The shortage of human organs for transplantation has induced the research on the possibility of using animal as porcine. However, pig to human transplantation as known as xeno-transplantation has major problem as immunorejection. Recently, the solutions of pig to human xenotransplantation are commonly mentioned as having a genetically modification which include alpha 1, 3 galatosyl transferase knockout (GTKO) and immune-suppressing gene transgenic model. Unfortunately, the expression level of transgenic gene is very low activity. Therefore, development of gene overexpression system is the most urgent issue. Also, the tissue specific overexpression system is very important. Because most blood vessels are endothelial cells, establishment of the endothelial-specific promoter is attractive candidates for the introduction of suppressing immunorejection. In this study, we focus the ICAM2 promoter which has endothelial-specific regulatory region. To detect the regulatory region of ICAM2 promoter, we cloned 3.7 kb size mini-pig ICAM2 promoter. We conduct serial deletion of 5' flanking region of mini-pig ICAM2 promoter then selected promoter size as 1 kb, 1.5 kb, 2 kb, 2.5 kb, and 3 kb. To analyze promoter activity, luciferase assay system was conducted among these vectors and compare endothelial activity with epithelial cells. The reporter gene assay revealed that ICAM2 promoter has critical activity in endothelial cells (CPAE) and 1 kb size of ICAM2 promoter activity was significantly increased. Taken together, our studies suggest that mini-pig ICMA2 promoter is endothelial cell specific overexpression promoter and among above all size of promoters, 1 kb size promoter is optimal candidate to overcome the vascular immunorejection in pig to human xenotransplantation.
The production of therapeutic proteins from transgenic animals is one of the most important successes of animal biotechnology. Milk is presently the most mature system for production of therapeutic proteins from a transgenic animal. Specifically, ${\beta}$-casein is a major component of cow, goat and sheep milk, and its promoter has been used to regulate the expression of transgenic genes in the mammary gland of transgenic animals. Here, we cloned the porcine ${\beta}$-casein gene and analyzed the transcriptional activity of the promoter and intron 1 region of the porcine ${\beta}$-casein gene. Sequence inspection of the 5'-flanking region revealed potential DNA elements including SRY, CdxA, AML-a, GATA-3, GATA-1 and C/EBP ${\beta}$. In addition, the first intron of the porcine ${\beta}$-casein gene contained the transcriptional enhancers Oct-1, SRY, YY1, C/EBP ${\beta}$, and AP-1, as well as the retroviral TATA box. We estimated the transcriptional activity for the 5'-proximal region with or without intron 1 of the porcine ${\beta}$-casein gene in HC11 cells stimulated with lactogenic hormones. High transcriptional activity was obtained for the 5'-proximal region with intron 1 of the porcine ${\beta}$-casein gene. The ${\beta}$-casein gene containing the mutant TATA box (CATAAAA) was also cloned from another individual pig. Promoter activity of the luciferase vector containing the mutant TATA box was weaker than the same vector containing the normal TATA box. Taken together, these findings suggest that the transcription of porcine ${\beta}$-casein gene is regulated by lactogenic hormone via intron 1 and promoter containing a mutant TATA box (CATAAAA) has poor porcine ${\beta}$-casein gene activity.
ErmSF는 235 rRNA에 존재하는 $A_{2058}$에 이중메틸화(dimethylation)시킴으로써 항생제가 부착되는 것을 억제하여 미생물에게 MLS (macrolide-lincosamide-streptogramin B)항생제에 대하여 내성을 나타내게 하는 ERM계열 단백질(Erm family protein)중의 하나이다. 다른 ERM 단백질과는 달리 ErmSF는 상당히 긴 N-말단부위 (N-terminal end region, NTER)를 가지고 있고 이겻은 RNA와 잘 결합하는 것으로 알려진 arginine이 약 $25\%$를 구성 하고 있다. ErmSF로부터 점차적으로 NTER을 절단하면서 절단된 단백질의 활성을in vivo에서 검색하였다. 다른 변이단백질과는 달리 R60번째까지 제거된 변이단백질은 활성이 많이 소실된 것을 in vivo상에서 관찰하였다. 이 단백질을 대량생산하여 정제하고 in vivo상에서 그 활성을 검색한 결과 wild type 단백질에 비해 약 $98\%$의 활성이 소실된 것을 밝혔다. 이러한 사실은 R60이 메틸화되는 아데닌 (methylatable adenine)의 근처에 존재하는 RNA와 작용하여 메틸화되는 아데닌이 활성화부위에 적절히 위치하도록 하는 역할을 담당한다는 것을 암시하고 있다.
북미산 S. commune UVMl-34의 A $\alpha$ 3 mating locus를 지니는 cosmid clone pSC13의 mating activity에 필요한 sequence 함유여부를 확인한 후 sequencing을 행하고 이에 대한 비교분석을 실시하였다. 그 결과 blast program을 사용한 전체 nucleotide 염기서열의 homology비교분석에서 남미산 1-71에 패하여 약 96%의 높은 homology를 나타내었으며, 1-71 A $\alpha$ 3 mating locus에서 모두 7개로 추정되는 exon의 염기서열의 비교실험에서도 거의 96% 이상에 이르는 homology를 나타내었다. 부분적으로는 AR (acidic rich region)에서 약 97%, HD (homeodomain)에서는 약 99%, BR (basic rich region)에서 약 97%, 그리고 Ser (serine rich regon)에서 약 95%의 높은 homology를 나타내어 지역간에 유전자상의 큰 변화는 나타나지 않는 것으로 확인되었다. 그리고 translated polypeptide sequence 를 이용하여 자생지가 다른 남미산 S. commune A $\alpha$ 3 mating locus 내의 Y-region은 비롯하여 다른 $A\alpha$ alleles내의 Y-region과 비교 분석한 결과 남미산에 대해 전체적으로 약 97%의 높은 homology를 나타내고 있지만 그 외 $A\alpha$ mating alllele gene의 Y-region과는 41~49%의 낮은 homology로 mating activity에 관여하고 있는 것으로 나타났다. 특히 mating에 있어 transcription regulator로 알려진 homeodomain에서는 약 98%의 homology가 나타남으로서 Z-region의 74%에 비하여 대륙간에 상당히 높은 유전자 보존상이 확인되었다. 또한 AR에서 97%, BR에서 100% 그리고 Ser에서도 98%의 상당히 높은 homology를 지니는 사실을 확인하였다. 이러한 결과로 보아 남미와 북미에 자생하는 같은 mating allele type간에는 상당히 높은 비율의 염기서열 보존이 이루어지고 있음을 알 수 있었으며, 비록 다른 $A\alpha$ alleles간의 비교 이지만 다른 mating alleles간의 약 50% homology와 비교할 때 보다 상당히 높은 결과로 보인다. 특히 homeodomain motif의 비교에서 Y1을 비롯한 다른 mating allele gene과도 85% 이상의 높은 homology를 나타내었으며 그 외 AR, BR, Ser 부위에서는 10~50%에 이르는 낮은 비율로 나타났다.
We studied relation between the clothing pressure applied by foundations(waist nipper, girdle, body suit) on the waist of bodies and muscular activity, feeling of tightness. The main results were summerized as follows ; 1. Clothing pressure applied by foundations was high in order of girdle>waist nipper>body suit, also clothing pressure was higher back than front and side, sitting on the chair than standing posture, ventral flection than repose. Individual differences, even if size of body was equal, were shown in clothing pressure applied by foundations with subcutaneous fat's amount in measuring region. 2. The muscular activity of rectus abdominis than obliquus externus abdominis was more affected by foundations in all kinds of postures and motions. Amplitude of electromyogram was high sitting on the chair than standing posture, but there was little difference with motion variation. The wearing girdle strongly affected on the muscular activities of rectus abdominis and obliquus externus abdominis as compared with waist nipper and body suit. 3. The value for feeling of tightness by wearing waist nipper was higher than girdle and body suit. Also the case when sitting on the chair and ventral flection, the value for feeling of tightness was high. When the foundations were on the body, most tightened on the region of the body was anterior abdominal region.
FORMOSAT-3 was launched in April of 2006. It consists of six low earth orbit (LEO) satellites that will be eventually deployed to an orbit at 800 km height. Its scientific goal is to utilize the radio occultation (RO) signals to measure the bending angles when the GPS signals transect the atmosphere. The bending angle is then used to infer atmospheric parameters, including refractivity, temperature, pressure, and relative humidity fields of global distributions through inversion schemes and auxiliary information. The expected number of RO events is around 2500 per day, of which 200 events or so fall into the polar region. Consequently, the FORMOSAT-3 observations are expected to play a key role to improve our knowledge in the weather forecasting and space physics research in the polar region. In this paper, we use temperature profiles retrieved from FORMOSAT-3 RO observations to study the climatology of gravity wave activity in the polar region. FORMOSAT-3 can provide about 200 RO observations a day in the polar region, much more than previous GPS RO missions, and, hence, more detailed climatology of gravity wave activity can be obtained.
Purpose: The aim of this study was to identify the effects of the lower trunk stabilization exercise using neurodevelopmental technique (NDT) on muscle activity in lumbar region and balance in the patients with hemiplegia. Methods: Fifteen participants were allocated in two groups: NDT group (n=8) or control group (n=7). NDT group performed NDT exercise program, while control group conducted walking exercise. Both interventions were given for 30 minutes a day, 3 times a week, for 5 weeks. To measure the muscle activity in rectus abdominis (RA), external oblique (EO) and internal oblique (IO), electromyography (EMG) was used. And, Timed-Up and Go (TUG) test and Berg-Balance Scale (BBS) were performed to assess balance before and after intervention. Results: NDT group showed a significant improvement of muscle activity in RA and EO, while control group did not show significant changes in three muscles. Also, there was a significant difference in muscle activity of RA and EO between two groups. In BBS and TUG test, participants in two groups showed significant improvements after intervention. Especially, significant difference was observed in TUG test between two groups (p<.05). Conclusion: This study demonstrated that NDT exercise is an effective intervention to improve the muscle activity in trunk region and to increase balance in patients with stroke. Thus, we suggested that NDT exercise program would be a treatment intervention in stroke rehabilitation.
해산복족류의 소화관조직에 분포하는 단백질분해효소의 활성에 미치는 pH, 온도, 화학약제, 저온보존 등의 영향을 밝히므로서 그 생리 생태학적 관련 지식을 얻고, 나아가서 그 정제를 위한 몇가지 기본적인 성질을 구명코자 본 연구를 시도하였다. 실험 결과를 요약하면 다음과 같다. 1. 군소, 소라, 전복의 소화관조직에서 추출된 단백질분해효소의 활성최적조건에서의 활성을 보면, 산성역과 약산성역에서는 전복이 다른 두 복족류에 비하여 2배 혹은 그 이상 높았으며, 알카리성역에서는 군소가 다른 두 복족류이 비하여 6배 혹은 그 이상 높은 특징을 보였다. 2. 화학약제가 효소의 활성이 미치는 영향을 종합하여 보면, 대체로 금속이온중의 $Mn^{2+}$, 실험에 쓴 전 환원제, 킬레이트제중의 EDTA, SH 시약중의 DTT 등에 의하여 활성화하였고 금속이온중의 $Hg^{2+}$ 및 변성제중의 SDS 등에 의하여서는 공통적으로 조해를 받았다. 3. 이들 효소가 보인 활성능의 저온보존에 의한 영향을 보면, $0^{\circ}C$와 $-20^{\circ}C$에 보관하였을 때, 군소와 소라의 산성과 약산성역에서 최적활성조건을 보이는 효소들은 보관기간의 경과에도 영향을 보이지 않았지만 알카리성역에서 최적활성조건을 보인 효소들은 보관일수의 경과와 더불어 활성이 저하하여 불안정함을 알았다. 그러나, 전복의 약산성역에서 최적활성조건을 보이는 효소는 보관기간의 경과에도 활성에는 영향이 없었으나 산성과 알카리성역에서 최적활성조건을 보인 효소들은 보관기간의 경과와 더불어 활성이 저하하여 저온에서는 불안정함을 알 수 있었다.
Kim Se Na;Choi Jung Ho;Park Min Woo;Jeong Sun Joo;Han Kyung Sook;Kim Hong Jin
Archives of Pharmacal Research
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제28권8호
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pp.956-962
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2005
Leishmania virus (LRV)1-4 has been reported to produce a fusion of ORF2 and ORF3 via a programmed +1 frameshift in the region where ORF2 and ORF3 overlap (Lee et a/., 1996). However, the exact frameshift site has not been identified. In this study, we compared the frameshift efficiency of a 259bp (nt. 2565-2823), frameshift region of LRV1-4, and the 71 bp (nt. 2605-2678) sub-region where ORF2 and ORF3 overlap. We then predicted the frameshift site using a new computer program (Pseudoviewer), and finally identified the specific region associated with the mechanism of the LRV1-4's+1 frameshift by means of a mutational analysis based on the predicted structure of LRV1-4 RNA. The predicted structure was confirmed by biochemical analysis. In order to measure the frameshift efficiency, constructs that generate luciferase without a frameshift or with a+1 frameshift, were generated and in vitro transcription/translation analysis was performed. Measurements of the luciferase activity generated, showed that the frameshift efficiency was about $1\%$ for both the 259bp (LRV1-4 259FS) and 71 bp region (LRV1-4 71FS). Luciferase activity was strongly reduced in a mutant (LRV1-4 NH: nt. 2635-2670) with the entire hairpin deleted and in a mutant (LRV1-4 NUS: nt. 2644-2659) with the upper stem of the hairpin deleted. These results indicate that the frameshift site in LRV1-4's is in the 71 bp region where ORF2 and ORF3 overlap, and that nt. 2644-2659 (the upward hairpin stem) playa key role in generating the +1 frameshift.
STA1 유전자의 promoter 와 분비신호서열을 이용하여 B. subtilis 의 CMSase 를 분비하는 재조합 효모균주를 육성하였다. STA1A 유전자의 promoter, 분비신호서열, TS region 및 mature glucoamylase N-말단부위의 아미노산 98개와 B. subtilis 의 CMCase 구조유전자가 차례로 연결된 재조합플라스미드 pYESC24 를 제작한후 효모에 형질전환하였으나 CMCase 가 세포외로 분비되지 않았다. 반면에 STA1 의 TS region 및 mature glucoamylase N-말단 아미노산 98 개를 제거하여 CMMase 구조유전자갸 STA1 의 분비신호서열에 바로 연결된 재조합 플라스미드 pYESC11 에 의한 효모형질전환 균주는 CMCase 분비능이 아주 우수하였다. 이 형질전환 균주를 YPD 배지에서 4 일간 배양한 후 세포부위 별 CMCase 역가를 측정한 결과 배양액 1 m/당 총역가 44.7 unit 존재하였으며 이중 93% 이상이 배양상등액에서 관찰되었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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