• Applied Biological Chemistry
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• 제43권3호
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• pp.169-173
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• 2000

저온에서 높은 세척력을 갖는 호소세제의 개발을 위하여 토양으로부터 alkaline protease의 활성이 높은 균주를 분리, 동정하였으며, 호소의 성질을 조사하였다. 분리균주의 형태적 특징은 Gram 음성균 이고, 간균$(0.6{\sim}0.7{\times}1.3{\sim}2.6\;{\mu}m\;in\;size)$ 형태를 하고 있으며, 운동성을 보였다. 또한 catalase 양성, aesculin, gelatin 및 casein 분해능이 있었다. 분리균주의 세포벽 구성 성분은 meso-DAP를 함유하였으며, G+C mol 함량은 43.3%를 나타내었다. 이러한 형태적, 생리 생화학적 특성의 결과로부터 분리 균주는 Acinetobacter 속으로 동정되었다. 분리 균주를 이용한 alkaline protease의 생산은 초기 pH 10과 $40^{\circ}C$에서 36시간 배양하였을 때 3,300 D.U/mL로 최대 효소 활성을 보였으며, 최적 pH와 온도는 9와 $60^{\circ}C$이었다. 또한 본 균주에 의해 생산된 alkaline protease는 두개의 활성 band를 나타내었다.

• 한국잠사곤충학회지
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• 제35권1호
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• pp.1-6
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• 1993

뽕나무종자(Morus Lhou Koidz)를 28$^{\circ}C$의 암소에서 5일간 발아시키면서 매일 hormone을 농도별로 처리한 후 protease 활성의 변화를 각각 비교하였다. 또 효소활성이 가장 높았던 4일째 시료로부터 protease를 추출하여 부분정제하고 그 효소의 특성을 조사하였다. 그 결과는 다음과 같다. 1. Hormone 처리구의 발아종자는 효소활성이 GA3가 가장 높았고 그 다음이 zeatin과 kinetin이었으며 hormone 혼합구는 GA3 10$\mu$M에 zeatin 10$\mu$M과 kinetin 10$\mu$M을 혼합한 구가 가장 활성이 높았다. 2. 효소활성은 10ml 주입한 한천배지구가 대조구보다 4일째 약 14% 증가하였다. 3. 뽕나무씨앗으로부터 추출한 protease는 DEAE-Toyopearl 650M, Butyl-Toyopearl, Hydrozyl apetite 및 Toyopearl HW55M 방법으로 조효소의 313배로 정제하였다. 정제한 후 효소의 비활성이 175unit/mg였다. 4. 효소반응이 최적 pH는 5.0, 최적온도는 37$^{\circ}C$였다. 효소는 37$^{\circ}C$이하에서는 안정하였으나 52$^{\circ}C$에서는 10분간 처리로 약 50% 감소하였다. 5. 효소활성을 수은, 철, 아연 및 구리 이온에 의하여 활성이 억제된 반면 Mg, Cr 및 A1은 촉진되었다. 또한 효소활성은 azocasein을 기질로 했을 때 Km값은 0.89mM이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제30권1호
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• pp.26-32
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• 2002

저염상태에서 속성 발효를 통한 멸치 어간장의 대량 생산을 위하여 시중 어간장에서 단백질 분해효소 생산이 우수한 균주를 분리 동정하여, B. amyloliquefaciens HTP-8로 명명하였다. 효소생산을 위한 배양 최적온도, 초기 pH, 그리고 배양시간은 각각 $30^{\circ}C$, pH 7.0과 3일이었다. Jar fermenter 배양시 pH를 7.0으로. 조절한 경우가 조절하지 않은 경우에 비해 효소활성이 최대에 이르는 시간이 단축되었다. 효소의 부분정제는 조효소액을 80% ammonium sulfate에 의한 염석과 CM-Sephadex C-50을 이용하여 정제한 결과, 수율이 0.4%, 정제배수가 43.0배였다. 정제효소의 최적 pH와 온도는 pH 10.0과 $50^{\circ}C$였으며, pH 7.0~l2.0의 pH 범위와 $40^{\circ}$ 이하에서 안정하였다. 금속이온 중 $Ag^{＋}$ /, $Ba^{2＋}$ /에 의하여 효소활성이 저해되었다. 한편, 본 효소는 PMSF에 의하여 선택적으로 활성이 억제됨으로써 활성부위에 serine을 가진 serine protease에 속하는 것으로 판단되었다.

• 생명과학회지
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• 제7권3호
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• pp.228-233
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• 1997

Artemia franciscana의 cyst에서 protease를 정제하가 위해 세포를 파쇄하여 원심 분리한 후 상등액을 회수하였다. 그상등액에서 40-60% 황산암모늄을 첨가하여 침전시켜서 염을 제가한 후, Sphadex G-200 및 DEAE-Sephadex A-50 column chromatography를 하여 정제한 후 본 효소의 특성을 조사한바 그 특성은 아래와 같았다. 정제 과정을 거치는 동안, 비활성은 13.64배 증가하였고, 수율은 7%였다. 그리고 이효소는 pH 6에서는 안정하였으나, pH 8이상에서는 대부분의 활성이 실활 되었고, 최적 pH는 3.0이었다. 따라서 이 효소는 전형적인 산성 pro-tease로 판정되었다. 본 효소는 60$^{\circ}$C이상의 온도에서 대부분 실활 되었고, 최적 활성 반응 온도는 35$^{\circ}$C였다. 금속 이온의 영향을 알아본 결과, $Cu^{++}$, Z$Zn^{++}$, $Fe^{++}$가 효소의 활성을 저해하였고, 중금속 chelator인 EDTA는 반대로 효소 활성을 증가시켰다. 단백질분해효소에 특이적인저해제를 첨가하여 실험한 결과 thiol protease ingibitor인 antipain, chymostatin, leupeptin, E-64, iodoacetate등에 효과적으로 효소활성이 저해받으므로 본 효소는 acid thiol protease라 판정했다.

• 미생물학회지
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• 제47권3호
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• pp.194-199
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• 2011

알칼리성 protease를 생산하는 호알칼리성 균주를 분리하여 Bacillus pseudofirmus HS-54로 동정하였고, HS-54가 생산하는 알칼리성 protease를 ammonium sulfate 침전, DEAE cellulose chromatography, sephadex G-100 gel filtration을 통과시켜 정제하였는데, 정제된 protease의 분자량은 27 kDa이었다. 정제된 효소의 반응최적 pH는 10.0이었고 pH 7.0-11.0에서 비교적 안정하였다. 또한 정제된 효소의 반응최적 온도는 $50^{\circ}C$이었고 $10-55^{\circ}C$에서 안정하였다. 금속이온에 대한 영향은 $Ca^{2+}$와 $Mg^{2+}$ 등에 의해 효소활성이 촉진되었으나, $Hg^{2+}$, $Zn^{2+}$, $Cu^{2+}$, $Al^{3+}$ 등에 의해서 효소활성이 저해되었다. 본 효소는 PMSF에 의해 강하게 저해를 받는 것으로 보아 serine protease에 속하는 것으로 판단된다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제8권2호
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• pp.77-85
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• 1980

Protease의 생산능이 우수한 Asp. oryzae KC-15를 선정하고 다음과 같은 결과를 얻었다. 1. Wheat bran medium에서의 최적배양시간은 acid protease와 neutral protease는 약 48시간, alkaline protease는 약 72시간이었고 본 균주가 생산하는 protease는 alkaline protease와 neutral pro-tease가 주체이며 acid protease는 극히 미약하였다. 2. Wheat bran medium 에 $Na_2$HPO$_4$, NaH$_2$PO$_4$, Glucose, rice powder 및 Na-glutamate의 첨가는 alkaline protease와 neutral psotease의 생산에, (NH$_4$)$_2$HPO$_4$, glucose 및 rice powder의 첨가는 acid protease의 생산에 효과적이었다. 3. 조효소의 특징(equation omitted) 4. 내열제로서 NaH$_2$PO$_4$가장 효과적이었으며 최적첨가량은 alkaline protease와 neutral protease 에 대하여는 10mg, acid protease에 대하여는 5mg 이었다. 5. 6$0^{\circ}C$ 이상에서는 NaH$_2$PO$_4$의 내열효과는 거의 인정할 수 없었다. 6. NaH$_2$PO$_4$10mg을 첨가하고 55$^{\circ}C$에서 30분간 처리하였을 때의 잔존활성은 alkaline protease는 약 58%, neutral protease는 약 57%, acid protease는 약 55 %이었다.

• 한국미생물·생명공학회지
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• 제31권3호
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• pp.224-229
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• 2003

경기도 일대의 가금류 공장부근 토양로부터 keratinolytic protease 생산성이 우수한 균주 KP-364를 선별하여 본 효소를 정제하고 일반적인 특성을 조사하였다. 본 효소는 ulkafiltration, ammonium sulfate fiactionation, DEAE-cellulose ion-exchange chromatography, Sephadex G-150 gel filtration 등을 통하여 정제되었으며 회수율은 25.2%이었다 SDS-PAGE와 gel filtration으로. 단일성과 분자량을 추정한 결과 전기영동 상에 단일 band를 나타내었으며 분자량은 약 36,000 dalton이였으며 1개의 subunit로_구성되어 있었다. 효소반응의 최적조건을 검토한 결과 최적 pH는 6.5, pH 3.0에서 10.0까지 90%이상의 활성을 나타냈으며 반응 최적 온도는 $37^{\circ}C$이였고 $60^{\circ}C$에서 1시간동안 80%이상의 활성을 유지하였다. 정제된 효소의 활성은$ FeSo_4$, KCI, $Li_2$$SO_4$를 첨가하였을 때 증가하였으며 $Ag_2$$SO_4$, $CuCl_2$, $HgCl_2$에 의해 저해되었다. 또한 EDTA, EGTA에 의해 저해되는 것으로 보아 metalloprotease의 일종이라고 판단되며 $Li^{ +}$를 cofactor로 함유하고 있는 것으로 조사되었다.

• 한국식품과학회지
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• 제13권3호
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• pp.241-246
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• 1981

소화효소제(消化酵素劑) 생산(生産)에 이용(利用)하기 위하여 공기(空器)중(中)에서 내산성(耐酸性) protease 및 amylase 생산능(生産能)이 강(强)한 균주(菌株)를 분리(分離), 선정(選定)하고 선정균(選定菌)의 균학적(菌學的) 성질(性質)을 검토(檢討)하였다. 아울러 생성효소(生成酵素)의 내산성(耐酸性)(반응(反應) pH와 효소활성(酵素活性)과의 관계(關係)과 효소(酵素) 생산조건(生産條件)을 검토(檢討)하였다. 1. 선정균주(選定菌株)는 내산성(耐酸性) protease 및 amylase를 강(强)하게 생산(生産)하는 균주(菌株)로서 Raper와 Fennel의 manual에 의(依)하여 Aspergillus niger로 동정(同定)되었다. 2. 선정균(選定菌)의 protease는 pH 2.0에서 최대활성(最大活性)을 나타냈으며, ${\alpha}-amylase$는 $pH4{\sim}5$, glucoamylase는 $pH3{\sim}5$에서 최대활성(最大活性)을 나타냈다. 3. 밀기울 배지(培地)에 배양시(培養時) protease(pH 2.5에서의 활성)생산(生産)의 최적조건(最適條件)은 $30^{\circ}C$, $2{\sim}3$일간(日間)이며 , ${\alpha}-amylase$ 및 glucoamylase(pH3.0 에서의 활성(活性))의 경우는 $30^{\circ}C$, 3일간(日間)이었다. 4. 밀기을배지(培地)에 옥수수전분을 2% 첨가(添加)한 경우 내산성(耐酸性) protease 및 glucoamylase의 생성(生成)이 약(約) 20%씩 증가(增加)되었다. 5. 밀기울배지(培地)에 황산암모늄 0.3%를 첨가(添加)한 경우 내산성(耐酸性) protease 및 glucoamylase의 생성(生成)이 증가(增加)되었으며, 특(特)히 내산성(耐酸性) protease의 생성(生成)에 효과적(效果的)이었다.

• Fisheries and Aquatic Sciences
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• 제3권3_4호
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• pp.188-194
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• 2000

A protease purified from hepatopancreas of shrimp, Penaeus japonicus, had maximum activity at $70^{\circ}C$ and in neutral and alkaline pH ranges. Specific activity at optimum reaction condition of the protease was estimated to be approximately 12 U/mg/min. The protease was stable in neutral and alkaline pH ranges and activity was retained after heat treatment at $50^{\circ}C$ for 30 min. Apparent $K_m$ and $V_{max}$ value against casein substrate were estimated to be $0.29\%$ and $7.8see^{-1}$, respectively, and those against N-CBZ-L-tyrosine p-nitropheny1 ester (CBZ­Tyr-NE) were 0.38 mM and $2,400 see^{-1}$, respectively. The N-termina1 sequence of the protease showed high homology to the trypsin from same species and the proteases from shrimp. Myosin heavy chain (MHC) from shrimp tail meat was the most susceptible to the protease and actin/tropomyosin were degraded progressively during 4 hr incubation, but to a lesser degree than MHC.

• Applied Biological Chemistry
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• 제44권4호
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• pp.246-250
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• 2001

토양시료로부터 높은 활성의 pretense를 생산하는 세균을 수십종 분리하였다. 분리된 세균중에서 protease활성과 성장속도면에서 가장 우수한 균주를 선별하여 WRD-2로 명명하였으며, 형태학적, 생화학적 및 생리학적 특성을 조사한 후 Bacillus sp로 동정되었다. WRD-2조효소액의 protease 최적 활성은 pH 6.0, 온도는 $40^{\circ}C$로 중성 protease임을 알 수 있었고, 온도 $20{\sim}40^{\circ}C$에서 높은 protease활성을 나타내었다. 또한, 초기 pH에 따른 protease 활성에서는 pH 6에서 가장 높은 활성을 나타내었고, 배양배지의 영향은 탄소원으로 maltose 3%, 질소원으로 yeast extract 4%에서 가장 높은 pretense활성을 나타내었다.