• 미생물학회지
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• 제14권2호
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• pp.47-56
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• 1976

Enzyme activities, such as glucoamylase dextrinogenic amylase, cellulase, acid protase and neutral protease, of Rhizopus isolated from various substrates collected throughout South Korea are measured, and their enzyme activities are surveyed from taxonomical, ecological and physiological viewpoint. Effect of carbon sources and phytohormones on the amylalse production of Rhizopus are also measured. Among the 735 strains of Phizopus isolated, strain number 587 exhibiting most prominent dextrinogenic amylase and netral protease activity is selected as the best strain, and the strain number 673, 108, 329, 165 and 728 are seleted for their predominant cellulase, acid protease, glucoamylase, dextrinogenic amylase and neutral protease activities, respectively. R.acidus and R.nigricans which exhibited relatively higher callulalse activity, showed lower activities for both amylase. R.tritici exhibited higher protease activity. The relations between activities and various substrates of wild strains are not outstnading difference, although the strains isolated from inland region exhibited more or less higher amylase and cellulase activities, than those of coast region, generally. Lactose and dextrin are most effective carbon sources for glucoamylase and dextrinogenic amylase production of the Rhizopus niveus, respectively. Although all phytohormones tested are effective for production of amylase by the Rhizopus strains, except nicotinamide for glucoamylase production, biotin and ascorbate are most effective for dextrinogenic amylase and glucoamylase production, respectively.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제20권3호
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• pp.295-301
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• 1992

토양으로부터 alkaline protease 생성능이 강한 Streptomyces griseus HC-1141을 분리하였으며, 정제 효소의 최적작용 pH 와 온도는 8.0, 60'C 였으며, pH 7.0-9.0의 범위와 $60^{\circ}C$이하에서 안정하였다. 금속 이온중 $Mn^{2+}$, $Ca^{2+}$, 등에 의해 활성이 증대되었으나 $Hg^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Ba^{2+}$, $Fe^{2+}$ 등에 의해 효소 활성이 저해되었고, 효소활성 저해제 중 Epsilon-aminocaproic acid, 2,4-dinitrophenol, iodine 등에 의해서는 현전한 효소활성저해가 관찰되지 않았으나 ethylenediaminetetraacetic acid와 p-chloromercuribenzoic acid에 의해 활성저해가 관찰되어 효소분자 중 SH기가 활성에 어느정도 관여하는 metallo enzyme으로 추정되었다. 정제효소의 $K_m$, $V_{max}$ 및 활성화에너지는 $2.229{\times}10^{-4}$M, $46.08 {\mu}$g/min, 3.643 kcal/mol 이었으며 hemoglobin과 egg albumin보다 casein을 더 잘 가수분해하였다. 또한 여러 가지 detergent에 대하여 강한 저항성을 가지고 있었다.

• 미생물학회지
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• 제18권2호
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• pp.51-58
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• 1980

Mutational experiments were performed to improved to improve the protease productivity of Aspergillus flavus KU 153, which is selected among the wild strains. A UV-induced mutant strain having high protease productivity was obtained by the use of the clear zone method as a simple criterion for a primary screening test. Neutral and alkaline protease activities of hte mutant strain were higher than 1.8 times, comopared with those of the parental strain, respectively, while in the case of acid protease, it was 2.7 times. The mutant strain selected was more powerful in the production of cellulase and amylase, as well s protease in wheat bran, compared with those of the parental strain. protease production of the parental strain has reached maximum level at 3 days culture, while alkaline nad neutral protease production of the mutantstrain has reached at 2 days culture. On the other hand, the mutant strain formed the spore slowly, compared with the parental strain. Column chromatography of the neutral protease on DEAE-Sephadex A-50 showed that the mutant strain was not induced the formation of another neutral protease isozyme, but induced the variation in the function of regulatory gene.

• Journal of Microbiology and Biotechnology
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• 제8권6호
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• pp.639-644
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• 1998

Extracellular serine proteases were isolated from a soil bacterium, alkalophilic coryneform bacterium TU-19, which have been grown in a liquid medium optimized at 3$0^{\circ}C$ and pH 10.0. Three different sizes, 120 kDa (protease I), 80 kDa (protease II), and 45 kDa (protease III), of serine pro teases were purified using Sephadex G-150 and QAE-Sephadex chromatography (Kang et al. 1995. Agric. Chem Biotech. 38: 534-540). SDS-PAGE showed that the 120 kDa protease was degraded into the 80 kDa protease in 20 mM Tris-HCI (pH 8.0) buffer solution. This degradation was enhanced in the presence of 0.5 M NaCl and 5 mM EDTA, but was inhibited in the presence of 5 mM $CaCl_2$. These results indicated that the $Ca^{2＋}$ ion seems to stabilize the 120 kDa protease like other proteases derived from Bacillus species. The $NH_2$-terminal amino acid sequences of the 10 residues of both proteases were completely identical: Met-Asn-Thr-Gln-Asn-Ser-Phe-Leu-Ile-Lys. In contrast to this, the 80 kDa protease has 1.5 times higher specific activity than the 120 kDa protease does (Kang et al. 1995. Agric. Chern. Biotech. 38: 534-540). Therefore the C-terminal of the 120 kDa protease seems to be autolyzed to the 80 kDa protease but this autolysis did not decrease the protease activity. Optimum pH and temperature of both 80 kDa and 120 kDa proteases were pH 10.5 and $45^{\circ}C$, respectively, and pH and thermal stability were almost identical. Several divalent ions except the $Fe^{2＋}$ ion showed similar effects on activities of both proteases, which are similarly resistant to three different detergents.

• Journal of Animal Science and Technology
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• 제48권1호
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• pp.49-58
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• 2006

본 연구는 비육돈 사료내 갯벌 미생물 유래 단백질 분해 효소제를 첨가하였을 때 성장률, 아미노산 소화율, 혈액성상, 육질 특성 및 분내 휘발성 지방산과 NH3-N 함량을 알아보기 위해 실시하였다. 3원 교잡종(Landrace×Yorkshire×Duroc) 비육돈 80두를 공시하였으며, 시험개시시의 체중은 60.08±2.69kg이었다. 시험설계는 기초사료내 영양소 함량과 효소제의 첨가 유뮤에 따라 high nutrient density diet 처리구, high nutrient density diet에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구(high nutrient density diet+0.1% protease), low nutrient density diet 처리구, low nutrient density diet 처리구에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구(low nutrient density diet+0.1% protease)로 4처리를 하여 처리당 5반복, 반복당 4마리씩 완전임의 배치하였다. 전체 사양시험 기간동안 일당증체량은 고 영양소 사료에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구가 저 영양소 사료를 급여한 처리구와 비교하여 유의적으로 증가하였다(P<0.05). DM과 N의 소화율은 고 영양소 사료를 급여한 처리구들 및 저 영양소 사료에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구가 저 영양소 사료를 급여한 처리구와 비교하여 유의적으로 증가하였다(P<0.05). 필수 아미노산 소화율은 저 영양소 사료에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구가 다른 처리구들에 비해 유의적으로 증가하였다(P<0.05). 비필수 아미노산 소화율에서는 고 영양소 사료에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구가 고 영양소 사료와 저 영양소 사료를 급여한 처리구들에 비해 유의적으로 증가하였다(P<0.05). BUN 함량은 고 영양소 사료에 단백질 분해효소제를 첨가한 처리구가 저 영양소 사료를 급여한 처리구와 비교하여 유의적으로 증가하였다(P<0.05). 육색에서는 명도를 나타내는 L*값은 저 영양소 사료를 급여한 처리구들이 고 영양소 사료를 급여한 처리구들과 비교하여 유의적으로 증가하였다(P<0.05). 결론적으로 비육돈 사료내 갯벌 미생물 유래 단백질 분해 효소제의 첨가는 성장률을 향상시켰고 아미노산 소화율 개선하였으며, BUN 함량과 육색에 영향을 미친 것으로 사료된다.(색인어：성장률, 아미노산 소화율, 혈액성상, 육질 특성, 휘발성 지방산, NH3-N)

• Food Science and Biotechnology
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• 제15권1호
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• pp.28-32
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• 2006

Protease inhibitor of 72.6 kDa was successively purified from chum salmon (Oncorhynchus keta) eggs by ion exchange, gel permeation, and affinity chromatographies. Protease inhibitor was purified with yield and purification fold of 1.50% and 58.11, respectively. SDS-PAGE results showed purified protease inhibitor consisted of two protein subunits of 54.0 and 18.6 kDa. Chum salmon inhibitor exhibited stability between 20 and $40^{\circ}C$ in weak acid environment (PH 6), and inhibited papain and cathepsin, members of cysteine protease, but not chymotrypsin. The protein inhibited cathepsin more effectively than did egg white protease inhibitor, whereas the reverse was true for papain. These results indicate chum salmon egg inhibitor is heterodimer, thus the inhibitor was classified as cysteine protease inhibitor.

• 한국식품과학회지
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• 제30권6호
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• pp.1333-1338
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• 1998

본 연구에서는 김치재료 중 존재하는 각종 효소의 특성을 이용한 김치의 품질개선을 위한 기초자료를 제시하고자 몇 가지의 대표적인 가수분해효소와 산화효소의 활성을 조사하였다. 가수분해효소로는 발효원으로 사용되고 균체증식에 필수적인 당 및 아미노산의 생산에 관여하는 amylase와 protease를 연구하였으며, 산화효소로는 이취발생과 vitamin C의 산화에 관여하는 peroxidase 및 ascorbic acid oxidase 활성을 조사하였다. 시료 1 g중 존재하는 효소활성은 ${\alpha}-amylase$의 경우 멸치젓, 고춧가루, 새우젓, 굴에서, ${\beta}-amylase$는 멸치젓, 굴, 무에서 높게 나타났다. Protease의 경우는 멸치젓, 새우젓, 고춧가루에서 높게 나타났으며, peroxidase와 ascorbic acid oxidase는 각각 무, 오이, 파 및 멸치젓, 고춧가루, 새우젓에서 높게 나타나 김치재료중 발효식품인 멸치젓과 새우젓이 전반적으로 높은 가수분해 및 산화활성을 나타내었고, 고춧가루는 가수분해효소 활성이, 무, 오이는 산화효소 활성이 높게 나타났다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제18권3호
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• pp.348-355
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• 1989

Alkaline protease 생성능이 강한 Aspergillus fumigatus 균주를 토양에서 분리하고, 생성효소를 정제하여 특성을 조사한 결과 최적 pH는 9.0, pH안정성은 $pH\;8.0{\sim}10.0$, 최적온도는 $50^{\circ}C$였으며, $50^{\circ}C$이하의 온도에서 안정하나 그 이상의 온도에서는 급격한 효소 불활성화를 보였고, 금속염 $Mn^{++},\;Cu^{++},\;Ba^{++},\;Mg^{++}$ 등에 의해서 활성이 다소 증대되나 $K^+,\;Fe^{+++},\;Ag^{++},\;Pb^{++},\;Na^+,\;Ca^{++},\;Hg^+,\;Zn^{++}$에 의해 저해를 받았다. 활성저해제인 EDTA, 2,4-DNP, ${\varepsilon}-amino$ caproic acid에는 큰 저해를 받지 않으나, PCMB에 많은 저해를 받는 것으로 미루어 활성 부위가 SH기인 cystein protease로 추정되었다. Km값은 $8.33{\times}10^{-4}mole/{\ell}$, Vmax는 $47.62{\mu}g/min$였으며, casein과 hemoglobin을 trypsin보다 더 잘 분해하고, casein을 hemoglobin보다 잘 분해하였다.

• 산업식품공학
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• 제15권1호
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• pp.41-47
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• 2011

쌀부산물인 탈지미강을 상업적으로 사용되는 8가지 protease를 최적화된 조건에서 단일 혹은 혼합 처리하여 수용성 단백질을 분리하였다. 이렇게 분리된 단백질을 Lowry, Kjeldahl 그리고 Gravimetric method 등 총 3가지 방법으로 분석을 한 결과 Protamex, Alcalase, Protease N이 가장 높은 분해율을 나타냈다. 3가지 방법에서 모두 Protamex, Alcalase, Protease N이 가장 높은 분해율을 나타내었고, Gravimetric method의 경우 다른 두 분석방법인 Lowry, Kjeldahl method에 비해 더 높은 단백질 함량을 보였다. 또한 위의 단일처리결과를 바탕으로 3가지 protease를 혼합하여 처리하였을 때 단일효소처리에 비해 상승효과가 나타나는 것을 알 수 있었는데, 이것은 protease의 경우 가수분해 할 수 있는 특정 peptide 혹은 amino acid가 있는데 각각의 protease가 분해하지 못하는 peptide 혹은 amino acid를 서로 분해해줌으로써 상승효과가 나타난 것으로 생각된다. 효소처리를 하여 얻어진 단백질의 사이즈를 알아보기 위해 SDS PAGE를 한 결과 어떠한 밴드도 형성이 되지 않았고 이는 분해된 단백질이 marker의 최소 사이즈인 15 kDa보다 작기때문인 것으로 생각된다. 따라서 일반 단백질보다 사이즈가 작은 polypeptide나 amino acid로써 분해된 것을 뜻하고 실제로 섭취하였을 때는 신체에서 생성되는 단백질 분해효소인 trypsin이나 chymotrypsin의 분해 없이도 쉽게 흡수 할 수 있을 것이라 판단된다. 또한 효소의 종류가 많을수록 총 아미노산의 함량이 높아짐으로써 식품첨가물로써 활용도가 높은 단백질가수분해물로 분해되었음을 확인할 수 있었다.

• 대한본초학회지
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• 제22권4호
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• pp.21-28
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• 2007

Objectives : Kyenegum has been popularly used long as the digestive. The purpose of this study was to investigate the purification and characteristics of protease obtained from Kyenegum crude enzyme. Methods : Kyenegum protease was purified by precipitation with ammonium sulfate followed by SP-Spharose ion exchange chromatography. The molecular weight of Kyenegum protease was estimated by SDS-PAGE electrophoresis. Results : Kyenegum protease was 3,087 units/mg protein specific activity, 14.5 purification fold and 9.8 % recovery. The molecular weight of protease was estimated to be 18 kDa. The isoelectric point was pI 8.97 and values of Km and Vmax of its were 48 mg/mL and 2 units/min, respectively. Conclusion : The result suggests that the protease obtained from Kyenegum has excellent stability of temperature, acid and collagen substrate specificity.