, D-sucrose, trisodium citrate, L-arabinose 이용에서 표준 균주와 차이를 보였다. 10종의 항균제에 대한 분리 균주의 감수성을 디스크 확산법으로 확인한 결과 amoxycillin, ampicillin에 대해서는 모든 균주가 저항성이었고 florfecicol에 대해서는 모두 감수성이었다. 그러나 7균주는 tetracycline 계통의 항균제와 erythromycin, nalidixic acid 등에 복합내성을 보였다. A. hydrophila로 동정된 9개 분리 균주를 금붕어에 인위 감염을 실시한 결과, 3 균주는 5일 이내에 60~80%의 폐사를 나타내었다. 이러한 결과는 다약제내성이면서 독력이 있는 Aeromonas가 수입관 상어를 따라 국내로 유입되어 전파될 수 있으므로 수입상에서 소비처로 판매되기 전의 방어적 조치가 필요하다는 것을 시사한다.

• 한국어병학회지
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• 제22권3호
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• pp.391-400
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• 2009

Genetic identification of 17 fish-derived Aeromonas strains was attempted using 5 housekeeping genes. 16S rRNA, gyrB, rpoD, dnaJ and recA genes from the 17 strains were amplified, and total of 85 amplicons were sequenced. DNA sequences of the strains and type strains of the 17 Aeromonas homology groups were used for genetic identification and phylogenetic analyses. None of the strains was identified as a single species using the 16S rRNA gene, showing the same identities (average = 99.7%) with several Aeromonas species. According to gyrB, rpoD, dnaJ, and recA, 9 strains and RFAS-1 used in this study were identified as A. hydrophila and A. salmonicida, respectively. However, the other strains were closely related to 2 or more Aeromonas species (i.e., A. salmonicida, A. veronii, A. jandaei, A. media and A. troda) depending on the genetic marker used. In this study, gyrB, rpoD, dnaJ and recA gene sequences proved to be advantageous over 16S rRNA for the identification of field Aeromonas isolates obtained from fish. However, there are discrepancies between analyses of different phylogenetic markers, indicating there are still difficulties in genetic identification of the genus Aeromonas using the housekeeping genes used in this study. Advantages and disadvantages of each housekeeping gene should be taken into account when the gene is used for identification of Aeromonas species.