음이온계면활성제인 sodium di[2-ethylhexyl] sulfosuccinate(AOT)를 isooctane에 용해하여 조제한 W/O형 마이크로에멀젼을 이용하여 수용액중의 카드뮴, 구리 및 크롬 등의 중금속이온을 조작이 간단하고 효과적이며 대량으로 분리처리할 수 있는 시스템을 개발하였다. $Cd^{2+}$, $Cu^{2+}$ 및 $Cr^{3+}$는 W/O형 마이크로에멀젼에 의한 분리 후 3~7분 후에 평형에 도달하였고, 분리율과 분리속도는 수용액의 pH가 증가할수록 증가하였으며 $Cr^{6+}$ 는 전 pH 영역에서 분리제거가 되지 않았다. pH 3.5에서 $Cr^{3+}$는 5분 후에 90%이상 제거되었다. 분리속도식은 유사1차식으로 나타낼 수 있으며, 초기 물질전달계수(Jo)와 수용액 pH의 상관관계를 제시하였다.
본 연구에서는 음이온 계면활성제인 dioctyl sulfosuccinate (aerosol-OT, AOT)와 비극성 유기용매인 isooctane으로 구성된 역미셀계를 이용하여 lipoxygenase의 반응특성을 살펴보았다. 기질로 사용되는 ${\alpha}-linoleic\;acid$가 5%(w/v) cupric acetate-pyridine 용액에 의하여 정량적으로 발색됨을 확인하였는 바, 기질이 단위시간당 소모되는 정도로서 lipoxygenase 효소의 활성을 측정하였다. Lipoxygenase 효소반응을 위한 최적 pH, 온도 및 R값 ([water]/[AOT]) 등을 측정한 결과 각각 5.0, $25^{\circ}C$, 10.0 등이었으며 $K_m$ 및 $V_{max}$값은 각각 0.31 mM of ${\alpha}-linoleic\;acid$ 및 $384.16{\mu}mol$ of ${\alpha}-linoleic\;acid\;decomposed/min$임을 확인함으로써, 역미셀계내에서 lipoxygenase 효소활성을 예민하고 안정되게 측정할 수 있었다. 한편, 지용성 항산화제의 일종인 ${\alpha}-tocopherol$을 역미셀계에 적용시킨 결과 최대 72%까지 lipoxygenase 효소의 활성도를 저해하는 것으로 판명되었으며, 이는 대두 가공품 및 곡류 가공품에 ${\alpha}-tocopherol$을 첨가함으로써 가공품의 품질을 향상시킬 수 있을 것으로 기대된다.
지용성 물질은 물에 용해되지 않아 수용액 효소반응계에서의 특정효과를 평가하기가 어렵다. 생체내에서 멜라닌을 합성하는 효소인 tyrosinase의 지용성 저해제를 탐색하고자 유기용매, 계면활성제 및 물로 구성된 광학적으로 투명한 RM을 도입하였다. Tyrosinase의 겉보기 반응이 물에서와 유사한 RM의 형성조건 중 유기용매는 isooctane, 계면활성제는 100 mM의 dioctyl sulfosuccinate(AOT)가 적절하였다. RM에서 물과 AOT의 몰 농도 비율이 15일 때 tyrosinase(103.5 units)는 기질인 3,4-dihydroxy-L-phenylalanine(0.18 mM)에 대하여 수용액에서와 유사한 거동을 나타내었다. 또한 tyrosinase 저해제인 cinnamic acid 존재 하에서도 tyrosinase 촉매 반응의 반응 생성물이 반응 시간에 비례하여 형성됨이 확인되어 지용성 물질도 RM에서는 tyrosinase 저해활성이 가능함을 시사하였다. 따라서 RM은 수용성인 효소와 기질 그리고 지용성인 저해제를 모두 하나의 상(phase)에 용해시킬 수 있어 지용성 물질의 tyrosinase 저해 효과를 분석할 수 있는 중요한 수단으로 활용할 수 있을 것으로 판단되었다.
The extraction behavior of an alkaline protease using reversed micelles was investgated. The reversed micellar solution consisted of AOT in isooctane. It was found that distribution of arkaline protease into the organic phase increased at lower pH, lower ionic strength, and higher AOT concentration. When the real fermentation broth was extracted of alkaline protease, an activity yield of 20% and a purification factor of 2.0 were obtained.
AOT-Isooctane 역마이셀계를 이용한 단백질 추출 및 회수에 영향을 미치는 여러 가지 요인과 단백질 혼합물로부터의 선택적인 분리에 대해 연구 검토하였다. Lysozyme, ${\alpha}-chymotrypsin$은 AOT 100 mM까지 높은 추출율을 보이다가 100 mM 이상에서는 점차 감소하였고, BSA는 200 mM까지 추출율이 증가하다가 그 이상에서는 감소하였다. pH에 따른 단백질의 역마이셀로의 추출은 등전점이 높은 lysozyme이 pH4-10, ${\alpha}-chymotrypsin$과 trypsin은 각각 pH5, 5.4에서 95% 이상의 높은 추출율을 보였으며 등전점이 낮은 pepsin과 BSA는 어떤 pH 영역에서도 거의 추출되지 않았다. 이온강도를 증가시켰을 때 단백질의 추출이 감소하였고, Wo가 감소하면서 역마이셀의 크기도 감소하였으며 이온에 따라 $Mg^{2+}>Na^+>Ca^{2+}>K^+$의 순으로 타났다. 단백질 회수시에는 전반적으로 추출과는 반대경향을 보였으며, lysozyme의 경우 회수하는 수용액이 1.0M KCl-pH 12.2일 때, ${\alpha}-chymotrypsin$은 0.5M KCl-pH6.7, trypsin은 0.5M KCl-pH 12.6일 때 85% 이상의 높은 회수율을 얻었다. BSA/lysozyme 혼합물로부터 각각의 분리를 시도하였는데, BSA는 forward transfer 후 역마이셀내로 추출되지 않은 채 수용액상에 남게하고 lysozyme은 역마이셀내로 추출시킨 후 backward transfer 과정을 거쳐 새로운 수용액상으로 회수하여 전기영동으로 확인하였다.
역미생용액으로 단백칠을 추출하는 공정에셔 수용 액의 이온세기와 pH가 중요한 공정변수가 된다. 본 실험에셔 사용한 역미생용액은 AOT를 Isooctane에 5 50mM의 농도로 용해시켜 사용하였고 단백칠로서 alkaline protease를 model compound로 사용하여 추출설험을 수행한 결과 본 설험의 범위에서 pH가 낮을수록, 이온세기가 낮을수록 효율적인 추출이 이루어졌으며, pH가 3.0 그리고 이온세기가 O.lM KCI 일때 분배계수가 4.0으로 가장 크게 나타났다. 단백질의 용매추출 장치로서 설관막 모률을 제작 하여 alkaline protease를 역미생을 이용하여 용매 추출을 수행하였는 바, 단백질 분리공정에 효과적인 장치로 사용될 수 었음을 보여주였다. 본 실험의 조 건에서 총괄물질전달계수 Ko가 $6.7{\times}10^{-5}cm/s$이었으며 유기용매상의 개별물칠전달저항이 수용액상의 물질전달저항보다 중요하게 나타났다. 실관막 추출 장치의 조업시 설관막 양쪽 상의 압력차를 $0.1kg/cm^2$. 이하로 조절하여 emulsion의 형성을 방지할 수 있었다.
한국막학회 2004년도 Proceedings of the second conference of aseanian membrane society
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pp.179-182
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2004
This study reports the extraction behavior of $\alpha$-lactalbumin using bis(2-ethylhexyl) sulfosuccinate sodium (AOT) reverse micelles. Forward extraction of $\alpha$-lactalbumin in the reverse micellar organic phase from aqueous feed solutions was strongly dependent on the AOT concentration and the complete forward extraction of 0.03 mM $\alpha$-lactalbumin was successfully achieved at an AOT concentration of ca. 100 mM. A similar dependency of the forward extraction on the AOT concentration was obtained in isooctane, n-hexane, and n-octane systems. In the backward extraction from the micellar organic phase, the recovery of the protein as high as ca. 90% was obtained with pH control and/or salt addition.
The basic and optimum conditions for the extraction of peroxidase from Chinese cabbage root applying the reverse micelle system were investigated. In order to purify Peroxidase (POX) from crude extract of Chinese cabbage roots, isooctane containing 110 mM Aerosol OT (AOT) was well mixed with the same volume of crude extracts containing 50 mM NaCl and 30 mM Tris-HCI buffer of pH 8.0. After centrifugation, AOT reverse micelle containing the isooctane phase were mixed with 80 mM Tris-HCI buffer at pH 7.0 containing 1 M KCl. From these operations, POX was purified 20-fold with a 60% yield. For further purification, DEAE-Toyopearl column chromatography was applied, and it showed a single protein band on SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The resulting POX showed 93-fold purification with a 40% yield.
유기용메인 이소옥탄(isooctane)에 계면활성제를 이용하여 물을 역마이셀 형태로 생성시킨 후, 이소프로필 알코올(isopropyle alcohol)에 묽힌 티타늄알코옥사이드(tetraisopropyl orthotitanate)를 가하여 가수분해 반응를 거쳐 TiO(OH)2 분말을 제조하였다. 역마이셀에 의한 TiO(OH)2 분말 제조에 미치는 공정변수들인 계면활성제의 종류, 농도, 보조계면활성제, 가수분해 반응온도, pH등이 생성된 입자의 크기, 모양, 입도분포에 미치는 영향을 규명하였다. 비이온계활성제인 Span 80을 사용하였을 경우에는 Span 80의 농도변화, 가수분해 반응온도 변화, pH변화에 무관하게 입도분포가 uninodal형태였으나, 음이온계면활성제인 Aerosol-OT(AOT)를 사용하였을 경우, binodal형태를 나타내었다. 에타올(ethanol)을 cosurfactant로 첨가한 계(AOT, 1.0CMC, isooctane+ethanol, pH2.5, 30$^{\circ}C$)로 부터 생성된 입자는 평균입경이 0.12${\mu}{\textrm}{m}$ 으로서 미세할 뿐아니라 입도분포도 매우 좁은 것을 알 수 있다. 따라서, cosurfactant의 유무가 생성 입자의 입도분포에 큰 영향을 미치는 것을 알 수 있다. FT-IR 분석으로 T1-O 결합과 Ti-OH 결합에 의한 흡수피크를 확인하였고, TGA-DTA 분석결과에 의하면 41$0^{\circ}C$ 부근의 발열피크로 부터 비정질 구조에서 anatase 구조로 결정화가 시작됨을 알 수 있었으며, 온도 상승과 더불어 결정이 성장하여 약 45$0^{\circ}C$ 정도에서 비정질상이 anatase상의 결정구조로 완전히 전이됨을 확인하였다.
본 연구에서는 비이온 계면활성제, 보조계면활성제 등의 첨가제가 AOT 계면활성제 시스템의 water-in-oil(W/O) 마이크로에멀젼을 이용한 AgCl 나노입자 제조에 미치는 영향에 관하여 살펴보았다. AOT 계면활성제, isooctane, 무기염 수용액으로 이루어진 삼성분 시스템에 NP 계열 비이온 계면활성제를 첨가한 결과, 단일상으로 존재하는 W/O 마이크로에멀젼 영역은 증가하였으며, 일반적으로 첨가한 비이온 계면활성제의 친수성이 증가할수록 단일상의 영역은 증가하였다. 또한 첨가한 비이온 계면활성제는 마이셀의 계면을 보다 유연하게 함으로써 생성된 입자의 크기는 증가하고 분포도는 넓어졌다. 한편 보조계면활성제로 알코올을 첨가하면서 상평형 실험을 수행한 결과, 알코올의 사슬 길이가 증가하거나 첨가량이 증가할수록 단일상으로 존재하는 W/O 마이크로에멀젼이 보다 좁은 영역에서 형성되었다. 상평형 실험결과에 의하여 결정된 단일상의 W/O 마이크로에멀젼 영역 내에 해당하는 조건에서 보조계면활성제의 사슬 길이와 첨가량을 변화시키면서 AgCl 나노입자 제조실험을 수행한 결과, 생성된 AgCl 입자의 특성은 보조계면활성제 첨가에 따른 마이크로에멀젼의 radius of spontaneous curvature와 필름 rigidity의 변화에 의하여 결정됨을 알 수 있었다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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