• 생명과학회지
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• 제22권4호
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• pp.552-558
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• 2012

사스(Severe acute respiratory syndrome, SARS)는 사람의 신종 폐렴인 중증 급성 호흡기 질환으로 신종 코로나바이러스, SARS-CoV에 의해 유발된다. 3CL protease는 SARS-CoV의 복제, 전사 및 단백질 합성을 조절하는 복제효소 복합단백질의 프로세싱에 결정적인 역할을 담당하는 중요한 효소이다. 따라서, 이 효소를 저해함으로써 SARS-CoV의 증식을 억제하고 사스의 증폭 및 확산을 막을 수 있다. SARS-3CL protease의 활성 저해물질의 탐색은 사스의 치료제 개발에 중요한 목표 중의 하나로 인식되고 있으며 이를 위해서는 활성형 SARS-3CL protease의 대량 생산이 필요하다. 본 연구에서는 활성형 SARS-3CL protease를 대량 생산하기 위하여 여러 가지 발현 벡터 및 단백질 발현 방법 등을 검토하였다. 그 결과, pET29a/3CLP 발현 벡터를 이용한 무세포 단백질 합성법이 SARS-3CL protease 생산에 최적 조건인 것으로 확인되었다. 또한 발현된 효소를 완전히 정제하여 그 특성을 분석한 결과, 본 효소는 무세포 단백질 합성계에서 전구체로 합성됨과 동시에 자가분해됨으로써 모든 단백질이 활성형인 성숙체 단백질로 전환되어 간단히 활성형 SARS-3CL protease 효소를 생산할 수 있음을 확인하였다.

• 미생물학회지
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• 제20권3호
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• pp.105-112
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• 1982

The strain of Aspergillus, 6368A, producing acid protease showing high activity was isolated from soil, as a result of wide research about mold group. This strain was identified as a species of Aspergillus tubingensis by the investigation of morphological characteristics. The change of the enzyme production under the various media and culture condition was also studied. The optimum pH and stability of crude acid protease are 2.5, 2.0~4.5 and the optimum temeprature and thermal inactivation waas shown $50^{\circ}C,\;55^{\circ}C$, respectively. From the result of the study on the effects of metal ions, it was found that $MnCl_2,\;CoCl_2,\;CuCl_2,\;SrCl_2,\;and\;NiCl_2$ slightly increased the enzyme activity, on the other hand $ZnCl_2,\;CaCl_2,\;MgCl_2,\;SLS,\;and\;KMnO_4$ decreased it.

• Mycobiology
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• 제32권2호
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• pp.74-78
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• 2004

An alkaline protease produced by Aspergillus niger C-15 was purified and characterized. The enzyme was purified 19.41-fold with a specific activity of 74150 U/mg and a recovery of 34.4% by gel filtration and ion exchange chromatography. The molecular weight of the enzyme was estimated to be 34 kDa. The optimum pH and temperature for the protease activity were pH 8.0 and $60^{\circ}C$, respectively. The enzyme activity inhibited by EDTA suggests that the preparation contains a metalloprotease. The enzyme activity of the metalloprotease was completely inhibited by 5 mM $HgCl_2$ and $FeCl_3$, while partially inhibited by $CuSO_4$, and $MnCl_2$. When polyols such as glycerol, mannitol, sorbitol and xylitol, were added to the reaction medium, most polyols tested enhanced protease activity. Especially, glycerol showed the highest effect. The alkaline metalloprotease was stable at high temperature and retained more than 90% of the initial activity at $60^{\circ}C$ and 86.4% under addition of glycerol.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제34권4호
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• pp.323-328
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• 2006

식충식물에서 채취된 시료로부터 protease치 생산균으로 분리된 SH-8은 그람 양성간균으로 16S rRNA외 부분 염기서열에 근거하여 Bacillus속 균주로 확인되었다. Protease 생산을 위한 배지를 제조하기 위해 질소원, 탄소원, 인, 금속이온의 성분을 변화시키면서 균의 성장과 효소 생산성을 비교하였다. 포도당을 탄소원으로 사용하였을 때는 균의 성장은 정상적으로 일어나지만, pretense생산이 완전히 억제되는 것으로 나타났으며, 가용성 전분을 탄소원으로 사용하였을 때 효소 생산성이 가장 높았다. 질소원으로는 yeast extact가 효소 생산에 가장 적합하였으며, 농도가 높으면 효소 생산성이 저하되었다. 한편 2가 금속이온중 $Zn^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Co^{2+}$, $Mn^{2+}$을 배지에 첨가하였을 때는 균의 성장이 심하게 저해되었으며, 효소 생산도 되지 않았다. $CaCl_2$를 첨가한 배지에서는 효소 생산성이 증가되었으며, 효소 반응에 $CaCl_2$를 첨가하였을 때도 효소 활성이 증가하였다. 이로보아 $CaCl_2$는 Bacillus sp. SH-8의 protease 생산성과 활성을 모두 증가시키는 것으로 판단된다. 가용성 전분(2%), yeast extract(0.3%), $CaCl_2$(0.3%), $CaCl_2$(0.01%)와 $KH_2PO_4$(0.01%)를 포함하는 것으로 구성된 최적화 배지에서 최대효소 생산성은 435 U/ml로 나타났으며 26시간이 되었을 때 배양액 내 효소활성은 급격히 감소하였다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제44권3호
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• pp.333-340
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• 2016

호알칼리성 protease를 분비하는 토양에서 분리된 Bacillus sp. DK1122 균주로부터 효소의 생산조건을 검토 후, 효소를 정제하고 특성을 알아보았다. 본 균주의 효소생산 최적 배지조성은 0.5% (w/v) glucose, 0.8% (w/v) yeast extract, 0.5% (w/v) polypeptone, 0.1% (w/v) K₂HPO₄, 0.02% (w/v) MgSO₄· 7H₂O, 1% (w/v) Na₂CO₃, 3% (w/v) NaCl, pH 9.0이었으며, 종배양액 0.5% 접종시 40℃에서 24시간 배양했을 때 효소 생산량이 가장 높았다. Bacillus sp. DK1122가 생산하는 alkaline protease를 70% 포화 ammonium sulfate로 침전시키고, CM-Sepharose column chromatography에 의해 23.9%의 수율에 2.8배의 정제도를 지니는 효소를 얻을 수 있었다. SDS-PAGE를 통해 정제된 protease는 27 kDa의 크기의 단일 subunit으로 확인되었고, 정제된 효소의 최적 pH는 9.0, 최적온도는 60℃였으며, 50℃에서 1시간까지 열에 안정하였고, 60℃에서 10 mM CaCl₂ 첨가 후 3시간까지 90%의 활성을 유지하여 Ca²⁺에 의해 열안정성이 증가하였다. 본 연구를 통해 정제된 호알칼리성 protease는 식품, 세제 및 관련산업에서의 응용성이 매우 높을 것으로 기대된다.

• 한국식품영양과학회지
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• 제38권11호
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• pp.1612-1617
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• 2009

단백질 식품의 가공에 이용할 수 있는 내염성 단백분해효소를 생산하기 위하여, 된장에서 분리한 Aspergillus sp. 101균으로부터 내염성 단백분해효소생산을 위한 최적 배지조성을 확립하였다. 질소원으로서 대두단백원인 탈지대두분(DSF)과 분리대두단백(SPI)을 각각 2% 첨가 시에 효소 활성이 가장 높았고, 무기질소원으로 $CaCO_3$와 $K_2HPO_4$이 각각 0.1%씩 첨가 시에 가장 좋은 결과를 얻었다. 또한 Arabic gum을 배양액에 0.1% 첨가하였을 때, 효소 활성이 가장 높았다. Aspergillus sp. 101은 최고 15% NaCl 농도의 agar plate에서 생육이 가능하였으며, 조효소 또한 NaCl 7%까지 안정하였다. 이와 같이 조정 배지(modified medium)에 Aspergillus sp. 101에 의해 생산된 내염성 단백분해효소는 일반적인 곰팡이류의 단백분해효소 생산용 배지에 비해 생산성이 높았으며, 최적배지에서 배양한 Aspergillus sp. 101 유래 단백분해효소에 의한 어육단백질 가수분해물의 기능 개선 또는 식품첨가물로서의 활용은 단백분해효소 생산의 산업화를 가능하게 하는 것으로 보인다.

• Parasites, Hosts and Diseases
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• 제37권1호
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• pp.39-46
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• 1999

As a preliminary study for the explanation of pathobiology of Neodiplostomum seoulense infection. a 54 kDa protease was purified from the crude extract of adult worms by sequential chromatographic methods. The crude extract was subjected to DEAE-Sepharose Fast Flow column, and protein was eluted using 25 mM Tris-HC1 (pH 7.4) containing 0.05. 0.1, 0.2 and 0.4 M NaC1 in stepwise elution. The 0.2 M NaCl fraction was further purified by Q-Sepharose chromatography and protein was eluted using 20 mM sodium acetate (pH 6.4) containing 0.05, 0.1. 0.2 and 0.3 M NaCl, respectively. The 0.1M NaCl fraction showed a single protein band on SDS-PAGE carried out on a 7.5-15% gradient gel. The proteolytic activities of the purified enzyme were specifically inhibited by L-trans-epoxy-succinylleucylamide (4-guanidino) butane (E-64) and iodoacetic acid. The enzyme, cysteine protease. showed the maximum proteolytic activity at pH 6.0 in 0.1 M buffer, and degraded extracellular matrix proteins such as collagen and fibronectin with different activities. It is suggested that the cysteine protease may playa role in the nutrient uptake of N. seoulense from the host intestine.

• Journal of Applied Biological Chemistry
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• 제59권4호
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• pp.285-288
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• 2016

단백질 분해효소는 단백질 내 아미노산의 펩티드 결합을 가수분해하며, 산업분야에서 가장 많이 사용되는 효소이다. 이전의 논문에서 부패한 나무로부터 Pseudoxanthomonas sp. WD12와 WD32를 분리하였다. 분비된 단백질 분해효소의 특성을 조사한 결과 WD12는 pH 9.0, $50^{\circ}C$, WD32의 경우 pH 8.0, $45^{\circ}C$에서 최적 활성을 나타내었다. 최적조건하에서 최고의 활성은 WD12는 768 unit/mL로 WD12의 활성이 WD32보다 2.6배 높았다. 금속 이온에 대한 분비효소 영향을 조사한 결과 두 균주 모두 KCl, NaCl, $CaCl_2$, $MnSO_4$를 첨가했을 때 활성이 증가하였으며, $AgNO_3$, $CuSO_4$, $FeCl_3$, $AlCl_3$를 첨가했을 때는 감소하였고, 최고의 활성은 $MnSO_4$의 첨가했을 때 두 균주 모두 활성 증가를 보인 반면 $FeCl_3$, $CuSO_4$는 활성저해를 보였다. 신종으로 생각되는 WD12 균주의 효소는 알칼리성 조건의 산업 환경에서 이용가능 하다고 생각된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권3호
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• pp.224-229
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• 2003

경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주 KP-364를 선별하여 본 효소를 정제하고 일반적인 특성을 조사하였다. 본 효소는 ulkafiltration, ammonium sulfate fiactionation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 회수율은 25.2%이었다 SDS-PAGE와 gel filtration으로. 단일성과 분자량을 추정한 결과 전기영동 상에 단일 band를 나타내었으며 분자량은 약 36,000 dalton이였으며 1개의 subunit로_구성되어 있었다. 효소반응의 최적조건을 검토한 결과 최적 pH는 6.5, pH 3.0에서 10.0까지 90%이상의 활성을 나타냈으며 반응 최적 온도는 $37^{\circ}C$이였고 $60^{\circ}C$에서 1시간동안 80%이상의 활성을 유지하였다. 정제된 효소의 활성은$ FeSo_4$, KCI, $Li_2$$SO_4$를 첨가하였을 때 증가하였으며 $Ag_2$$SO_4$, $CuCl_2$, $HgCl_2$에 의해 저해되었다. 또한 EDTA, EGTA에 의해 저해되는 것으로 보아 metalloprotease의 일종이라고 판단되며 $Li^{ +}$를 cofactor로 함유하고 있는 것으로 조사되었다.

• KSBB Journal
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• 제19권4호
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• pp.295-300
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• 2004

해양유래미생물에서 gelatin 분해능이 우수한 균주 Vibrio vulnificus CYK 279H를 이용하여 최적 효소활성조건을 검토하였다. 온도와 초기 pH는 $25^{\circ}C$, 7.5에서 높은 것으로 나타났으며, 단당, 이당, 다당류를 첨가하여 탄소원의 영향에서는, 0.3% (w/v) galactose 에서, 유$.$무기 질소원으로는 0.6% (w/v) yeast extract와 4.0% (w/v) gelatin, 0.2% (w/v) (NH$_4$)$_2$SO$_4$에서 효소활성이 가장 높게 나타났다. 염 농도로는 2.0% (w/v) NaCl, 금속이온은 Fe$^{2+}$를 첨가하였을 때 효소활성이 증가되었다. 선정된 최적배양조건에서 Vibrio vulnificus CYK 279H를 배양한 결과, 18 h 배양시 73 Unit/1로 기본배지 20 Unit/1보다 활성이 3.7배 증가한 것으로 확인되었다.