$Na^+/K^+$-ATPase is a membrane protein and plays a key role in osmotic regulation in living organisms. In the present study, a cDNA sequence encoding the $Na^+/K^+$-ATPase alpha subunit from the monogonont rotifer, Brachionus koreanus was cloned by rapid amplification of cDNA ends technique. To investigate the role of this enzyme in osmotic stress, enzymatic activities of $Na^+/K^+$-ATPase were measured after exposure to different salinities for 48 h. The full-length Bk $Na^+/K^+$-ATPase cDNA was 3069 bp-long, encoding a 1022-amino acid polypeptide. Bk $Na^+/K^+$-ATPase possesses eight membrane spanning regions and five conserved domains. Phylogenetic analysis showed that Bk $Na^+/K^+$-ATPase had high identity with those of other species, and was closely clustered with other Brachionus sp. These findings indicate that this protein was conserved both structurally and functionally. B. koreanus $Na^+/K^+$-ATPase activity was stimulated in both hyposaline (6 psu) and hypersaline (32 psu) conditions, suggesting that this protein may play a role in osmoregulation. This study would provide better understanding of the physiology of B. koreanus and this enzyme may be useful as a molecular marker for evaluation of osmotic stress in aquatic environment.
본 연구는 간이 수경재배법을 이용하여 보리의 알루미늄 스트레스 내성과 민감성 품종을 간편하고 빠르게 screen하는 방법을 소개하고, 선별된 품종간의 뿌리의 생장, 뿌리 조직의 염색, 알루미늄 함량, 원형질막의 $H^+$-ATPase의 발현 변화를 조사하여 분석하였다. l. 보리 65가지 품종을 간이 수경재배법을 이용하여 $20{\mu}M$ 알루미늄을 24시간 처리 후 뿌리생장의 차이로 내성 세 품종(자예2, 자예6, 모치무기)과 민감성 세 품종(흰쌀, 올쌀, 품2)을 선별하였다. 2. 알루미늄에 내성 품종은 알루미늄 처리 농도(0, 5, 10, $20{\mu}M$)에 따라 뿌리 생장 감소폭이 적었으나, 민감성 세 품종은 상대적으로 낮은 $5{\mu}M$ 농도에서부터 80%의 생장이 억제되었다. 3. 내성인 자예2와 민감성인 품2의 알루미늄 처리 후, 농도별(0, 5, 10, $20{\mu}M$), 시간별(3, 6, 12, 24시간)로 0.2% hematoxylin으로 염색 시 주로 apex에 3시간 이후부터 염색되었으며, 민감성 품2가 내성인 자예2에 비해 농도와 시간에 따라 그 피해 정도가 매우 심각하였다. 4. $20{\mu}M$로 24 시간 처리된 뿌리 apex(10 mm)의 알루미늄 함량을 측정한 결과, 내성인 자예2는 주당 47.1 nmol의 함량을 보여 주었으나, 민감성인 품2는 주당 64.9 nmol의 높은 함량을 보여 주었다. 5. 24시간 동안 $20{\mu}M$ 알루미늄을 처리한 뿌리 원형질막 $H^+$-ATPase 발현을 western blotting을 통해 분석한 결과, 내성인 자예2는 차이가 없었으나, 민감성 품2는 현저히 억제되었다. 이로 보아 원형질막 $H^+$-ATPase가 알루미늄의 내성 기작에 관여하는 것으로 보인다. 6. 본 연구를 통해 간이 수경재배와 hematoxylin을 이용한 염색으로 간단하고 빠르게 보리의 알루미늄 내성과 민감성 품종의 screening을 할 수 있었고, 보리뿐 아니라 쌀, 밀 등의 다른 종자에도 적용할 수 있을 것이다.
This study investigated the extractability, solubility, Mg$^{2+}$-, Ca$^{2+}$- and EDTA-ATPase activity of actomyosin prepared from leg and breast muscle of dog meat. The actomyosin extractability of breast muscle(2,100.6 mg/l00 g) was higher than that of leg muscle(500.8 mg/l00 g). The Mg$^{2+}$-ATPase activity of actomyosin had a high ionic strength of 0.02$\sim$0.05 M KCI and did not differ between leg and breast muscle. The Ca$^{2+}$-ATPase activity of actomyosin had a high ionic strength of 0.02$\sim$0.10 M KCI and leg muscle had a higher level of Ca$^{2+}$-ATPase activity than breast muscle did. The EDTA-ATPase activity was lower in low ionic strength and showed higher in high ionic strength, and increased sharply with increasing ionic strength up to 0.3 M KCI. The solubility of actomyosin did not differ between leg and breast muscle, and the solubility started and ended at KCI concentrations of 0.35 M and 0.4 M, respectively.
It was previously reported from our laboratory that the rate of deterioration of contractile force was slower in the heart of the ginseng extract treated rats. It was also found that ginseng may have an ability to sustain the normal function of the heart by sustaining Ca accumulation by sarcoplasmic reticulum. $Ca^{++}-dependent$ ATPase plays the central role in movement of $Ca^{++}$ ion from sarcoplasm into sarcoplasmic reticulum. In this investigation, the fragment of sarcoplasmic reticulum was prepared from rat heart treated with ginseng water extract orally 100mg/kg/day for 7 to 10 days and from normal rat heart. $Ca^{++}-dependent$ APTase activity was estimated by a modified method of Fiske and Subbarow's procedure. Experimental groups were divided into 6 groups, depending on the preincubation time, 5, 30 and 60min. at ${25}^{\circ}C$ and ${37}^{\circ}C$ respectively. In both of the groups of ${25}^{\circ}C$ and ${37}^{\circ}C$, $Ca^{++}-dependent$ ATPase activities of the ginseng treated rat hearts were higher than that of normal hearts. Therefore, it can be concluded that $Ca^{++}-dependent$ ATPase activities in sarcoplasmic reticulum of rat hearts were increased by the treatment with ginseng extract.
D. radiodurans RecA 단백질은 DNA에 결합한 DNA-단백질 복합체만이 ATPase 활성을 나타내며. 보통의 낮은 염 농도조건에서는 DNA가 존재하지 않으면 RecA 단백질에 의한 ATP 가수분해는 거의 일어나지 않았으나 이러한 ATP 가수분해현상은 높은 농도의 염을 첨가하게 되면 1,000배 활성화 되었으며 1.6 M KCl이 존재할 때 ATP 혹은 dATP를 가수분해 하였다. DNA가 존재하지 않을 때 염에 의해 촉진되는 활성은 RecA 단백질 농도에 비례하였고, 더 높은 염농도에서 더 높은 ATP 가수분해 활성이 나타났다. 이러한 활성화 현상을 다양한 종류의 이온 형태에서 분석하였을 때 1.6 M Cl 음이온이 존재할 때 양이온의 형태에 따른 활성화 정도는 $K^+{\geq}Na^+$> $NH_4^+$의 경향을 보였으며, 1.6 M의 K 양이온 존재할 때 음이온의 형태에 따른 활성화는 glutamate > $Cl^-$ > acetate > $PO_4^-$의 순서로 높게 나타났다. 고농도의 염이 존재하는 조건에서 DNA 비의존성 ATPase의 활성은 비교적 넓은 범위 최적 조건인 pH7과 pH 8 사이에서 최대 활성을 보였고, 기질에 대한 친화도면에서도 외가닥 DNA 의존성 활성보다는 이중가닥 DNA 의존성 활성형태를 보였다. 고농도의 염이 첨가되고 DNA가 존재하지 않을 때 RecA 단백질에 의한 ATP 가수분해를 위한 RecA 단백질의 활성 종 형태는 최소 3개의 RecA 단백질이 결합되어 있는 과량체로 작용하는 것으로 나타났다.
The UV-pattern of several flavones, theier cytotoxicities against L1210 cell and their Inhibiting effects on ATPase from the cell seem to be correlated. 5.2'-Dihydroxy 6, 7, 8, 6'-tetramethoxyflavone ($ED_{50}$ = 2.3 ug/ml) and 5,2',6'-trihydroxy-6, 7, 8 trimethoxy flavone ($ED_{50}$ = 4.5 ug/ml), the most active flavones studied, have shown a narrow range of the absorbance ratio, Log $\varepsilon$ II/Log $\varepsilon$ I = 1.073 -1.109. They have inhibited the ATPase-activity to the greatest extent. These finding ssuggest that a certain angle between the flavone rings B and C plays an important role for the inhibition of the enzyme activity and thus the cytotoxicity.
In this study we assessed the influences of ultraviolet (UV) light B radiation on epidermal ATPase-positive dendritic cell (DC) and the effect of green tea treatment in ICR mouse. The extent of changes following 200 mJ/$cm^2$ (0.5 mW/sec) was studied at 0, 6, 12, 18, 24, 30 or 36 hours after exposure. SBCs were decreased by 6 hours after irradiation. There was tendency to decrease from 6 hours to 24 hours and had little further change from then to 36 hours after irradiation. The mice that received 0, 50, 100, 200, 300 or 400 mJ/$cm^2$ of UVB were examined 24 hours after irradiation. The DCs were decreased as the radiation dose increases from 100 to 400 mJ/$cm^2$. The frequency of UVB (200 mJ/$cm^2$)-induced DC decrease was reduced by treatment of green tea (i.p. and topical application, p<0.01).
1. 표고버섯의 미토콘드리아는 설탕 농도 $44{\sim}50%$ 사이에서 분리정제 되었다. 2. 파장 변화에 따른 미토콘드리아성 ATPase의 비활성도는 680 nm파장에서 가장 증가하였다. 3. 680nm에서 빛 조사 시간 변화에 따른 활성도는 5분 동안 조사하였을 때 가장 증가하였다. 4. 최적 광조건(680nm, 5분)에서 조사한 이 효소의 최적 pH 및 최적 온도는 7.5와 $59^{\circ}C$였다. 5. 최적 광조건에서 얻은 이 효소는 $Fe^{3+},\;Fe^{2+},\;Mg^{2+},\;K^+$ 및 $Ca^{2+}$ 이온에 의하여 활성화되었고, $Na^+$ 이온에 의하여 억제되었다.
This study was done to investigate the effects of different dietary oils on hepatic mitochondrial lipid compositon, adenine nucleotide translocase(AdNT) and ATPase activities in carcinogen treated rats. Sixty male Sprague-Dawley rats, weighing 50∼60g, were fed three different types of dietary oil, beef tallow(BT), corn oil(CO) and sardine oil(SO) at 15% by weight for 14 weeks. Three weeks after feeding rats were intraperitoneally injected with a single dose of diethylnitrosamine(200mg/Kg BW). After five weeks rate fed 0.02% acetylaminofluorene contating diet for 6 weeks, and after seven weeks 0.05% phenobarbital containing diet for 7 weeks. At 14th week, rats were sacrificed and hepatic mitochondrial lipid composition, AdNT and ATPase activities were determined. Percent liver weight per body weight was significantly by carcinogen treatment. Analysis of mitochondrial lipid composition showed that body cholesterol and phospholipid contents were not affected by dietary oils but significantly increased by carcinogen treatment. Individual phospholipid composition as well as phosphatidyl ethanolamine/phosphatidyl choline ratio were altered by either dietary oils or carcinogen treatment. Fatty acid composition was changed by dietary oils but not much by carcinogen treatment. AdNT activity was affected by dietary oils in only carcinogen treated groups. ATPase activity was affected by dietary oils in only carcinogen nontreated groups. These data indicate that both dietary oils and caricinogen treatment can change mitochondrial lipid composition and thereby change AdNT and ATPase activities. Particularly effects of carcinogen treatment on cholesterol/phopholipid ratio, phospholipid compositon and ATPase activity were different among dietary oil groups. Therefore it is suggested that different dietary oils can somewhat modulate the changes of mitochnodrial lipid composition and membrane bound enzyme activites during hepatocarcinogenesis.
쇠고기의 사태, 갈비 및 등심부위를 8$^{\circ}C$에 저장하면서 육질의 변화를 검토하기 위해 전단력가, 근원섬유의 소편화, actomyosin의 추출성 및 ATPase 활성을 측정하였다. 사태 및 등심부위의 전단력가는 저장 6일째 현저하게 낮아졌고, 갈비부위는 저장기간 동안 현저한 차이가 없었다. 저장초기 부위별 전단력가는 갈비, 등심 및 사태부위의 순으로 현저한 차이가 있었으나 저장기간이 경과하면서 갈비 및 등심부위는 비슷하였다. 근원 섬유 소편화도의 경우 사태부위는 저장 6일째 현저한 증가를 보였지만 갈비와 등심부위는 저장기간동안 계속 증가하였다. 근원섬유의 소편화율도 소편화도와 비슷한 양상이었으며, 갈비와 등심부위는 사태부위와 다른 변화를 보였다. Actomyosin의 추출성은 저장초기 갈비, 등심 및 사태부위의 순으로 높게 나타났으며 3일째 모든 부위가 증가하다가 등심부위는 저장 6일째 감소하였다. Acomyosin의 Mg2+-ATPase 활성의 경우, 사태부위는 저장 3일째 증가하다가 6일째 저장 0일의 수준으로 회복되었고, 갈비 및 등심부위는 비슷한 변화를 나타내었지만 0일째는 등심부위가 갈비부위보다 높게 나타났다. 그리고 사태부위의 Ca2+-ATPase 활성도 저장 3일째 증가하다가 6일째 감소하였으며, 갈비부위는 저장 중 변화가 없었고, 등심부위는 저장기간 동안 완만하게 감소하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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