• Journal of Chest Surgery
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• 제32권2호
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• pp.97-107
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• 1999

배경: 흉부대동맥 수술에 사용하는 헤파린 우회도관의 국산화를 위해, 헤파린 표면처리기법 중 물리분산법을 이용하여 제작한 우회도관의 동물실험을 통해 혈전저항성 및 안정성을 증명하고자 하였다. 대상 및 방법: 성견 21마리(17.5∼25 kg)를 대상으로 하행흉부대동맥 우회모델을 만들었다. 사용한 우회도관의 종류에 따라 무처리 우회도관군(CONTROL; n=3), 무처리 우회도관 및 전신 헤파린 처치군(HEPARIN; n=6), Gott 헤파린 우회도관군(GOTT; n=6), 국산 헤파린 우회도관군(KIST; n=6)로 분류하였다. 관찰지표는 말초혈액검사, 혈액응고검사, 신장 및 간기능검사, 표면전자현미경 소견 등이었다. 각 지표는 우회도관의 원위부 대동맥 혈액에서 검사하여 우회 전과 우회 후 2시간 째의 군내 변화와군간 차이를 비교하였다. 결과: 모든 관찰지표의 우회 전 기초치는 군간에 차이가 없었다. 말초혈액검사 중 혈소판치는 HEPARIN군과 GOTT군에서 유의하게 높아졌으나(p<0.05) 군간 차이는 유의하지 않았다. 기타 혈구세포의 변화는 각 군에서 군내변화와 군간차이가 유의하지 않았다. Activated clotting time, activated partial thromboplastin time, thrombin time은 HEPARIN군에서 현저히 증가하였고(p<0.05) 군간차이도 유의하였다(p<0.005). Prothrombin time은 GOTT군에서 유의하게 증가하였으나(p<0.05) 군간차이는 없었다. Fibrinogen은 각 군에서 군내변화와 군간차이가 유의하지 않았다. Antithrombin III는 HEPARIN군과 KIST군에서 유의하게 감소하였고(p<0.05) 군간차이도 유의하였다(p<0.05). Protein C는 HEPARIN군에서 유의하게 감소하였으나(p<0.05) 군간차이는 없었다. Blood urea nitrogen은 HEPARIN군과 KIST군에서 유의하게 증가하였으나(p<0.05) 군간차이는 없었다. Creatinine, aspartate aminotransferase, alanine aminotransferase는 각 군에서 군내변화와 군간차이가 유의하지 않았다. 표면전자현미경 소견에서 혈소판 및 혈구세포 응집정도는 CONTROL군이 가장 심했고, HEPARIN군은 GOTT군이나 KIST군에 비해 많았다. 결론: 이상의 결과에서 전신 헤파린 처치(HEPARIN)는 출혈경향을 증가시키면서 이물질 표면의 응고반응을 효과적으로 차단하지 못하는 반면, 헤파린 표면처리된 우회도관(GOTT & KIST)의 경우는 출혈경향 없이 표면의 응고반응을 충분히 억제하였다. 또한 국산(KIST) 헤파린 우회도관은 상용화된 외국산(GOTT)과 동등한 항혈전 성능을 보였다.

• 생명과학회지
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• 제19권2호
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• pp.289-298
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• 2009

본 연구는 성인 흡연자를 대상으로 NKF 정제를 단기 (4,000 U를 1회 투여)와 장기(2,000 U를 매일 1회 4주 투여) 실험을 통하여 NKF의 혈전용해 개선 및 항 동맥경화효과를 검증하였다. 임상대상자는 20세${\sim}$31세의 건강한 성인으로 하루 흡연량이 하루 1갑 이상인 고혈압 또는 항 혈전증 약을 섭취하지 않는 사람을 선정하여 무작위로 placebo군과 NKF군으로 분류하여 이중맹검법으로 실험을 하였다. NKF와 placebo 정제는 (주)HK바이오텍에서 제공하였다. 단기시험은 placebo군(10명)과 NKF군(29명)을 대상으로 NKF 섭취전과 섭취 1, 2, 4시간에 혈전용해효과를 검토하였고, 장기시험은 placebo군 10명과 NKF군 15명에게 NKF 섭취 전과 섭취 후 매주 혈전용해효과 및 혈압개서효과를 검토하였다. 단기시험에서 fibrin clot 용해능은 placebo군에 비해 NKF군에서는 섭취 후 2시간에 유의적으로 증가하여 4시까지 그 활성이 유지되었다. ECLT도 NKF 섭취 후 시간이 경과함에 따라 placebo군에 비해 현저하게 감소되었으며 aPTT는 섭취 후 4시에 섭취 전에 비해 12.5% 지연시키는 것으로 나타났다. 장기시험에서는 수축기와 이완기 혈압이 placebo군에서는 섭취 4주에 섭취 전에 비해 2.8%와 3.5%로 증가하였고 NKF군에서는 각각 1.3%와 1.0% 감소하여 두 군 모두에서 유의차는 없었다. Fibrin clot 용해능은 NKF군에서 1주에 증가하여 4주에도 높은 수준으로 유지되었고, ECLT는 NKF군은 섭취 전에 비해 1주에 현저하게 감소되어 4주 후까지 유사한 수준으로 유지하여 NKF의 효과를 볼 수 있었지만, placebo군에서는 효과가 없었다. 따라서 NKF는 PT와 aPTT를 개선하여 전 처리 기간 placebo군에 비해 혈액응고시간을 유의적으로 지연시켰다. 또한 NKF 섭취는 TG/HDL-cholesterol을 감소시켜 항 동맥경화 지수를 상승시키는 효과가 있었다. 이상의 결과로 미루어 볼 때 단기와 장기 임상시험에서 NKF는 fibrin clot 용해능을 증가시키고 ECLT를 감소시키며 PT와 aPTT를 지연시켜 혈전 용해능을 상승시키며, TG/HDL-cholesterol을 낮추어 혈중 지질수준을 개선하고 동맥경화를 예방하는데 유익하게 작용할 것으로 사료된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권4호
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• pp.452-460
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• 2016

함초를 이용한 고부가가치 식의약 소재 개발 연구의 일환으로, 성숙 함초로부터 씨를 회수하고 이의 성분분석 및 유용 생리활성을 평가하였다. 함초 씨의 열수 추출효율은 29.6% 이었으며, 추출물의 total polyphenol (TP) 및 total flavonoid (TF) 함량은 각각 25.7 및 11.5 mg/g을 나타내어 성숙기 함초와 유사한 함량을 보였다. Hexane, ethylacetate (EA), butanol을 이용한 순차적 유기용매 분획물 중 EA 분획이 158.3 및 136.2 mg/g의 가장 높은 TP 및 TF 함량을 보였으며, 특이하게 물 잔류물 및 butanol 분획물보다 높은 총당 함량(228.3 mg/g)을 나타내었다. 함초 씨 시료의 항균 활성 평가 결과, EA 분획에서 그람양성 세균에 대한 광범위한 항세균 활성이 나타났으며, butanol 분획에서도 Staphylococcus epidermidis에 대한 강력한 항균활성을 확인하였다. 한편, 함초 씨 열수 추출물은 우수한 radical 소거능과 환원력을 나타내었으며, 가장 강력한 항산화 활성은 EA 분획에서 나타났다. EA 분획의 DPPH 음이온 소거능, ABTS 양이온 소거능 및 Nitrite 소거능에 대한 $RC_{50}$은 각각 57.0, 29.0 및 $28.9{\mu}g/ml$로 확인되어, vitamin C의 10.7, 4.0 및 $18.0{\mu}g/ml$보다 약하지만 우수한 항산화능을 확인하였다. 항혈전 활성 평가결과, EA 분획은 5 mg/ml 농도에서 thrombin time을 무첨가구에 비해 15배 이상, 7 mg/ml 농도에서 activated partial thromboplastin time을 15배 이상 연장시켜 아스피린에 필적하는 강력한 항응고 활성을 나타내었다. 반면 함초씨 추출물과 분획물(0.25 mg/ml)은 모두 혈소판 응집저해 활성은 나타나지 않았으며, 1 mg/ml 농도까지 인간 적혈구 용혈활성도 나타나지 않았다. 상기의 연구결과는 함초 씨 추출물의 EA 분획의 활성물질을 정제하여 항세균 및 항혈전제 개발이 가능함을 제시하고 있다.

• 한국식품영양학회지
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• 제24권3호
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• pp.442-450
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• 2011

1. 본 연구는 고지방 섭취 동물 모델에서 양파 추출물을 용량별(0.01%, 0.02%, 0.05%, 0.1%)로 8주간 보충 섭취시킨 후 혈중 지질 농도와 혈행 장애 개선에 미치는 영향을 살펴보는 것을 주된 목적으로 하였다. 2. 양파 껍질 추출물 섭취에 따라 total cholesterol과 HDLcholesterol 및 LDL-cholesterol은 그룹간의 유의한 차이를 보였다. 사후분석 결과 LDL-cholesterol은 정상 대조군에 비해 고지방 대조군 및 고지방+양파 껍질 추출물 그룹이 유의하게 높았고, 고지방 대조군 대비 0.1% 양파 껍질 추출물 섭취군의 농도가 유의하게 감소되었다. HDL-cholesterol은 정상대조군 대비 고지방 식이 후 유의하게 감소하였다가 양파 껍질 추출물 섭취에 따라 용량 의존적으로 유의하게 증가하는 결과를 보였다. 3. Hematocrit, WBC, RBC, platelet count, MPV, MCV, MCH, MCHC 등 혈액학적 지표는 처치에 따른 유의적인 차이를 나타내지 않았다. Hemoglobin의 경우, ANOVA 분석 시 군간 유의한 평균값의 차이를 보였으나, Bonferroni correction을 통한 사후분석 결과 각 군간 유의적인 차이가 없었다. 4. 혈액 응고 지표로 분석된 PT, aPTT, TT와 fibrinogen은 ANOVA 분석 시 모든 군간 유의적인 차이가 없었다. 그러나 t-test 결과 고지방 대조군에 비해 0.05% 양파 추출물 첨가군에서 aPTT가 유의적으로 연장되었다. 5. 체중 증가의 cut-off에 따라 low gainer와 high gainer로 나누어 항혈전 지표를 비교한 결과, high gainer에서는 0.01%, 0.02%, 0.05% 양파 추출물 섭취군이 고지방 대조군에 비해 PT와 aPTT가 전반적으로 길어지는 경향을 보여주었다. 6. 이상의 결과에서 고지방 섭취 동물 모델에서 용량별 양파 추출물 첨가는 혈중 지질 농도에 영향을 주는 한편, 혈액응고시스템에 현저한 변화를 유발하지는 않는 것으로 보인다. 하지만 고지방 대조군에 비해 0.05% 양파 추출물 첨가 시aPTT의 유의적인 증가는 양파 추출물이 내인성 혈액 응고시스템에 부분적으로 영향을 줄 수 있는 가능성을 시사하므로 향후 비만 동물 모델을 대상으로 다양한 농도 범위의 양파 보충의 효과를 규명하는 후속 연구가 요구된다.

• Asian Pacific Journal of Cancer Prevention
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• 제14권8호
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• pp.4529-4532
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• 2013

Background: Acute normovolemic hemodilution (ANH) has been widely used to prevent the massive blood loss during hepatic carcinoma. The influences of ANH on coagulation function are still controversy, especially in elderly patients. The study observed ANH effects on coagulation function and fibrinolysis in elderly patients undergoing the disease. Materials and Methods: Thirty elderly patients (aged 60-70 yr) with liver cancer (ASA I or II) taken hepatic carcinectomy from February 2007 to February 2008 were randomly divided into ANH group (n=15) and control group (n=15). After tracheal intubation, patients in ANH group and control group were infused with 6% hydroxyethyl starch (130/0.4) and Ringer's solution, respectively. Blood samples were drawn from patients in both groups at five different time points: before anesthesia induction (T1), 30 min after ANH (T2), 1 h after start of operation (T3), immediately after operation (T4), and 24 h after operation (T5). Then coagulation function, soluble fibrin monomer complex (SFMC), prothrombin fragment (F1+2), and platelet membrane glycoprotein (CD62P and activated GP IIb/GP IIIa) were measured. Results: The perioperative blood loss and allogeneic blood transfusion were recorded during the surgery. The perioperative blood loss was not significantly different between two groups (p>0.05), but the volume of allogeneic blood transfusion in ANH group was significantly less than in control group ($350.0{\pm}70.7$) mL vs. ($457.0{\pm}181.3$) mL (p<0.01). Compared with the data of T1, the prothrombin time (PT) and activated partial thromboplastin time (APTT) measured after T3 were significantly longer (p<0.05) in both groups, but within normal range. There were no significant changes of thrombin time (TT) and D-dimer between two groups at different time points (p>0.05). SFMC and F1+2 increased in both groups, but were not statistically significant. PAC-1-positive cells and CD62P expressions in patients of ANH group were significantly lower than those at T1 (p<0.05) and T2-T5 (p>0.05). Conclusions: ANH has no obvious impact on fibrinolysis and coagulation function in elderly patients undergoing resection of liver cancer. The study suggested that ANH is safe to use in elderly patients and it could reduce allogeneic blood transfusion.

• Journal of Chest Surgery
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• 제51권2호
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• pp.114-121
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• 2018

Background: Unfractionated heparin is commonly used for anticoagulation in extracorporeal membrane oxygenation (ECMO). Several studies have shown that nafamostat mesilate (NM) has comparable clinical outcomes to unfractionated heparin. This study compared anticoagulation with NM and heparin in a large-animal model. Methods: Beagle dogs (n=8; weight, 6.5-9 kg) were placed on venovenous ECMO. Blood samples were taken every hour and the following parameters were compared: hemoglobin level, activated partial thromboplastin time (aPTT), thromboelastography (TEG) data, platelet function, and inflammatory cytokine levels. Results: In both groups, the aPTT was longer than the baseline value. Although the aPTT in the NM group was shorter than in the heparin group, the TEG parameters were similar between the 2 groups. Hemoglobin levels decreased in both groups, but the decrease was less with NM than with heparin (p=0.049). Interleukin $(IL)-1{\beta}$ levels significantly decreased in the NM group (p=0.01), but there was no difference in the levels of tumor necrosis factor alpha or IL-10 between the 2 groups. Conclusion: NM showed a similar anticoagulant effect to that of unfractionated heparin, with fewer bleeding complications. NM also had anti-inflammatory properties during ECMO. Based on this preclinical study, NM may be a good alternative candidate for anticoagulation in ECMO.

• 대한임상검사과학회지
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• 제43권4호
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• pp.133-137
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• 2011

The monitoring of heparin therapy is using almost aPTT assay. This study is compare to estimating aPTT therapeutic range using in vitro heparin-spiked sample and aPTT therapeutic range using in vivo heparin-treated sample. Normal pooled plasma was collected from 20 healthy representative individuals. 11 concentration of heparinized plasmas from 0 U/mL to 1.0 U/mL at intervals of 0.1 U/mL made by addition of heparin to normal pooled plasma were measured aPTT. The aPTT therapeutic range was performed through correlation analysis between heparin level 0.2 to 0.4 U/mL and aPTT. 30 plasmas from patients on heparin therapy were measured aPTT and anti-Xa activity. The aPTT therapeutic range was performed through correlation analysis between anti-Xa activity 0.3 to 0.7 U/mL and aPTT. The aPTT therapeutic range corresponded by heparin level-vs-aPTT value regression analysis was 60.7 to 102.4 seconds. The aPTT therapeutic range corresponded by anti-Xa activity-vs-aPTT value regression analysis was 85.3 to 147.5 seconds. The validation of heparin sensitivity using in-vitro heparin sample was not considered. The establishing aPTT therapeutic range is recommended anti-Xa activity using in-vivo sample.

• 동의생리병리학회지
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• 제20권2호
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• pp.460-466
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• 2006

We wondered whether the mechanisms of antiplatelet aggregation of DJS-WE were through multiple pathways. Danggijakyak-san(DJS) consisting of 6 herbes of Paeoniae Radix, Poria Cocos, Angelicae Sinensis Radix, Cnidii Rhizoma, Atractylodis Macrocephalae Rhizoma and Alismatis Rhizoma, is a crude mixture of a commonly used Korean herbal medicine. The water extract (DJS-WE) of DJS has been known to have an anti-platelet aggregation activity. We have reported that DJS-WE inhibited ADP-induced aggregation as well as arachidonic acid-induced aggregation of human platelet. Clinical studies on the cardiovascular effects of DJS-WE have been done in Korea. The DJS has been used as a remedy for gastrointestinal disorders (abdominal pain, dysentery), headache, amenorrhea, and postpartum hemorrhage. It has also been claimed to have a remarkable central stimulant effect, a transient hypertensive effect, and positive inotropic and chronotropic effects. In this paper, we evaluated the possible mechanisms of the antiplatelet activity of DJS-WE using human platelets. On the other hand, the role of DJS-ethanol extract on the inhibition of platelet aggregation and hemolytic effect have not yet been investigated in detail. We also used the method of activated partial thromboplastin times (APTT) for the first time to study the inhibition on platelet aggregation activity of DJS-ethanol extract. The effect of DJS-WE on hemolysis was also investigated. DJS-WE showed a high hemolysis ability on human blood.

• 한국식품과학회지
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• 제36권6호
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• pp.1008-1013
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• 2004

국내산 주요 갈조류 18종의 추출용매 및 온도에 따른 항혈액응고 활성을 측정한 결과 미역, 다시마, 감태, 대황, 곰피, 톳, 괭생이 모자반의 열수 추출물의 APTT가 190.0초 이상으로 활성이 높았으며, 이 때의 추출온도는 $90^{\circ}C$였다. 감태의 에탄올 불용성분의 항혈액응고 활성은 $500\;{\mu}g/mL$에서 에탄을 가용성 물질에 비하여 2배 이상 증가하였으며, 에탄을 불용성분의 분자량에 따른 항혈액응고 활성은 $100\;{\mu}g/mL$ 농도에서 EKJ-eim 1(100 kDa 이상)이 190초 이상으로 EKJ-eim 2(100-50 kDa) 및 EKJ-eim 3(50-10 kDa)에 비해 좋았으며, 이 분회의 화학적 조성성분은 fucose, xylose, mannose, galactose, glucose, sulfate로 구성되어 있으며, 몰비는 1 : 0.05 : 0.10 : 0.15 : 0.17 : 1.46으로 2 mole의 fucose에 3 mole의 황산기가 결합되어 있는 산성다당임을 확인하였다.

• BMB Reports
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• 제29권6호
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• pp.500-506
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• 1996

We have isolated a water-extracted novel regulator for blood coagulation from an earthworm, Lumbricus rubellus. As a folk remedy, the earthworm has been known to facilitate blood circulation. After complete heat inactivation of endogenous proteases in the earthworm, an anticoagulant(s) was purified through ammonium sulfate fractionation and three consecutive gel permeation chromatography of Sephacryl S-300, Sephadex G-75, and G-150 by measuring activated partial thromboplastin time (APTT) The anticoagulant was further purified to 2,800 fold with a C4 reversed-phase HPLC This activity was stable under heat ($100^{\circ}C$ for 30 min) and acidic conditions (0.4 N HCl). The effects of this partially purified anticoagulant on thrombin were observed with various substrates such as N${\alpha}$-benzoyl-DL-arginine-p-nitroanilide (BApNA), H-D-phenylalanyl-L-pipecoyl-L-arginine-p-nitroanilide (S-2238), N${\alpha}$-p-tosyl-L-arginine methyl ester (TAME), and fibrinogen as a natural substrate. Only TAME hydrolysis, due to an esterase activity of the enzyme, was inhibited among the chromogenic substrates. In addition, the anticoagulant not only inhibited the conversion of fibrinogen to fibrin but also prolonged the fibrin clot formation monitored with the in vitro coagulation test. Based on these observations, we suggest the significance of measuring the ability of antithrombotic drugs to inhibit the esterase activity of thrombin. In this report, it was also shown that the earthworm indeed contained a water-extractable, heat- and acid-stable anticoagulant which could be used as a novel antithrombotic agent.