Adenosine deaminase 유전자를 연초의 형질전환용 표지유전자로 활용할 때 형질전환체 여부를 매우 빠르고 눈으로 직접 색깔을 확인할 수 있는 새로운 방법이 개발되었다. ADA 효소는 독성인 adenosine 유도체를 비독성인 inosine 유도체와 암모니아로 변환시키는데, 이때 형성된 암모니아를 phenol-nitoprusside와 alkaline-hypochlorite 용액을 이용하여 청색으로 변환시켜 96 well plate상에서 1시간 내에 형질전환체 여부를 쉽게 확인할 수 있게 되었다. ADA효소의 substrate로서 9-D-arabinofuranosyl adenine, cordycepin, 2'-deoxyadenosine, adenosine and xylofuranosyl adenine이 모두 가능하였으며, substrate 용액의 최적조건은 adenosine 10 mM과 pH 7.5이었다. 특히 형질전환체는 ADA효소의 inhibitor인 deoxycoformycin이 함유되어 있는 용액 속에서는 adenosine을 inosine과 암모니아로 변환시키지 못해 색깔의 변화가 없었는데, 이는 형질전환체에서 색깔의 변화는 ADA효소의 작용 때문에 일어나는 것을 의미한다. 따라서 본 연구결과는 ADA 표지유전자가 도입된 형질전환체의 확인에 있어서 GUS gene system과 같이 눈으로 직접 확인할 수 있을 뿐만 아니라 매우 작은 크기의 형질전환체 절편으로 쉽고, 빠르면, 값싸게 확인할 수 있게 되었다.
In clinical practice, the diagnosis of tuberculosis (TB) continues to be a challenge. The goal of this study was to evaluate the reliability and impact of adenosine deaminase (ADA) enzyme testing as a biochemical marker in the continued management of suspected tuberculosis in a limited resource setting hospital. The retrospective data were collected from 2018 to 2021 and comprised the results of all ADA test assays done in the laboratory. All types of body fluids received for ADA testing were analyzed. Over the course of two years, 1461 samples for ADA assay testing were received. The average age of the study population was 56.69±11.7 years, with males accounting for the majority of the subjects (55.72%). Pleural fluid (N=817, 55.92%) was the most common type of sample received for the ADA assay. 114 (13.95%) of the 817 pleural fluid samples were found to be positive. A survey was conducted to obtain physician's response regarding reliability on ADA testing. 100% of them reported the supportive role of ADA levels in the workup of patients with suspected tuberculosis. In a limited resource setting, the ADA test, in conjunction with clinical and other laboratory findings, can help physicians to initiate early treatment in hospitals for the benefit of patients.
Adenosine deaminase (ADA) has been utilized as the label in devising a potentiometric homogeneous assay for riboflavin and riboflavin binding protein (RBP). The proposed homogeneous assay method employs an ADA-biotin conjugate as the signal generator and an avidin-riboflavin conjugate as the signal modulator in the solution phase. The catalytic activity of the ADA-biotin conjugate is inhibited in the presence of an excess amount of the avidin-riboflavin conjugate, and the observed inhibition is reversed in an amount proportional to the concentration of RBP added. When the analyte riboflavin is added to this mixture of ADA-biotin, avidin-riboflavin and RBP, the activity of the enzyme conjugate is re-inhibited in an amount proportional to the concentration of riboflavin. Since the enzyme label used in this system is ADA, an ammonia-producing enzyme, a potentiometric rather than photometric detection scheme is used to monitor the enzymatic activity in the assay.
연구배경 : 흉막삼출의 원인 규명을 위한 방법으로는 여출액과 삼출액을 감별하기 위한 흉막액 통상검사, 세균학적검사, 세포학적검사 및 흉막생검 등이 시행되고 있다. 그러나 상기한 여러가지 방법으로도 약 10~20% 에서는 그 원인을 정확히 진단하기 어려운 실정이다. 본 연구는 상기한 여러 가지 방법을 통해 확진된 흉막삼출 환자를 대상으로 흉막액의 adenosine deaminase (ADA) 활성도 및 carcinoembryonic antigen (CEA)을 측정함으로써 흉막삼출 원인질환의 감별진단에 있어서의 임상적 의의를 평가하고자 하였다. 방법 : 1984년 3월부터 1987년 3월까지 연세대학교 의과대학 세브란스 병원에 삼출성 흉막염으로 입원하였던 환자중, 진단이 확실한 결핵성 흉막염 환자 61예, 폐결핵에 동반된 흉막삼출 17예, 악성 흉막염으로 확진된 17예, 폐암 및 기타 장기암에 동반된 흉막삼출 22예, 부폐렴성 흉막삼출 7예로서 총 124예를 연구 대상으로 하여 흉막액 ADA 활성도 및 CEA 치를 병행 측정하였다. 결과: 1) 결핵성 흉막삼출의 ADA 활성도는 악성 흉막삼출에 비하여 의의있게 높았다. 2) 악성 흉악삼출의 CEA 치는 결핵성 흉막삼출에 비하여 의의있게 높았다. 3) 흉막액 ADA 활성도가 40U/L 이상이면서 CEA 치 12ng/mL 미만인 경우를 결핵성 흉막염의 진단 기준으로 삼으면 그 예민도는 86.9%, 특이도는 100%이었다. 흉막액 CEA 치가 12 ng/mL 이상이면서 ADA 활성도가 40U/L 미만인 경우를 악성 흉막염의 진단 기준으로 하면 그 예민도는 76.5%, 특이도는 100%이었다. 결론 : 흉막액 ADA 활성도 및 CEA 치의 병행 측정은 흉막삼출 원인질환의 감별진단에 매우 중요한 지표로 삼을 수 있으리라 생각된다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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