In the present study, we have tested the effect of dioleoyl phosphatidic acid (PA) on intracellular $Ca_{2+}$ concentration ($[Ca^{2+}]_{i}$) in two human colon cancer cell lines (HCT116 and HT29). PA and lysophosphatidic acid (LPA), a bioactive lysolipid, increased $[Ca^{2+}]_{i}$ in both HCT116 and HT29 cell lines. Increases of $[Ca^{2+}]_{i}$ by PA and LPA were more robust in HCT116 cells than in HT29 cells. A specific inhibitor of phospholipase C (U73122), however, was not inhibitory to the cell responses. Pertussis toxin, a specific inhibitor of $G_{i/o}$ type G proteins, however, had an inhibitory effect on the responses except for an LPA-induced one in HT29 cells. Ruthenium red, an inhibitor of the ryanodine receptor, was not inhibitory on the responses, however, 2-APB, a specific inhibitor of inositol 1,4,5-trisphosphate receptor, completely inhibited both lipid-induced $Ca^{2+}$ increases in both cell types. Furthermore, by using Ki16425 and VPC32183, two structurally dissimilar specific antagonists for $LPA_{1}/LPA_{3}$ receptors, an involvement of endogenous LPA receptors in the $Ca^{2+}$ responses was observed. Ki16425 completely inhibited the responses but the susceptibility to VPC32183 was different to PA and LPA in the two cell types. Expression levels of five LPA receptors in the HCT116 and HT29 cells were also assessed. Our data support the notion that PA could increase $[Ca^{2+}]_{i}$ in human colon cancer cells, probably via endogenous LPA receptors, G proteins and $IP_{3}$ receptors, thereby suggesting a role of PA as an intercellular lipid mediator.
Kim, Dong-Goo;Lee, Seoul;Kang, Dong-Won;Lim, Jong-Su
The Korean Journal of Physiology and Pharmacology
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제2권6호
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pp.677-685
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1998
To investigate the effects of neonatal stress on behavior and neurochemistry, rats were exposed to the footshock stress on postnatal day (PND) 14 or PNDs 14 and 21. Rats were exposed to uncontrollable electric shocks delivered to the floor with a constant current (0.8 mA) for 5 sec period. Daily sessions consisted of 60 trials on a random time schedule with an average of 55 sec. The first exposure to footshocks on PND 14 decreased body weight gain for 1 day. However, the second exposure to footshocks on PND 21 did not affect body weight gain. Exploratory activity was measured by exposing a rat to a novel environment 24 h after experience of footshocks. Similar to the body weight changes, a decreased activity was noted after the first exposure to footshocks, while no changed activity was noted after the second exposure to footshocks. However, the Bmax value of $5-HT_{2A/2C}$ receptors in the cortex decreased by the second exposure to footshocks, but not by the first exposure to footshocks. Moreover, an autoradiographic study revealed that the density of $[^3H]dexamethasone$ binding in hippocampus decreased in rats exposed to footshocks 4 times during PND $14{\sim}20.$ These results suggest that the uncontrollable footshock stress changes 5-hydroxytryptamine and glucocorticoid receptor systems acutely and that the repeated exposure to the same stress may not elicit behavioral alterations by the compensatory activity of young brain although changes in some neurochemistry exist.
Julbernardia globiflora는 미옴보 숲에 널리 분포하는 열대 아프리카 나무로, 우울증, 위장장애 등의 치료를 위해 민간요법으로 사용되고 있으나, 항산화능, 항암 활성 등에 대한 연구는 알려진 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 J. globiflora 메탄올 추출물(MEJG)을 사용하여 항산화능 및 인체 대장암 세포주인 HT29에 대한 항암 활성에 관하여 분석하였다. 먼저 DPPH radical scavenging activity를 통해 분석한 결과, MEJG의 $IC_{50}$는 $1.23{\mu}g/ml$로 강력한 항산화능을 보유하였음을 확인하였다. 또한 MEJG 농도 의존적으로 HT29 세포의 성장을 억제하였다. MEJG의 HT29 세포 사멸 효과의 기전을 분석하기 위하여 Annexin V 염색과 DAPI 염색을 수행한 결과, 대조군에 비하여 apoptotic 세포 및 apoptotic body가 증가됨을 확인하였다. 또한 apoptosis 관련 단백질들의 발현변화를 분석한 결과, MEJG처리에 의해 사멸수용체인 Fas와 pro-apoptotic 단백질인 Bax의 발현이 증가되었으며, anti-apoptotic 단백질인 Bcl-2의 발현이 감소하였다. 이러한 결과로 cytochrome c가 미토콘드리아에서 세포질로 방출되어 증가되었으며, caspase-3, -8, -9가 활성화되었다. 최종적으로 PARP가 분해되어 apoptosis가 유도되었음을 확인하였다. 이러한 결과들로부터 MEJG는 내인성 및 외인성 경로를 통한 apoptosis 유도에 의하여 HT29 세포의 증식을 억제하는 항암활성을 보유하였음을 확인하였다.
The pharmacotherapy of schizophrenia exhibits wide inter-individual variabilities in clinical efficacy and adverse effects. Recently, human genetic diversity has been known as one of the essential factors to the variation in human drug response. This suggests that drug therapy should be tailored to the genetic characteristics of the individual. Pharmacogenetics is the field of investigation that attempts to elucidate genetic basis of an individual's responses to pharmacotherapy, considering drug effects divided into two categories as pharmacokinetics and pharmacodynamics. The emerging field of pharmacogenomics, which focuses on genetic determinants of drug response at the level of the entire human genome, is important for development and prescription of safer and more effective individually tailored drugs and will aid in understanding how genetics influence drug response. In schizophrenia, pharmacogenetic studies have shown the role of genetic variants of the cytochrome P450 enzymes such as CYP2D6, CYP2C19, and CYP2A1 in the metabolism of antipsychotic drugs. At the level of drug targets, variants of the dopamine $D_2$, $D_3$ and $D_4$, and 5-$HT_{2A}$ and 5-$HT_{2C}$ receptors have been examined. The pharmacogenetic studies in schizophrenia presently shows controversial findings which may be related to the multiple involvement of genes with relatively small effects and to the lack of standardized phenotypes. For further development in the pharmacogenomics of schizophrenia, there would be required the extensive outcome measures and definitions, and the powerful new tools of genomics, proteomics and so on.
Tumor necrosis factor ($TNF-{\alpha}$), an inflammatory cytokine that plays an important role in the control of cell proliferation, differentiation, and apoptosis, has previously been used in anti-cancer therapy. However, the therapeutic applications of $TNF-{\alpha}$ are largely limited due to its general toxicity and anti-apoptotic influence. To overcome this problem, the present study focused on the effect of active constituents isolated from a medicinal plant on $TNF-{\alpha}$-induced apoptosis in human colon adenocarcinoma (HT-29) cells. Nimbolide from Azadirachta indica was evaluated for cytotoxicity by methyl tetrazolium 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2, 5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and phase contrast microscopy. Effects on apoptotic signaling proteins were investigated using Western blot analysis. Nimbolide showed cytotoxicity against HT-29 cells that was significantly different from the control group (p<0.01), a concentration of $10{\mu}M$ significantly inducing cell death (p<0.01). In combination with $TNF-{\alpha}$, nimbolide significantly enhanced-induced cell death. In apoptotic pathway, nimbolide activated c-Jun N-terminal kinase (JNK) phosphorylation, BH3 interacting-domain death agonist (Bid) and up-regulated the death receptor 5 (DR5) level. In the combination group, nimbolide markedly sensitized $TNF-{\alpha}$-induced JNK, Bid, caspase-3 activation and the up-regulation of DR5. Our findings overall indicate that nimbolide may enhance $TNF-{\alpha}$-mediated cellular proliferation inhibition through increasing cell apoptosis of HT-29 cells by up-reglation of DR5 expression via the JNK pathway.
알코올 의존의 음주 행동에 VTA에서 NA로 뻗어 있는 도파민 대뇌 보상 경로가 중요하다. 이러한 경로의 토파민 활성도가 $5-HT_3$계 신경에 의하여 조정되고 있으며, $5-HT_3$ 수용체 길항제인 ondansetron (OND)이 알코올리즘 환자에서 음주량을 감소시키고 금주률을 높인다는 보고가 있다. 이에 생쥐의 섭취량에 대하여 $5-HT_3$ 수용체 길항제인 ondansetron의 투여 효과와, 이러한 ondansetron 및 비 특이적 아편계 수용체 길항제인 naltrexone (NTX)과의 병합 투여 효과를 검증하는데 목적이 있다. 알코올 의존화 된 C57BL/6형 수컷 생쥐를 4군으로 나눈 뒤, 10일간 각 군에 vehicle, OND 0.01 mg/kg 단독, NTX 1.0 mg/kg 단독, 및 OND 0.01 mg/kg과 NTX 1 mg/kg 병합 투여하면서 2시간 알코올의 섭취량, 22시간 물 섭취량, 24시간 사료 섭취량 및 체중을 조사하였다. 본 연구의 결과로 2시간 알코올 섭취량의 10일간 변화에 대해 vehicle 투여 군과 나머지 3군의 약물 투여군과 repeated measure ANOVA를 이용하여 각각 비교하였을 때, vehicle 투여군과 NTX 단독 투여군간에 유의한 교차가 관찰되었으나 (p=0.042), OND 단독 투여군과 NTX과 OND 병합 투여군은 vehicle 투여군과 유의한 차이가 없었다. 일별 2시간 알코올 섭취량에 대하여 NTX 투여군과 vehicle 투여군의 군간 비교시 vehicle 투여군에 비하여 NTX 투여군에서 약물 투여 4일부터 10일까지 유의하게 감소하였다(4일 p=0.010; 6일 p=0.050; 8일 p=0.017; 10일 p=0.005). 그리고 NTX과 OND 병합 투여군과 vehicle 투여군의 양군을 비교하였을 때에는 2시간 알코올 섭취량이 4일과 10일에만 유의하게 감소하였다(4일 p=0.049; 10일 p=0.022). 그러나 22시간 물 섭취량, 24시간 사료 섭취량 및 체중의 10일간 변화에 대해 vehicle 투여군과 나머지 3 군의 약물 투여군과의 repeated measure ANOVA를 이용하여 각각 비교하였을 때, 모두 유의한 교차효과가 없었다. 이상의 결과는 생쥐의 섭취량에 대하여 OND의 투여 효과는 없었으며, OND과 NTX의 병합 투여시에는 NTX의 알코올의 섭취량 억제 효과가 감소되었다. 따라서 앞으로 $5-HT_3$ 신경계와 도파민 및 아편 신경계와의 상관관계에 대한 연구가 필요할 것으로 생각된다.
혈압 및 심박동수 조절에 대한 serotonin성 기전의 역할을 흰쥐 뇌의 NTS에서 검토하고 catecholamine성 기전과 비교하여 다음과 같은 결과를 얻었다. 1) 5-HT를 NTS에 주사시 혈압 및 심박동수는 감소되었고, 5-HT 300 pmol을 NTS에 주사하였을 때 가장 현저하게 하강하였다. ${\alpha}-MNE$과 clonidine도 마찬가지로 혈압과 심박동수의 감소를 일으켰다. 5-HT의 효과는 5-HT 수용체 길항제인 ritanserin, methysergide 및 ketanserin의 전처치에 의하여 봉쇄되었다. 2) Reserpine과 6-OHDA를 전처치하였을 때는 5-HT에 의한 혈압 및 심박동수 감소가 현저하게 약화되었다. 3) 5,7-DHT 전처치 후에는 5-HT에 의한 혈압 및 심박동수 감소는 증가하였다. 한편 6-OHDA 전처치에 의하여서도 clonidine의 혈압 및 심박동수 감소 현상은 항진하였다. 4) 5,7-DHT와 6-OHDA를 i.c.v.로 전처치하였을 때 phenylephrine과 sodium nitropursside에 의한 압반사 감수성은 현저히 저하하였고, 이들을 NTS로 주사시도 압반사 감수성이 손상되었다. 5) Immunohistochemistry에 의해 NTS에서 catecholamine성 세포체, 신경축색 말단과 serotonin성 신경축색 말단을 관찰하였고, 6-OHDA 주사후에 catecholamine성 신경축색 말단의 varicosity는 현저히 감소하였다. 한편 5,7-DHT처치에 의하여서는 serotonin성 신경축색 말단의 varicosity가 현저히 감소하였다. 이상의 실험 결과, NTS에 있는 serotonin성 수용체의 활성에 의하여 (1) 혈압 및 심박동수 감소가 일어나며, (2) 이는 catecholamine성 신경계와 관련되어 야기되며, (3) serotonin과 catecholamine성 수용체는 NTS의 postsynaptic site에 존재하고, (4) serotonin과 catecholamine성 신경세포는 압반사 조절에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 사료된다.
Resveratrol is a phytoalexin found in grapes, red wine, and berries. Resveratrol has been known to have many beneficial health effects, such as anti-cancer, neuroprotective, anti-inflammatory, and life-prolonging effects. However, relatively little is known about the effects of resveratrol on the regulation of ligand-gated ion channels. We have previously reported that resveratrol regulates subsets of homomeric ligand-gated ion channels such as those of 5-$HT_{3A}$ receptors. The ${\gamma}$-aminobutyric $acid_C$($GABA_C$) receptor is mainly expressed in retinal bipolar cells and plays an important role in visual processing. In the present study, we examined the effects of resveratrol on the channel activity of homomeric $GABA_C$ receptor expressed in Xenopus oocytes injected with cRNA encoding human $GABA_C$${\rho}$ subunits. Our data show that the application of GABA elicits an inward peak current ($I_{GABA}$) in oocytes that express the $GABA_C$ receptor. Resveratrol treatment had no effect on oocytes injected with $H_2O$ or with $GABA_C$ receptor cRNA. Co-treatment with resveratrol and GABA inhibited $I_{GABA}$ in oocytes with $GABA_C$ receptors. The inhibition of $I_{GABA}$ by resveratrol was in a reversible and concentration-dependent manner. The $IC_{50}$ of resveratrol was $28.9{\pm}2.8{\mu}M$ in oocytes expressing $GABA_C$ receptor. The inhibition of $I_{GABA}$ by resveratrol was in voltage-independent and non-competitive manner. These results indicate that resveratrol might regulate $GABA_C$ receptor expression and that this regulation might be one of the pharmacological actions of resveratrol on the nervous system.
In order to develop radiopharmaceuticals for targeting a serotonin receptor such as $5-HT_{1A}$, histidine-$C_n$-arylpiperazines (AP) (C = alkyl, n = 2, 3, 4) were prepared in five steps with yields of 25%, 37% and 51%, respectively, and radiolabeled with the $[^{99m}Tc(CO)_3(H_2O)+3]^+$. The $^{99m}Tc(CO)_3$-Histidine-Cn-APs were prepared with a high yield (>99%) and characterized as a tridentate complex with a neutral charge to pass through the blood-brain barrier (BBB). The rhenium complexes with $Re(CO)_3$ were also synthesised and comparative experiments were achieved to evaluate the nature of the $^{99m}Tc$ complexes.
Treculia africana Decne는 빵나무종으로 뽕나무과, Treculia 속에 속하는 식물로서, 이 식물의 다양한 부위에서 추출한 물질은 항염증, 항균등의 효과를 가지고 있어 백일해의 치료등 다양한 질환에서 민간요법으로 사용되어 왔다. 하지만 정확한 생리활성에 관한 연구는 보고된 바가 없다. 따라서 본 연구에서는 T. africana Decne 메탄올추출물(META)을 사용하여 항산화능 및 인체 대장암 세포주인 HT29에 대한 항암활성에 관하여 분석하였다. DPPH radical scavenging activity를 통해 분석한 결과, META의 IC50가 4.53 μg/ml로 강력한 항산화능을 보유하 였음을 확인하였다. 또한 META 처리에 의해 HT29의 생존율이 감소함과 더불어 IC50가 66.41 μg/ml로 강력한 세포사멸효과를 나타냈다. META 처리에 의해 HT29의 subG1 세포비율 및 Annexin V+ 세포의 비율이 증가하고, DAPI로 염색된 apoptotic body가 증가하였다. 또한 apoptosis 관련 단백질인 Fas, Bax, cytochrome c의 발현이 증가하였으며, 이는 caspase 3, 8, 9를 활성화 시켜 최종적으로 PARP가 분해되어 apoptosis가 유도되었음을 확인하였다. 이러한 결과들을 통해 META는 강한 항산화 활성과, 대장암세포에서 apoptosis 유도에 의한 높은 항암활성을 보유한 물질임을 확인하였다.
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[게시일 2004년 10월 1일]
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