A carboxymethyl cellulase (CMCase) has been purified from Loweporus roseoalbus. The molecular weight of the purified CMCase was estimated to be 28.5 kDa by sodium dodecyl sulfate (SDS) polyacrylamide gel electrophoresis. The maximum activity of the purified CMCase was observed at pH 4.0 and $30^{\circ}C$, and stable for pH 3 to 5 to maintain 60% activity. The CMCase activity was activated by SDS and inhibited by PMSF and 1,10-phenanthroline. The enzyme activity was also decreased by the addition of ethylene diamine tetraacetic acid (EDTA), suggesting that the purified CMCase is metalloenzyme.
Celluloytic microorgnasims were isolated form the various sources and four of them were identified as Trichoderma roningi, Aspergillus niger, Penicillium chrysogenum, and Streptomyces sp. The induction of extracellular5 cellulase of these species in the liquid culture media containing carboxymethylcellulose (CMC) or Avicel as inducer showed that CMC was a better effective inducer for the production of CMCase(Cx cellulase component) as well as Avicelase(C$_{1}$ cellulase component) than Avicel. It is believed that certain hydrolysis products of cellulose(CMC) could serve as an inducer for an enzyme synthesis. In T. roningi, Asp. niger, and Strptomyces sp., the optimum temperature of CNCase on CMC-culture medium was 50.deg. but temperature around 40.deg.C was found to be optimum for the activities of CMCase prepared from P.ehrysogenum. The optimum temperature for Avicelase activitiles on Avicel-culture media of T. roningi and P. chrysogenum was $40{\circ}C$ whereas temperature $50{\circ}C$ was found to be optimum for Avicelase from A.niger and Streptomyces sp. The optimal activities of these CNCase and Avicelase prepared from. T. ronigi, Pen.chrysogenum and Streptomyces sp. were found similarly to be at pH's around 5.4 and 6.0 while pH 4.8 was optimum for the activities of CMCase and Avicelase from A.niger, indicating that A.niger in acidic media would yield an enzyme of high activity.
The effect of red ginseng residue on the several enzyme activities of the koji and alcohol fermentation were investigated. The koji showed maximum values of amylase and cellulase activity when it was prepared by 30% red ginseng residue and 70% wheat bran, and of protease activity when it was prepared by 40% red ginseng residue and 60% wheat bran-${\alpha}$ amylase activity of the koji during its fermentation was increased rapidly until 4 days and there after it was increased slowly, but ${\beta}$-amylase was rapidly increased after 3 days fermentation. During the preparation of the koji, the acidic, neutral protease and cellulase activities showed the maximum value after 3 days fermentation and the alkaline protease showed the maximum value within 4-6 days fermentation. On the otherhand, fermented broth, containing 6%(v/v) alcohol, could be obtained when the substrate was saccharified by the koji, based on 25% red ginseng residue and 75% wheat bran, prior to alcohol fermentation.
To search direct fed microbials, we isolated a Candida sp. from kefir grain. The isolated Candida sp. strain showed 99.8% of identity to the species of Candida kefyr by API 20C kit. Enzyme activity of Candida kefyr was higher in amylase (0.33±1.12μmol/min/mg) than that in phytase (0.052±0.98μmol/ min/mg) cellulase(0.051±μmol/min/mg) and xylanase (0.011±0.98mol/min/mg). The maximum numbers of Candida kefyr in growth curve were reached at 30 h fermentation. Candida kefyr showed high resistances to acidic environment, which was not perfectly extincted even at pH 2.0. And it showed high tolerance to bile salt which had almost 97.2% of survival in the presence of 1.0% bile salt.Especially, Candida kefyr showed high heat stability which remained 10% of initial microorganisms at 60℃. Candida kefyr was not generally inhibited by most of 11 antibiotic agent which contained tetracycline groups. These results suggest that the isolated Candida kefyr has a useful properties as probiotics.
Effects of inoculation with phosphate-solubilizing microorganisms, Pseudomonas putida and Aspergillus niger, were studied in both acidic red-yellow and alkaline calcareous soils cropped with pimiento. In red-yellow soil after cultivation, the amounts of soil available phosphorus on non-fertilizer and fertilizer plots inoculated with Aspergillus niger, and on rice straw plot inoculated with Pseudomonas putida and Aspergillus niger were significantly higher than uninoculation treatments, but there were no differences in calcareous soil. With inoculation of either Pseudomonas putida or Aspergillus niger, increase in phosphorous uptake by pimiento cultivated in calcareous soil was detected on non-fertilizer, and fertilizer plots except rice straw plot. Although there were no significant differences in soil cellulase activities among treatments, the activity was the highest on rice straw plot in red-yellow soil. The phosphatase activities in red-yellow soil were increased by the inoculation with Aspergillus niger only, and the activity in calcareous soil was improved by the inoculation with either Pseudomonas putida or Aspergillus niger.
A bacterium which has high enzymatic activities such as amylase, cellulase and protease was isolated from Korean traditional soybean food, doenjang. The isolated bacterium was identified to Bacillus subtilis HS25 by the test of morphological and biochemical properties according to Bergey's Manual of Systematic Bacteriology and API 50 CHL kit, and by the 16S rDNA sequence. The isolated B. subtilis HS25 had a potent antibacterial activity against food born causative or pathogenic bacteria. B. subtilis HS25 is endospore forming cell and contained flagella and abundant viscous material at the out layer of cell wall. It was rod type bacterium $(0.5{\sim}0.8{\times}3{\sim}5{\mu}m)$ having biochemical characteristics such as gram staining(+), catalase(+), oxidase(-) and hydrolysis of esculin(+). The optimal medium compositions for production of antibacterial substance in the B. subtilis HS25 were 1% of soluble starch, 0.5% of yeast extract, 0.5% of peptone and 0.05% of MgCl$_2{\cdot}6H_{2}O$. The optimum temperature and pH of the growth of the B. subtilis HS25 was 35$^{\circ}C$ and pH 7.5, respectively. The antibacterial activity was more high in neutral to a little alkaline pH (6.5-10.5) than in acidic pH. The optimal shaking speed to grow and to produce antibacterial substance of the B. subtilis HS25 was 160${\sim}$200 rpm. The optimal culture time for antibacterial activities of the bacterium were shown to be in the range of 12-36 hr.
To search probiotic microorganisms, we isolated Lactobacillus sp. from kefir, The Lactobacillus sp. strain showed $99.5\%$ of identity to species Lactobacillus rhamnosus by API kit. Lactobacillus rhamnosus showed high resistances to acidic environment, which grew well even at pH 2.0 and $1.0\%$ bile salt Enzyme activity of Lactobacillus rhamnosus was higher in amylase ($0.673\;{\mu}mol/min/mg$) than that in xylanase ($0.288\;{\mu}mol/min/mg$), cellulase($0.117\;{\mu}mol/min/mg$) and phytase($0.269\;{\mu}mol/min/mg$). Especially, the Lactobacillus rhamnosus showed high heat stability which remained $1{\times}10^6\;CFU/ml$ at $60^{\circ}C$. The maximum numbers of Lactobacillus rhamnosus on growth owe was reached at 24 h fermentation and pH was decreased to 4.6. The resistances of Lactobacillus rhamnosus to acidic pH and bile salt were better than that of Lactobacillus acidophilus used as control. When Lactobacillus rhamnosus was cultured with E. coli in MRS broth, E. coli was disappeared after 18 h. These result suggest that the isolated Lactobacillus rhamnosus has a useful probiotics properties.
Journal of the Korea Organic Resources Recycling Association
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v.13
no.1
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pp.79-89
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2005
Forest soils were analyzed on their biological and physicochemical properties for the ecological restoration of burnt forest soil using organic wastes and proper microorganisms. Three kinds of soil samples were collected from undamaged soil(US), naturally restoring soil(NS) and artificially restoring soil(AS). All soil samples were sandy soil and acidic soil, ranged pH 5.34~5.78. Moisture content was higher in the soil of NS region. And the others were similar. Total organic matter and soluble sugar were higher at the surface, generally. Heterotrophic soil microbes were abundant at the surface soil of NS and subsoil of AS. Dehydrogenase, cellulase and phosphatase activities were higher at the NS soil. Especially, Dehydrogenase activity as primary index of soil microbial process showed high correlationship with moisture content(r=0.90, P < 0.05).
Yam has been recognized as healthy food due to its various biological activities, such as anti-obesity, antimicrobial, anticancer and immuno-stimulation activities, and its consumption has been increased during last decades. In this study, to investigate low-temperature, long-term storage of yam and to develop processed yam products, yam-putrefactive psychrotrophic bacteria were isolated from rotted yam and identified based on BBL identification system, fatty acid analysis in cell membrane and 16S rDNA sequence analysis. The putrefaction activity of isolated thirteen bacteria was evaluated using yam-slices (NaOCl-treated, autoclaved yam and without treatment), and YAM-10 and YAM-12 were identified as major psychrotrophic putrefactive bacteria. Both YAM-10 (Pseudomonas cepacia) and YAM-12 (Pseudomonas rhodesiae) bacteria grew well at 4$\sim$12$^{\circ}C$ and showed strong activity of polymer degrading enzymes, especially amylase, carboxy methyl cellulase and xylanase, at 20$^{\circ}C$. But they failed to grow at acidic pH (<5) or alkaline pH (>10). Our results suggested that the control of psychrotrophic Pseudomonas sp. by pH change and inhibition of polymer degrading enzymes, such as amy-lase, are necessary to long-term storage of yam.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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